复方地黄对SAM-P/8小鼠体内脑组织SOD与ATP酶改变的影响

[摘要] 目的：研究复方地黄对SAM-P/8痴呆小鼠模型脑SOD、ATP酶的影响。方法：SAM-P/8痴呆小鼠30只，随机分为模型组、脑复康组、复方地黄组，每组10只，并随机选取10只7个月健康小鼠作为老年对照组，10只2个月龄小鼠作为青年对照组，观察小鼠SOD、Na+-K+ -ATP酶及Ca2+-ATP酶活性的变化，并观察复方地黄对痴呆小鼠协调运动功能的影响。结果：复方地黄能改变SAM-P/8痴呆小鼠的协调运动功能，并能增强SOD、Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶的活性。结论：复方地黄可改变SAM-P/8痴呆小鼠SOD、Na+-K+ -ATP酶及Ca2+-ATP酶的活性，表明复方地黄对阿尔茨海默病(AD)有保护和治疗作用。

[关键词] SOD；Ca2+-ATP酶；复方地黄

[中图分类号] R285.5[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）10（b）-008-02

Effect of Compound Dihuang on SOD and ATP enzyme in SAM-P/8 mice brain

SUN Li-hui, HOU Jin-cai, HOU Kui-yuan, FEI Hong-xin*

(Qiqihar Medical University, Qiqihar 161042, China)

[Abstract] Objective: To observe the influence of Compound Dihuang on SOD and ATP enzyme in the brain of SAM-P/8 dementia mice. Methods: SAM-P/8 mice were divided randomly into model group, pisacetam group and Compound Dihuang group, and then the changes of SOD, Na+-K+-ATP enzyme, Ca2+-ATP enzyme and coordinated motion function of each group were observed. Results: Compound Dihuang changed the coordinated motion function of SAM-P/8 dementia mice and enhanced the activities of SOD, Na+-K+-ATP enzyme as well as Ca2+-ATP enzyme. Conclusion: Compound Dihuang can change the activities of SOD, Na+-K+-ATP enzyme and Ca2+-ATP enzyme of SAM-P/8 dementia mice, which indicates that Compound Dihuang shows a protective and therapeutical effect on Alzheimer disease(AD).

[Key words] SOD; Ca2+-ATP enzyme; Compound Dihuang

阿尔茨海默病(AD)是成年痴呆中最常见的一种类型，其病因十分复杂，发病机制至今不清。基于中医理论、已有的研究成果及诊治AD的经验，祖国医学认为AD的发病机制为肾精亏虚、痰浊阻窍、淤血阻滞。复方地黄有益肾健脾、祛痰清瘀、滋阴养血的作用，研究报道应用此药物防治AD，已取得较好的效果[1-3]。在此基础上，继续选用SAM-P/8小鼠，对复方地黄的疗效作进一步观察，为临床用药提供理论依据。

1材料与方法

1.1 材料与试剂

超纯水仪系Purelab plus公司产品；日本快速老化痴呆小鼠SAM-P/8，天津中医学院第一附属医院实验动物中心提供；健康昆明种雄性小鼠由齐齐哈尔医学院实验动物中心及哈尔滨医科大学实验动物中心提供；SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、考马斯亮蓝测定试剂盒均由南京生物工程公司提供。

1.2 小鼠分组

将30只SAM-P/8小鼠随机分为模型组(M)、脑复康组(N)、复方地黄组(F)，并随机选取10只7个月健康小鼠作为老年对照组(L)，10只2个月龄小鼠作为青年对照组(Q)。复方地黄灌胃液2 ml/(只・d)(生药475 mg/ml)；脑复康水溶液2 ml/(只・d)，青年组及老年组以等量水灌胃。3周后处死小鼠。

1.3 行为学测试

处死小鼠前先进行行为学测试，采用爬杆法：使用一根光滑的金属棒垂直倒立，将小鼠置于棒的顶端，头向下使其自然向下爬行，观察小鼠的协调运动情况。协调运动的标准可分为：0级，一步一步向下爬；1级，向下爬行；2级，不能抓住棒；3级，翻正反射消失。在0~3级又设0.5级、1.5级和2.5级。小鼠的正常分值范围为0~0.5级。

1.4 检测SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性

小鼠测试行为学后，断头处死，进行脑组织称重，加入4倍体积冷生理盐水匀浆, 3 000 r/min离心10 min，弃沉淀，得去核上清。将此上清10 000 r/min离心10 min，得去膜上清，沉淀为破碎细胞膜和线粒体等。用10 mmol/L Tris缓冲液洗2次,10 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用Tris缓冲液悬浮，供膜SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶测定用。SOD测定采用黄嘌呤氧化酶法，Na+-K+-ATP酶测定采用定磷法，蛋白测定采用考马斯亮蓝蛋白定量法，测定步骤按考马斯亮蓝试剂盒说明进行。

1.5 统计学方法

数据以均数±标准差(x±s)表示，以SPSS 10.0统计软件分析，计量资料采用t检验分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠协调运动水平分析结果(表1)

由表1可知，F组与M组比较，小鼠协调运动能力有显著差异(P

2.2小鼠脑组织SOD测定分析(表2)

由表2可知，F组与M组比较，SOD活性明显增强(P

2.3 小鼠脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性水平(表3)

由表3可知，F组与M组比较，ATP酶活性均明显增强(P

3 讨论

AD的模型有很多种，如转基因动物模型、兴奋性毒素损害模型、淀粉样蛋白诱发动物模型、化学损伤模型及老年动物等。在这些模型中，转基因动物模型最明显的优点是模拟了AD的神经病理学改变，包括细胞淀粉样蛋白沉积、老年斑的形成、神经胶质细胞增生以及与AD相似的脑区特异性突触密度丧失等。当前公认的AD动物模型首推SAM-P/8小鼠。

SAM为快速老化小鼠，是日本京都大学竹田俊男教授开发的一种较理想的快速老化动物模型，具有寿命短、老化快、老化病理改变典型等优点。SAM-P/8为SAM中的一个品系，以痴呆为主要特征，其组织病理学基础是部分脑区神经元及神经纤维坏死，脑皮质萎缩。

祖国医学认为，老年性痴呆以本虚为主，兼有标实之证，本虚肾精亏虚，心脾两虚、标实则为痰浊阻窍，气滞血淤中，气血不足是形成痰浊淤血的病因，痰浊淤血又使脏腑功能紊乱，加速气血亏损。复方地黄组行为学分值分数为(1.250±0.463)分，与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示复方地黄可以改善老年痴呆模型小鼠的痴呆状态。另外，复方地黄组SOD活性较高，为(240.213±8.635)分，与对照组比较有显著差异(P＜0.05)，提示复方地黄可以增强SOD的活性，SOD 作为体内重要的抗氧化酶，在氧化防御体系中起着重要作用，可以延缓衰老。复方地黄还可以增强Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性，对机体的能量供应起到重要作用[4,5]。

综上所述，复方地黄能够改变SAM-P/8痴呆小鼠的协调运动功能，增强SOD、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性，表明复方地黄对AD有保护和治疗作用。

[参考文献]

[1]Goate A, Chartier-Harlin MC, Mullan M, et al. Segregation of amissense mutation in theamyloid precursor protein gene with familial Alzheimer's disease [J].Nature,1991,349:704-706.

[2]Li YC, Bao YM, Jiang B,et al. Catalpol protects primary cultured astrocytes from in vitro ischemia-induced damage[J]. Int J Dev Neurosci,2008, 26(3-4):309-317.

[3]魏昌秀,李庆明,蒙荣森.中药复方脑还丹对快速老化鼠SAM-P/8海马CA1区超微结构的影响[J].贵州医药,2005,29(9):790.

[4]Tan W, Song CS, Tan HL,et al. Hematopoietic effect of siwu decoction in the mice with blood deficiency induced by compound method of bleeding, starved feeding and exhausting[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi,2005,30(12):926-929.

[5]孙丽慧,陆佰荣,孙广惠.脑健胶囊防治老年性痴呆神经递质改变实验研究[J].医学研究通讯,2002,31(8):38.

(收稿日期：2008-04-21)

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