HPLC法测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量

【摘要】1.1 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪； TU-1901 紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；十万分之一天平(梅特勒)。 1.2 试药。紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所提供...

摘要：目的：建立了刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量测定方法。方法：采用高效液相法测定，使用Diamonsil C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱,流动相：甲醇-水（20:80）,流速：1.0ml/min,检测波长:265nm。结果：紫丁香苷对照品在16.28?滋g/ml～146.52?滋g/ml范围内有良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.79%, RSD=1.03%(n=6)。结论该法操作简便、准确、重现性好，可作刺五加软胶囊中紫丁香苷的质量控制方法。

关键词：紫丁香苷；五加软胶囊；高效液相色谱法

中图分类号：TU246.1+3文献标识码：A

刺五加软胶囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中药软胶囊，具有益气健脾、补肾安神的作用。临床用于体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦。本文参考有关文献,建立了高效液相色谱法（HLPC）测定刺五加软胶囊中紫丁香苷的含量方法,实验结果表明，该法操作简便、准确、重现性好，可作刺五加软胶囊中紫丁香苷的质量控制方法。

1仪器与试药

1.1 仪器Agilent1100型高效液相色谱仪； TU-1901 紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；十万分之一天平(梅特勒)。

1.2 试药。紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所提供批号111574-200502供含量测定用)；刺五加软胶囊（自制批号: 20100301、20100302、20100303 规格为0.3g)；甲醇为色谱纯,水为去离子水。

2方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm, 5μm)；流动相：甲醇：水（20:80）；流速：1.0ml/min；检测波长：265nm；柱温：室温；进样量：10μl，理论板数以紫丁香苷计不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备。精密称取紫丁香苷对照品8.14mg，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配成浓度为162.8?滋g/ml的甲醇溶液。再精密量取该甲醇溶液5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含紫丁香苷81.4?滋g/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备。取本品10粒，除去胶皮取内容物，精密称定，取相当于2粒的量，精密称定。置250ml三角瓶中，加10ml正已烷，混合均匀后移入分液漏斗中，依次用20ml、10ml、10ml乙腈提取三次，合并乙腈层于蒸发皿上蒸发至干，用1ml甲醇溶解，取SPE-C18小柱（依次用10ml甲醇和10ml纯化水洗涤，吹干），上样，用甲醇洗脱至25ml容量瓶中，控制流速在1ml/min，定容，即得。

2.4 线性关系考察

线性关系的考察。取紫丁香苷对照品用甲醇制成162.8?滋g/ml的溶液,精密量取此溶液1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,记录色谱图,以标准溶液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=60.521X-80.375r=0.9998。

结果表明,紫丁香苷在16.28?滋g/ml～146.52?滋g/ml范围内有良好的线性关系。

2.5 回收率试验

采用加样回收法,取同一批已知含量样品6(批号: 20100301)份，精密称定相当于1粒的量的样品，再加入紫丁香苷对照品溶液10ml（81.4?滋g/ml），按照2.3项供试品制备方法进行测定，计算平均加样回收率，结果平均加样回收率为98.79%，RSD为1.03%，表明准确度良。计算每份的回收率,结果见表1。

2.6 精密度试验

取同一对照品溶液,进样10?滋l,重复6次进样,依法测定，其峰面积的RSD=0.65% (n=6)。结果表明，仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取样品(批号20100301)的供试品溶液，分别于室温下放置0、2、4、6、8小时后测定,峰面积积分值基本不变, RSD=0.81% (n=5)。结果表明，在室温条件下，供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批号的样品(批号20100301)6份，按照供试品含量测定方法进行操作，结果平均含量为1.264mg，RSD=0.33%(n=6)，表明本含量测定方法的重复性良好。

2.9 样品含量测定

分别取本品三批（20100301、20100302、20100303），按供试品溶液制备方法制备并测定，结果见表2。

3 讨论

3.1 通过紫外扫描,紫丁香苷在265nm处有最大吸收,故选择265nm为检测波长。

3.2由于生产中采用精制玉米油为溶剂，在检验过程中对色谱柱污染比较严重。针对这种情况，我们先采取正已烷-乙腈萃取的方法去除部分油脂，再采用固相萃取法用SPE-C18对油脂进行吸附，从而达到去除油脂对色谱柱污染的目的。

3.3先后试用了三种流动相系统:甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸和乙腈-水-冰醋酸,结果甲醇-水分离效果较好，操作简单。通过甲醇-水10∶90、15∶85、20∶80、25∶75不同比例的选择,确定20∶80的比例分离效果最好,保留时间适中。

3.4该法检测刺五加软胶囊中紫丁香苷含量精密度高、重现性及线性关系良好,回收率高。该法操作简便,结果准确、可靠, 作刺五加软胶囊中紫丁香苷的质量控制方法。

参考文献

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[2]阎正,马春艳,阎海荣,等.高效液相色谱法测定2种中药片剂中紫丁香苷的含量[J].分析测试技术与仪器,2007,13(4):264.

[3]蔡晓民，何洁.高效液相色谱法测定复方刺五加糖浆中紫丁香苷含量[J].中国实用医药，2008,3（18）：60-61.

[4]许正斌.刺五加各部位有效成分的含量测定.中草药,1984,15(5):32.

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