优选方法对人工授精治疗结局的影响

【摘要】 目的：回顾分析不同优选方法对人工授精治疗结局是否有影响。方法：选择2010年1月～2011年12月在本中心行AIH治疗的504对夫妇共732个周期为研究对象，按优选处理方法进行分组：上游法314个周期，密度梯度离心法418个周期，比较两种优选方法行人工授精在临床妊振率、流产率和子代性别的差异。结果：上游法和密度梯度离心法的周期妊娠率分别为86 %、67%，流产率分别为259%、179%，差异无统计学意义（P>005）；两种方法处理后行人工授精的婴儿性别比例比较差异无统计学意义（P>005）。结论：上游法和密度梯度离心法应用在夫精人工授精中临床妊娠率、流产率无差异，优选方法对子代性别无影响。

【关键词】 人工受精； 上游法； 密度梯度离心法； 妊娠率

夫精人工授精（artificial insemination by husband，AIH）是治疗不孕症常用的辅助生殖技术之一，在AIH的实施过程中，需要用人工方法将从中有效地分离出来。目前实验室常用的体外优选处理方法是上游法和密度梯度离心法。本文回顾性分析504对不孕夫妇共732个AIH周期，比较用上游法和密度梯度离心法处理行IUI的临床妊振率、流产率和子代性别的差异，现将资料报道如下。

1资料与方法

1.1研究对象及分组

2010年1月～2011年12月到我院生殖中心接受AIH治疗的不孕症夫妇504例共732个周期。女方至少有一侧输卵管通畅，排除子宫畸形、子宫腺肌症、子宫肌瘤及内分泌疾病，术前6个月内未使用激素类药物，肝功能、肾功能正常，无妊娠禁忌证。对男方进行常规检查2～3次，排除严重少、弱症及死症。按优选处理方法进行分组：上游法314个周期，年龄为（3095±422）岁，不孕年限为（408±2.93）年，自然周期149个和促排卵周期72个；密度梯度离心法418个周期，年龄为（31.11±450）岁，不孕年限为（421±2.82）年，自然周期193个和促排卵周期90个。两组患者女方年龄、不孕年限、自然周期和促排卵周期比较差异均无统计学意义（P>005）。

1.2仪器和试剂

培养液选择参照文献[1]，Earle’s（Quinn’s公司）溶液，（SPS，美国）使蛋白浓度达到10%；SpermGrad使用Vitrolife产品，加入人血清白蛋白、Hepes液（Quinn’s公司），配制成90%和45%溶液，所含蛋白浓度均为10%；IUI授精管（COOK公司生产）。

1.3优选处理

患者禁欲2～7d，以法取于一专用取精杯中，置37℃恒温箱，待液化后，用上游法或密度梯度离心法处理，依据世界卫生组织（WHO）第五版标准进行[2]。

1.4AIH方法

均使用宫腔内人工授精（intrauterine insemination，IUI），人工授精术后患者平卧30～60min。自然周期从月经第7～8d开始监测卵泡，卵泡成熟且出现尿促黄体生成激素峰时行人工授精。促排卵周期参照文献[3]，月经第10～11d开始监测卵泡，卵泡直径达18～20mm时注射绒毛膜促性腺激素5 000～10 000U，注射后24～32h行人工授精。排卵后予以黄体功能支持治疗[4]。

1.4临床妊娠诊断标准

患者AIH术后14天来生殖中心检测血β-HCG或尿妊娠试验确定是否妊娠，阳性者为生化妊娠，AIH术后30～35天超声检查出现宫腔内孕囊为临床妊娠。

1.5统计学分析

采用SPSS130统计软件进行分析，率的比较用χ2检验，以P

2结果

2.1优选方法与妊娠率、流产率的关系

上游法与梯度离心法两组比较，上游法临床妊娠率和流产率均高于梯度离心法，但差异无统计学意义（χ2=1.174、0906，P >005）。见表1。

（%）流产数流产率

（%）上游组3143410.8514.7梯度离心组418409.7512.5

2.2优选方法与婴儿性别的关系

上游法与梯度离心法处理后行人工授精出生的婴儿性别比较无统计学差异（χ2=3.410，P>005），说明优选方法对婴儿性别无影响。见表2。

3讨论

上游法和密度梯度离心法是辅助生殖技术中常用的体外优选技术，目的是获得没有精浆、细胞碎片及病原微生物污染的悬液，回收足够数量具有正常形态和功能的。两种优选方法均能显著提高活动与前向运动的百分率，以上游法提高更显著，而密度梯度离心法的回收率明显高于上游法[5]。IUI技术将处理后的悬液注入女性子宫腔内，大大缩短了在生殖道内游动的距离，提高了获得妊娠的机会。

多项研究表明[6-8]，男性质量参数是影响宫腔内人工授精妊娠率的重要因素，尤其是处理后活动总数对预测临床妊娠率最为重要。目前多数文献认为IUI时前向运动总数>10×106才能获得适宜的周期妊娠率[9，10]，且前向运动总数>10×106后各组妊娠率无差异[11]。本研究根据患者病史、以往的分析报告以及当前的常规参数来选择处理方法。上游法主要用于质量较好和相对正常的，粘稠度高或不液化的、少弱症的标本，优先使用密度梯度离心法[12]，必要时增加梯度离心管数，以尽可能多的收集全部中可利用。

本研究数据表明，两种优选方法处理后行IUI，上游法临床妊娠率和流产率均高于梯度离心法，但差异无统计学意义。这一结果与国内相关报道一致[13]。说明根据情况选择合理的优选方法不仅能获得较好的优化效果，在提高临床妊娠率上作用也是相似的。

人工授精中的优选处理方法是否影响婴儿性别，目前还少见报道。X、Y存在着一些差异，如密度、DNA含量、运动特点和运动速度等。理论上，上游法处理时Y的游动速度比X快，其密度也比X低，在培养液中停留时间较X长，因此可在上游液中得到更多的Y；在密度梯度离心法分离介质中，X、Y的沉降速度不一致，X沉降速度比Y快，在适当的离心作用下，可在不同密度梯度介质中分离出富含X、Y的标本。但Madrid-Bury等[14]研究认为这两种方法分离的纯度均有限。颜军昊等[15]报道，不同上游时间段检测的X占XY总数的比例与未上游时差异无显著性，上游法对X、Y的分离没有显著效果。本研究结果也显示，上游法与梯度离心法处理后行人工授精出生的男女婴儿比例比较无统计学差异，说明的优选处理方法不会影响到出生婴儿的性别比例。

综上所述，辅助生殖技术中需要针对患者的情况有选择性地采用适宜的优选方法，以达到最佳优化效果，提高临床妊娠率。上游法和密度梯度离心法应用在夫精人工授精中临床妊娠率、流产率无差异。优选方法对子代性别无影响。

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