巨细胞病毒荧光定量PCR与ELISA检测比较

【摘要】目的 对HCMV-DNA荧光定量PCR检测方法进行评价。方法 收集2011年1月至2011年7月我院临床高度怀疑HCMV感染病例120例，采集血清样本，分别用Real-time PCR检测HCMV DNA 和ELISA方法检测HCMV IgM抗体。120例病例中有86例采集了尿液标本用Real-time PCR检测HCMV DNA和ELISA方法检测HCMV IgM抗体。结果 血清巨细胞病毒荧光定量PCR与ELISA检测方法阳性率差异显著，荧光定量PCR方法阳性率高；尿液标本巨细胞病毒荧光定量PCR与ELISA检测方法阳性率差异显著，荧光定量PCR方法阳性率更高；尿液标本与血清标本HCMV-DNA阳性率差异显著，尿标本阳性率更高。结论 荧光定量PCR方法检测HCMV灵敏度高，尿液标本对诊断HCMV感染检出率更高。

【关键词】巨细胞病毒；DNA；IgM

人巨细胞病毒( human cytomegalovirus, HCMV)为疱疹病毒科β属的双螺旋DNA病毒, 具有高度种属特异性和潜伏-再激活的生物学特性。我国是人巨细胞病毒感染的高发地区，可导致单一器官或多系统疾病，越来越引起临床医生的关注，本文用荧光定量PCR方法和ELISA方法检测120例临床高度怀疑HCMV样本，对两种方法进行了比较。

1材料和方法

1.1标本来源：选择我院2011年1月至2011年7月临床高度怀疑HCMV感染病例120例，其中男75例，女45例，年龄范围在12-56岁。

1.2标本采集：血清标本：采静脉血3ml注入无菌干燥试管中，在室温下放置1h后，2500 rpm离心20min，取血清-70℃低温冰箱储存待测。尿液标本：清洁小儿外阴, 留取新鲜尿液（晨尿）1ml于1.5ml无菌Eppendoff管中，15000rpm离心，沉淀即为待测标本。

1.3主要试剂：人巨细胞病毒核酸扩增荧光定量检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司。人巨细胞病毒IgM 抗体诊断试剂盒购自北京贝尔生物工程有限公司。

1.4主要仪器：荧光定量PCR仪为美国ABI7000，酶标仪为Anthos2010。

1.5检测方法：120份血清样本同时用Real-time PCR 方法检测HCMV-DNA和ELISA方法检测HCMV-IgM 抗体，120病例中采集到86份尿液标本分别用Real-time PCR方法和ELISA方法检测HCMV。操作均按说明书进行。

2实验结果

2.1血清样本Real-time PCR和ELISA实验方法的比较：120例血清样本，HCMV-DNA阳性25例，阴性95例，阳性率21.00%；HCMV-IgM阳性19例，阴性101例，阳性率16.00%。配对X2检验P=0.036

2.2尿液标本Real-time PCR和ELISA实验方法的比较：86例尿液样本，HCMV-DNA阳性30例，阴性50例，阳性率35.00%；HCMV-IgM阳性13例，阴性69例，阳性率15.00%。配对X2检验P=0.036

2.3血清样本与尿液标本Real-time PCR检测的比较：120血清样本Real-time PCR检测阳性25例，阴性95例；86尿液标本阳性30例，阴性50例，配对X2检验P=0.013

2.4临床资料分析：在30例尿液HCMV-DNA阳性病例中，病毒性肝炎13例，贫血6例，手术感染3，血小板减少症5例，畸形1例，其它2例。病毒性肺炎所占比例最高达43.00%

3讨论

人体感染HCMV以后3～5天即可出现IgM抗体，其阳性是诊断早期感染的可靠指标，并表明为活动性感染，但IgM抗体在血液仅存在12～16周的窗口期,临床实验室检测阳性率较低，并且由于免疫抑制效应，机体的免疫功能低下，新生儿和幼小婴儿产生IgM的能力较弱，导至出现假阴性[2]，除此之外IgM阳性也有可能其他疱疹类病毒感染造成的交叉反应以及类风湿因子引起的假阳性，因此孤立的IgM指标诊断HCMV感染并不可靠。HCMV感染多呈潜伏感染,多数症状隐匿，Real-time PCR对HCMV潜伏感染检出率较高，对病毒检测可以量化,因此对检测病毒的活动性、评价抗病毒疗效非常积极的意义[3]。对HCMV感染的患儿2年的随访，HCMV-DNA载量较高的显示预后不良，而病毒载量较低或HCMV-DNA阳性而潜复感染的患儿预后较好[4]。因此两种以上的检测方法联用显得十分必要。本文HCMV的检出率与多数资料相比[1]，相对较低，除了与研究对象、试剂等因素有关外，亦和HCMV病毒感染机体的复杂性相关，需要进一步分析。

HCMV感染机体后，为以潜伏或持续复制形式存在于宿主细胞中, 但哪些细胞是病毒的潜伏位点, 目前仍未十分清楚。有资料表明血管系统(内皮细胞和平滑肌细胞)可能是其主要的潜伏部位[5]，呼吸系统、泌尿系统亦是其潜伏部位。但本文并无泌尿系统HCMV病毒的活动性感染，而尿液较血清标本的检出率更高，其机理也并不明朗。

机体对HCMV 的易感性取决于年龄, 免疫状态等因素。但本文0～3岁和～7岁年龄组HCMV感染并无差异，畸形出现在0～3岁组，为先天性宫内感染。性别差异引起的HCMV感染差异也并不显著。

人体内多种组织器官都查到HCMV 的存在[6]， CMV可通过呼吸道、消化道、血液、体液及移植器官传播不但引起病毒性肺炎、肝炎、贫血，而且是多种疾病的致病因素。 HCMV是动脉样硬化致病因素之一，还和人体肿瘤相关[7]，也是导致婴幼儿智力低下和非遗传性先天性耳聋的最常见原因[8]本文HCMV感染引起的病毒性肺炎所占比例最高达31.75%，应引起重视。

参考文献

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