肤康合剂制备及质量控制

1.长江大学附属第一医院，湖北 荆州 434000；2.荆州市第三人民医院，湖北 荆州 434000；3.荆州市中心医院，湖北 荆州 434020

摘要：目的 研制肤康合剂，并建立该制剂的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法鉴别肤康合剂中黄芩、白花蛇舌草，高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷、芍药苷的含量。色谱柱：Agilent EclipseXDB-C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 ?m）。黄芩苷流动相为甲醇-2%醋酸（55∶45），流速1.0 mL/min，检测波长315 nm；芍药苷流动相为甲醇-水（35∶65），流速0.8 mL/min，检测波长230 nm。柱温为常温，灵敏度为0.08 AUFS，进样量20 ?L。结果 薄层色谱能明显检出黄芩、白花蛇舌草。制剂中黄芩苷和芍药苷的含量分别为2.103～2.145 g/L、1.569～1.650 g/L。黄芩苷进样量在0.54～4.32 ?g范围内呈良好线性关系，平均回收率为99.80%，RSD=1.76%（n=6）；芍药苷进样量在0.14～0.70 ?g范围内呈良好线性关系，平均回收率为99.10%，RSD=1.08%（n=6）。结论 该制备工艺简单，质量控制方法准确可靠、重复性好。

关键词：肤康合剂；质量控制；薄层色谱法；高效液相色谱法；黄芩苷；芍药苷

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.11.018

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）11-0046-03

肤康合剂[鄂药制字（2001）第LZ01-057号]系荆州市中心医院在总结多年临床经验的基础上，根据中医药理论研制的医院制剂，由蒲公英、土茯苓、黄芩等15味中药材组成，具有祛风止痒、活血化瘀等功效，临床主要用于各类皮炎（脂溢性皮炎、神经性皮炎、接触性皮炎）、湿疹、痤疮、银屑病等皮肤病的治疗[1-3]。为更好地控制该制剂的内在质量，保证其临床疗效，本试验采用薄层色谱法（TLC）对制剂中的黄芩、白花蛇舌草进行定性鉴别，用高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中有效成分黄芩苷、芍药苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent-1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）， Agilent-1100系列四元泵，Agilent VWD检测器，Chemstation色谱工作站；超声清洗机KQ-100E型（工作频率40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）。

黄芩苷对照品（批号110715- 200212）、芍药苷对照品（批号110736-200629）、齐墩果酸对照品（批号110709-200505）均购自中国药品生物制品检定所；肤康合剂（荆州市中心医院制备，规格250 mL，批号060713、060904、061116、070102）；甲醇为色谱纯；试验用水为多效蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 处方及制备

处方：蒲公英33.3 g，土茯苓100 g，青蒿33.3 g，柴胡33.3 g，土鳖虫16.67 g，蒲黄33.3 g，桔梗20 g，甘草20 g，黄芩53.3 g，白鲜皮53.3 g，槐花33.3 g，牡丹皮33.3 g，夏枯草33.3 g，赤芍100 g，白花蛇舌草66.6 g，蔗糖及防腐剂适量，制成1 000 mL。

制备方法：将15味药加入约10倍量水，煎煮沸腾2 h后，倒出煎出液，再向药渣中加入适量体积水煎煮2次，煎煮时间均为2 h，合并3次煎出液，静置，过滤，滤液浓缩至约600 mL，加适量蔗糖及防腐剂，搅拌使溶解，用水调至1 000 mL，煮沸，过滤，分装，即得。

3 质量控制

3.1 性状

本品为棕褐色的液体；味苦、微甜。

3.2 薄层色谱鉴别

3.2.1 黄芩的鉴别 取本品10 mL，蒸干，残渣加水15 mL搅拌使溶解，滤过，滤液加稀盐酸调节pH值至1～2，用醋酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另按处方比例和工艺同法制成缺黄芩的阴性对照液备用。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成1.0 g/L的对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。

3.2.2 白花蛇舌草的鉴别 取本品20 mL，加醋酸乙酯20 mL振摇萃取，分取醋酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另按处方比例和工艺同法制成缺白花蛇舌草的阴性对照液备用。再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成1.0 g/L的对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯（12∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，放入烤箱，在110 ℃烘烤5 min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。

3.3 一般检查

相对密度应不低于1.08；pH值应在4.0～7.0之间；其他应符合《中华人民共和国药典》合剂项下有关各项规定。

4 含量测定

4.1 色谱条件

色谱柱：Agilent EclipseXDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，

5 ?m）。黄芩苷流动相为甲醇-2%醋酸（55∶45），流速1.0 mL/min，检测波长315 nm；芍药苷流动相为甲醇-水（35∶65），流速0.8 mL/min，检测波长230 nm。柱温为常温，灵敏度为0.08 AUFS，进样量20 ?L。

4.2 溶液的制备

4.2.1 对照品溶液的制备 ①精密称取黄芩苷对照品（105 ℃干燥至恒重）10.8 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为黄芩苷对照品储备液。精密量取该储备液适量，加甲醇制成每1 mL含36 ?g黄芩苷的对照品溶液。②精密称取芍药苷对照品（105 ℃干燥至恒重）5.6 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷对照品储备液。精密量取该储备液适量，加甲醇制成每1 mL含28 ?g芍药苷的对照品溶液。

4.2.2 供试品溶液的制备 ①精密量取肤康合剂5.0 mL，置25 mL量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理（频率40 kHz，功率100 W）30 min，放冷，加50%乙醇至刻度，摇匀，静置。精密量取上清液2.0 mL，置25 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，用0.45 ?m的微孔滤膜过滤，弃去初滤液，即得黄芩苷供试品溶液。②精密量取肤康合剂2.0 mL，置25 mL量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理（频率40 kHz，功率100 W）30 min，放冷，加50%乙醇至刻度，摇匀，静置。精密量取上清液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，用0.45 ?m的微孔滤膜过滤，弃去初滤液，即得芍药苷供试品溶液。

4.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例和工艺，分别制成不含黄芩及赤芍、牡丹皮的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制得2种阴性对照溶液。

4.3 系统适用性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 ?L，按“4.1”项下色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1、4.4 标准曲线的建立

4.4.1 黄芩苷 分别精密量取黄芩苷对照品储备液一定量，用甲醇稀释成黄芩苷质量浓度分别为27、54、108、162、216 mg/L的标准溶液。分别进样20 ?L，测定峰面积，并以峰面积对进样量进行线性回归，得到回归方程Y=13.81X-13.15， r=0.999 9（n=5）。表明黄芩苷进样量在0.54～4.32 ?g范围内与峰面积呈良好的线性关系。

4.4.2 芍药苷 分别精密量取芍药苷对照品储备液一定量，用甲醇稀释成芍药苷质量浓度分别为7、14、21、28、35 mg/L的标准溶液。分别以20 ?L进样，测定峰面积，并以峰面积对进样量进行线性回归，得到回归方程：Y=1 942X-10.06，r=0.999 9（n=5）。表明芍药苷进样量在0.14～0.70 ?g范围内与峰面积呈良好的线性关系。

4.5 精密度试验

分别精密吸取同一份供试品溶液，每次20 ?L，重复进样6次，结果黄芩苷及芍药苷平均峰面积的RSD分别为0.94%、0.49%（n=6），表明精密度良好。

4.6 重复性试验

取061116批号的样品各6份，按“4.2.2”项下方法平行制备供试品溶液各6份，按“4.1”项下色谱条件分别进样测定。结果黄芩苷及芍药苷峰面积的RSD分别为1.27%、1.09% （n=6），表明重复性较好。

4.7 稳定性试验

取061116批号的同一供试品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、12 h，按“4.1”项下色谱条件进样测定，结果黄芩苷及芍药苷峰面积的RSD分别为1.23%、0.92%（n=6）。结果表明，2种被测成分在12 h内均稳定。

4.8 加样回收率试验

将定量对照品加入到已知含量的样品中，按供试品溶液制备方法处理后，依法测定，并计算回收率和RSD，结果见表1。

4.9 样品含量测定

分别精密吸取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液各20 ?L，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法[4]计算含量。每批样品测2次，求平均值，结果见表2。根据4批样品测定结果，暂定每1 mL肤康合剂中含黄芩苷不少于2.1 mg，芍药苷不少于1.5 mg。

5 讨论

本制剂中赤芍、牡丹皮的主要有效成分均为芍药苷，因此本试验所测为总芍药苷的含量。

根据黄芩苷及其他成分的理化性质，在HPLC测定中，对黄芩苷检测波长进行了选择，参照文献[4-6]，在280 nm波长处测定时，发现阴性样品对黄芩苷的测定有干扰，而在315 nm波长处测定时，阴性样品对黄芩苷的测定几无干扰，且有较大吸收，故选择315 nm作为黄芩苷测定检测波长。

本试验对HPLC流动相系统组成和比例作了比较，对甲醇-水-磷酸[4-6]、甲醇-醋酸和乙腈-磷酸[7]、甲醇-水等多种溶剂系统进行了选择，根据分离情况，选用以甲醇-2%醋酸（55∶45）测定黄芩苷，甲醇-水（35∶65）测定芍药苷。由色谱图可见，样品峰形对称，分离效果良好，且对柱效要求不高，简单快捷。

本试验制备供试品溶液时，分别考察了甲醇、乙醇及超声时间对提取效果的影响，结果表明，用甲醇和乙醇超声提取效果无明显差异；在分别超声处理样品25、30、35、40 min后测定，结果表明，超声处理样品30 min时待测成分已被充分提取。由于甲醇毒性大，因此，本试验选用乙醇作溶媒超声处理样品30 min来提取待测成分。

本试验表明，采用TLC对肤康合剂中黄芩和白花蛇舌草进行定性鉴别，采用HPLC对黄芩苷和芍药苷含量进行测定，精密度高，稳定性和重复性好，黄芩苷和芍药苷在进样范围内均呈良好线性关系，涵盖了样品进样相应组分的含量，回收率也较理想，因此认为，本方法简便快速、灵敏度高、结果准确、重复性好，可作为肤康合剂质量控制标准。

参考文献：

[1] 王仑，柳兵，丁小珍，等.肤康合剂治疗脂溢性皮炎120例[J].皮肤病与性病，2006，28（2）：23-24.

[2] 丁小珍，王伦.肤康合剂治疗寻常痤疮的临床疗效观察[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2006，5（4）：227-228.

[3] 王仑，柳兵，丁小珍，等.肤康合剂联合郁金银屑片治疗寻常性银屑病42例[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2007，6（3）：179.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2005：211-212.

[5] 路玫，谢东.高效液相色谱法测定利咽口服液中黄芩苷的含量[J].中国医院药学杂志，2000，20（6）：330-331.

[6] 王海宁，杨翰.HPLC法测定桔贝合剂中黄芩苷的含量[J].中国药房， 2007，18（27）：2132-2133.

[7] 苏强，任慧俊.反相高效液相色谱法测定心脑康胶囊中芍药苷的含量[J].中国医院药学杂志，2002，22（12）：736-738.

（收稿日期：2012-03-26，编辑：陈静）