电针对脑出血模型大鼠脑组织一氧化氮、内皮素、总抗氧化能力的影响

［摘　要］　方法：选择胶原酶加肝素联合注射法诱导脑出血大鼠模型，观察电针不同穴位对大鼠脑组织一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、总抗氧化能力(T-AOC)的影响。结果：针"水"组能明显降低造模后脑组织中升高的NO，与模型组相比，P＜0.05；针"水"组、针"风"组皆能降低造模后脑组织中升高的ET，与模型组相比，P＜0.05；且针"水"组、针"风"组还能提高造模后脑组织中降低的T-AOC，与模型组比，P＜0.05。结论：针"水"组和针"风"组皆能降低脑出血模型血肿周围脑组织中升高的ET含量，提高其抗氧化能力，且针"水"组尚能降低血肿周围脑组织中升高的NO含量。

［主题词］　脑出血/针灸疗法；电针；一氧化氮/分析；内皮缩血管肽类/分析

TheEffectofElectroacupunctureonContentsofNO,ETandT-

AOCofBrainTissueintheRatofCerebralHemorrhage

DaiGaozhong1,ChenYuelai2,GuFalong2,etal.

(1.LonghuaHospitalAffiliatedtoShanghaiUniversityofTCM,Shanghai200032,Ch

ina;2.DepartmentofAcupunctureandMoxibustionYueyangHospitalAffiliate

dtoShanghaiUniversityofTCM)

［Abstract］　Methods

Collagenaseandheparinwereinjectedintocaudatenucleustoestablishcereb

ralhemorrhageratmodel.Theeffectofelectroacupunctureoncontentsofnitr

icoxide(NO)andendothelin(ET),andtotalanti-oxidationcapability(T-

AOC)inbraintissuewereobserved.Results

ThecontentofNOinthe"Shuigou"acupuncturegroup,andthecontentsofETinth

e"Fengfu"acupuncturegroupandthe"Shuigou"acupuncturegroupweredecreas

edsignificantly(allP＜0.05)andtheT-AOCraisedsignificantly(P＜0.05)

ascomparedwiththemodelgroup.Conclusion

AcupuncturecanreducethecontentsofETandNO,andincreasetheT-

AOCinbraintissueoftheratofcerebralhemorrhage.

［Keywords］

CerebralHemorrhage/acupther;Electroacupuncture;Nitricoxide/anal;End

othelins/anal

笔者既往的研究发现，电针针"水"组、针"风"组均可明显的改善胶原酶加肝素联合注射法诱导大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损，降低因出血而致的血肿周围组织的水肿。本实验旨在观察电针针"水"组、针"风"组对大鼠脑出血模型脑组织NO，ET，T-AOC含量的影响，探讨电针对脑出血大鼠保护作用的可能机制。

1　材料与方法

1.1　实验动物

雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250±15g，购自上海中医药大学实验动物中心。

1.2　实验主要仪器

大鼠立体定向仪〔上海花木农机厂(江湾C型)〕、微量注射器(上海安亭微量进样器厂)、低温高速离心机SCR20BA(日本日立公司)、核酸蛋白分析仪DU-640(Backman公司)、XW-80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)、HH-W21-600电热恒温水箱(上海医用恒温设备厂)、高效液相色谱仪(Waters公司)、G6805-Ⅱ电针仪(上海医用电子仪器厂)。

1.3　主要试剂与药品

Ⅶ型胶原酶〔Sigma公司(1500U)〕，肝素市售产品，NO，T-AOC，考马斯亮兰试剂盒(南京建成生物工程公司)，ET放免试剂盒(北京东亚免疫技术研究所)。

1.4　方法与步骤

(1)造模与分组

①造模：参照任泽光［1］等法造模，大鼠用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/kg)，俯卧固定于立体定位仪上，使前囟与后囟相平，剪去顶毛，局部皮肤消毒，头皮正中切口0.8cm，暴露前囟，于前囟后0.2mm，中线右旁开2.9mm处钻孔，用固定于立体定向仪上的微量注射器(5，针头直径0.7mm)，沿钻孔进针，深约6mm(此处为尾状核位置)，缓慢注入含0.5U/Ⅶ型胶原酶和7U/肝素的生理盐水1.2，留针8min后退针，缝合头皮，其中假手术组以等量生理盐水代替。

②分组与治疗：将大鼠随机分成5组，正常组8只，假手术组8只，模型组7只，针"水"组(取穴"水沟""上星")8只。针"风"组(取穴"风府""哑门")7只。将大鼠清醒固定，取穴方法参照《实验针灸学》［2］并结合人体的模拟位置取穴，以消毒的1寸针灸针常规"风府""哑门"穴直刺，"上星""水沟"穴平刺。电针参数：疏密波，电流强度以大鼠肢体微颤为度。留针为30min，每天1次。正常组、假手术组、模型组只给予固定。

以上动物造模后2h给予相应处理，连续3d，取材前禁食12h，自由饮水，末次治疗1h后，断头处死取脑，以微量注射器针眼为中心按冠状面切开脑组织，取血肿周围组织分别测NO，ET，T-AOC含量。

(2)观察指标和方法

①大鼠脑组织NO的测定：采用酶法测定，药盒购自南京建成生物工程公司。标本制作：取脑组织在冰浴下用冰生理盐水制成10%的脑组织匀浆，4℃，以3000r/min离心15min，取上清液，置-70℃冰箱待测。操作步骤：按照说明书进行。

②大鼠脑组织T-AOC的测定：按照T-AOC的测定试剂盒说明书测定，药盒购自南京建成生物工程公司。标本制作：同上。

③大鼠脑组织ET的测定：采用放免分析法测定，药盒购自北京东亚免疫技术研究所，操作步骤按照说明书进行。标本制作：同上。

1.5　数据处理：采用单因素方差分析。

2　结果

2.1　电针对大鼠脑组织NO的影响

造模后，模型组脑组织中的NO含量较假手术组明显升高(P＜0.05)，而针"水"组能明显的降低造模后脑组织中上升的NO含量，与模型组相比，差异有显著性意义(P＜0.05)，针"风"组治疗后NO含量虽然有所下降，但和模型组相比，差异无显著性意义(P＞0.05)。见表1。

表1　大鼠脑组织NO含量比较

2.2　电针对大鼠脑组织ET的影响

造模后模型组脑组织中的ET含量较假手术组明显升高(P＜0.05)，而针"水"组、针"风"组能明显降低造模后脑组织中上升的ET含量，与模型组相比P＜0.05。见表2。

表2　大鼠脑组织ET含量比较

与正常组比，*P＜0.05，#P＞0.05；与模型组比，@P＜0.05

2.3　电针对大鼠脑组织T-AOC的影响

造模后，模型组脑组织中的T-AOC含量较假手术组明显降低(P＜0.05)，而电针能明显增高造模后脑组织中降低的T-AOC含量，与模型组相比，P＜0.05，且针"水"组和针"风"组相比，差异无显著性意义(P＞0.05)。见表3。

表3　大鼠脑组织总抗氧化能力比较

因方差不齐进行1g10(x)数据转换，方差齐。与正常组比，#P＞0.05，*P＜0.05；与模型组比，@P＜0.05；与针"水"组比，$P＞0.05

3　讨论

脑出血后在血肿周围存在着继发性的脑缺血，且是脑出血血肿形成后的重要病理变化，是脑出血后引起神经功能缺损的重要性环节，这是由一系列病理生理改变相互影响、相互作用形成有害网络的连锁反应所致。

脑出血时，出血所致的脑组织破坏及其周围组织水肿和缺血缺氧，导致脑组织生成大量自由基。自由基既是脑出血后血肿周围组织缺血缺氧的结果，又是进一步加重脑缺血缺氧的原因。NO作为自由基的一种，对脑损伤的毒性受到人们的重视，其主要毒性表现在：(1)通过使酶失活，抑制线粒体呼吸，导致靶细胞能量迅速衰竭，造成神经元死亡；(2)影响靶细胞的修复和蛋白合成；(3)促进自由基的产生。NO产生神经毒性取决于它的还原状态。还原型NO-能与超氧阴离子迅速反应，生成过氧化亚硝酸，并在酸性环境中进一步分解成具有很强毒性作用的羟基及二氧化氮自由基。前者是NO引起脑损伤最主要的氧自由基，后者作为脂质过氧化的有力激动剂，其毒性远远超过羟基，可加重缺血脑组织的损伤。现已认定，脑缺血引起细胞死亡的关键在于细胞内Ca2＋浓度的增加和NO通路的激活［3］。姜亚军等［4］通过133例脑出血患者和100例健康人血浆NO的对照发现，脑出血患者体内NO代谢反应异常，氧化、抗氧化平衡严重失调，且这一病理改变在脑出血后继发性脑损害形成过程中起着重要作用。本研究表明：脑出血模型组3天后脑组织的NO含量明显的高于正常组和假手术组(P＜0.05)，针"水"组NO含量明显的低于脑出血模型组(P＜0.05)；而针"风"组NO含量和模型组相比虽有所下降，但统计学处理差异无显著性意义(P＞0.05)。提示针"水"组能降低脑组织NO，以降低其对缺血脑组织的损害。另外，通过观察大鼠脑组织的T-AOC发现，脑出血模型组T-AOC较正常组和假手术组降低(P＜0.05)，而针"水"组和针"风"组均能明显地提高脑出血而致降低的T-AOC(P＜0.05)。说明针"水"组既能降低NO等自由基的生成，又能提高大鼠自身的抗氧化能力，从而达到对脑出血后继发性脑损害的保护作用；而针"风"组对脑组织的保护作用可能跟提高大鼠自身的抗氧化能力有关。

血管内皮细胞是位于循环血液与血管壁内皮下组织间的单层细胞，目前认识到内皮细胞并非单纯的管腔内衬，而具有广泛的生理功能。内皮细胞的损伤导致ET的异常表达和释放增加，引起了人们的广泛重视。正常情况下，ET可被内皮细胞降解，浓度维持在很低的水平。此外，内皮细胞间的紧密连接可阻止ET从管腔内漏出，并作用于血管基质膜区。如前所述脑出血后，血肿释放的凝血酶等毒性物质可引起血管内皮细胞的损伤，使血管通透性增加。ET的产生与血管内皮的损伤呈正相关；ET表达和释放增加，它不仅能促进血管平滑肌收缩，加强血管收缩，加重脑组织缺血缺氧，还能增加细胞外Ca2＋内流，并刺激细胞内释放Ca2＋，也可刺激兴奋性氨基酸，使Ca2＋超载，造成对神经元的直接损伤，导致脑组织变性、坏死［5］。本研究表明：脑出血模型组3天后脑组织的ET含量明显的高于正常组和假手术组(P＜0.05)，而针"水"组和针"风"组的ET含量明显低于脑出血模型组(P＜0.05)。提示电针能改善脑出血模型所造成的ET表达和释放增加，从而发挥对脑组织的保护作用。

综上所述，电针针"水"组(取穴"水沟"、"上星")和针"风"组(取穴"风府"、"哑门")皆能改善脑出血模型所造成的血肿周围脑组织ET表达和释放增加，提高其抗氧化能力，且针"水"组在提高血肿周围脑组织抗氧化能力的同时，尚能降低血肿周围脑组织NO自由基的生成。既往笔者的实验也表明电针"水沟"组、电针"风府"组均可明显的改善胶原酶加肝素联合注射法诱导大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损，降低因出血而致的血肿周围组织水肿。但电针"水沟"组改善大鼠脑出血模型的脑组织形态学损害和神经行为功能的缺损方面优于电针"风府"组。这说明电针"水沟""上星"和电针"风府""哑门"不同的配穴，其作用有其特异性。

4　参考文献

1　任泽光，吴建中.大鼠脑出血模型.中华神经外科杂志，1993；9(4)：205

2　林文注，王佩.实验针灸学.上海：上海科学技术出版社，1999：288

3　SmallDL,BuchanAM.MechanismsofCerebralIschemia:IntracellularCascadesandT

herapeuticInterventions.JCardiothoracVascAnesth,1996；10:139

4　姜亚军，何家声，周君富.脑出血患者氧化抗氧化状态研究.铁道医学，1997；25(6)：335

5　王云彦，张庆林，江玉泉，等.内皮素与脑卒中.脑与神经疾病杂志，1996；4(3)：187

(收稿日期：2001-07-19，齐淑兰发稿)