伊贝沙坦对缺血再灌注心律失常的作用实验研究

中图分类号：R542.2+2 文献标识码：A 文章编号：1009_816X(2010)06_042 5_04

DOI:10.3969/j.issn.1009_816X.2010.06.07Study of the Effect of Irbesartan on Ischemia_reperfusion Arrhythmia . ZENG Wen_ping, ZHU Shi_fa, SHEN Fa_rong, et al. Zhejiang Hospital,Zhejiang 310013, China

［Abstract］ ObjectiveTo explore the effect and mechanism of angiotensin II recep tor antagonist irbesartan on ischemia_reperfusion arrhythmia in rats.Methods 32 male Sprague_Dawley rats were divided into ischemia/r eperfusion control group(I/R group), ischemia/reperfusion+irbesartan(100umol/L)group(I/R+irbesartan 100 group), ischemia/reperfusion+irbesartan(50umol/L)grou p(I/R+irbesartan 50 group), ischemia/reperfusion+irbesartan(100umol/L)+Cyclospor in A (CsA)(1umol/L)group(I/R+irbesartan+CsA group), each group had 8 rats. Usin g isolated perfused heart in each group, left ventricular developed pressure (LV DP), left ventricular end_diastolic pressure(LVEDP), heart rate(HR), maximal ris e/fall rate of left ventricular pressure (±dP/dtmax), coronary flow (CF),perfusion fluid lactate dehydrogenase (LDH) and arrhythmia score were measured.Results LVDP, LVEDP, LDH and arrhythmia score were significantly lower in I/R+irbesartan50 group and I/R+irbesartan 100 group than those in I/R group(P

［Key words］ Angiotensin II receptor antagonist; Irbesartan; Sc hemia_reperfusion arrhythmia; Rats

急性冠脉综合征缺血心肌恢复再灌注之后，出现再灌注心律失常及心功能进行性下降。心肌 急性缺血时，肾素―血管紧张素系统(Renin_Angiotensin System,RAS)被激活，血管紧张素 Ⅱ(Angiotensin Ⅱ, AngⅡ)的合成和释放增加促进再灌注心律失常的发生。目前，AngⅡ受 体拮抗剂临床应用多局限于原发性高血压、心力衰竭和预防PTCA术后再狭窄方面。直接运用 于防治心脏缺血再灌注损伤者不多。本文的主要目的是观察伊贝沙坦能否减少心肌缺血后 再灌注心律失常的发生及初步探讨其可能机制。

1 材料和方法

1.1 材料：雄性Sprague_Dawley大鼠(购自浙江医学科学院动物中心)。K_H液配置药品均 为市售化学纯，实验记录仪器为Medlab公司生产的实验生理记录仪，伊贝沙坦药品由杭州民 生―赛诺菲公司赞助，环胞菌素A(Cyclosporin A,CsA)购自Sigma公司。

1.2 方法［1］：

1.2.1 离体心脏Langendorff灌流和缺血复灌实验方法：雄性Sprague_Dawley大鼠(体重2 40～300g)，用木锤击昏后，开胸迅速取出心脏，置于4℃改良Krebs_Henseleit(K_H)液中除 去血液，迅速转移、固定于Langendorff灌流装置，以95%O2+5%CO2饱和改良K_H液行常 规恒温恒压灌流(37℃,76mmHg)。改良K_H液成分如下(mmol/L):NaCl 118.0,KCl 4.7,K2 PO4 1.2,MgSO4 1.2,NaHCO3 25.0,CaCl2 1.25,葡萄糖10.0g, pH7.3～7.4 。稳定20min后，切开左心耳，将充满水的乳胶囊从左心房插入至左心室，乳胶囊与压力传 感器相连，将水注入乳胶囊使左心室舒张末压维持于2～7mmHg，通过MedLab生物信号采集处 理系统记录左室内压曲线，并计算左心室发展压(LVDP)、左心室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)、最大收缩/舒张速率(±dP/dtmax)，同时记录冠脉流量(coronary flow CF)。记 录心电图作心律失常评分。

1.2.2 缺血/复灌处理方法：以全心停灌30min，复灌120min作为缺血/复灌过程。灌流心 脏流出液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性的测定：分别于复灌5min,10min,1 5min,20min收集冠流液，计算每分钟冠脉流量，在全自动生化仪上测定LDH。

1.2.3 心律失常评分方法：采用Curtis和Walker心律失常评分法：无心律失常0分，偶发 室性早搏1分，频发室性早搏2分，室性心动过速(1～2次)3分，室性心动过速(≥3次)或室颤 4分。

1.3 实验方案：32只SD大鼠随机分为：①单纯缺血/复灌对照组(I/R)；②缺血/复灌+伊贝 沙坦(100umol/L)组；③缺血/复灌+伊贝沙坦(50umol/L)组；④缺血/复灌+伊贝沙坦(100umo l/L)＋CsA(1μmol/L)组，每组8只大鼠。

1.4 统计学方法：所有数据采用x－±s 表示，采用t检验，ANOVA检验进行显著性检验，以P

2 结果

2.1 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注可以降低缺血复灌大鼠心脏的LVDP，具有统 计学差异(P0.05)。

2.2 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注可以增加+dP/dtmax，具有统计学差异 (P

2.3 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注可以增加-dP/dtmax，具有统计学差异 (P

2.4 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注可以降低LVEDP的升高，具有统计学差异(P

2.5 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注15min可以降低LDH水平，具有统计学差异(P

2.6 与I/R组比较：不同浓度伊贝沙坦灌注可以减少CF的降低，具有统计学差异(P

2.7 与对照相比较：伊贝沙坦灌流组可以降低缺血及再灌注时的心律失常评分，同时灌 流CsA可以部分抵消伊贝沙坦降低心律失常评分的作用，见表1。

3 讨论

相对于I/R组，不同浓度伊贝沙坦对心率没有统计差异的影响，但可以降低离体缺血/复灌大 鼠心脏的LVDP，减少缺血复灌导致的冠脉流量的降低，有统计学差异，钙调神经磷酸酶抑 制剂CsA可以逆转此作用。伊贝沙坦可以增加+dP/dtmax及-dP/dtmax，同时灌 注CsA可以拮抗此作用。伊贝沙坦可以降低缺血/复灌导致LVEDP的升高，与Flynn JD等报告 相似［2］，CsA合灌可以抑制伊贝沙坦的保护作用，甚至比I/R组更高。伊贝沙坦作 用组和I/R组对比，缺血复灌之后的灌流液的LDH水平明显下降，有统计学差异。不同浓度 伊贝沙坦仅在灌注15min内可以降低LDH水平，有统计学差异，复灌超过20分钟各组LDH水 平没有明显的差异，同时灌注CsA则可逆转伊贝沙坦降低LDH的作用，甚至比缺血复灌组更高 。和对照组比较，伊贝沙坦灌流组可以降低缺血及缺血复灌时的心律失常评分，与Yahiro E等报告相同［3］，同时灌流CsA可以部分抵消其抗心律失常作用。

心肌急性缺血时，肾素―血管紧张素系统(RAS)被激活，血管紧张素Ⅱ合成和释放增加 ［4］。AngⅡ通过增加钙离子经L型钙通道内流入细胞及促进细胞内储存的钙离子释放， 导致细胞内钙超载，特别是线粒体内钙超载［5］。钙超载可导致线粒体损伤，内呼 吸功能受损，氧化代谢减弱，能量产生不足，钙超载程度与心肌受损程度呈正相关。Prunie r F等指出肌浆网Ca_ATP泵表达增加，减少钙超载可以降低缺血后室性心律失常的发生 ［6］。本结果亦显示伊贝沙 坦可以减少缺血复灌心律失常评分，CsA可以抵消其抗心律失常作用。缺血、缺氧后，细胞 内pH下降，氧化磷酸化过程受抑，ATP合成减少，可导致Ca2+_ATPase活性下降。如果 能够恢复钙通道，恢复Ca2+_ATPase活性，就能改善缺血心肌的功能。Kano S等研究 显示，Olmesa rtan能够修复ATP酶促进再灌注期间心肌收缩功能的恢复［7］。钙超载还能使钙与钙 调蛋白结合增多，激活钙依赖性蛋白水解酶及蛋白降解酶，使心肌纤维挛缩和断裂，导致再 灌注心律 失常的发生。细胞内的钙超载可以激活钙调神经磷酸酶，使得缝隙连接蛋白connexin43的C 端368位去磷酸化。缝隙连接蛋白降解后重新分布，蓄积于胞浆内或转移到细胞侧缘。与其 他途径共同改变缝隙连接蛋白的磷酸化状态，影响其含量、分布、装配、传导等，进而影响 心肌电耦联的稳定性，诱发恶性心律失常。Yang Y等研究显示，氯沙坦能够抑制再灌注心肌 缺血过程中早发后除极的发生，减少再灌注心律失常［8］。

总之，通过灌注钙调神经磷酸酶抑制剂CsA，可以部分逆转伊贝沙坦对缺血再灌注心肌损伤 的保护作用，提示伊贝沙坦对缺血再灌注心肌损伤的保护作用可能部分是通过激活钙调神经 磷酸酶起作用。具体的机制还有待进一步的研究证实。

参考文献

［1］Lee TM, Chen CC, Lin MS, et al. Effect of endothelin receptor antag onists on ventricular susceptibility in postinfarcted rats［J］. Am J physiol He art Circ physiol,2008,294(4):H1861-1879.

［2］Flynn JD, Akers WS. Effects of the angiotensin II subtype 1 recepto r antagonist losartan on functional recovery of isolated rat hearts undergoing g lobal myocardial ischemia_reperfusion［J］. Pharmacotherapy，2003，23：(11):140 1-1410.

［3］Yahiro E, Ideishi M, Wang LX, et al. Reperfusion_induced arrhythmias are su ppressed by inhibition of the angiotensin II type 1 receptor［J］. Cardiology,20 03,99(2):61-67.

［4］Huang Y, Lei L, Gao G, et al. Biochemical remodeling of myocardial collag en and its relation to cardiac renin_angiotensin system in rats after myocardialinfarction［J］. Hua Xi Yi Ke Da Xue Xue Bao,2001,32:(1):9-11.

［5］Bkaily G, Sculptoreanu A, Wang S, Angiotensin II_induced increase of T_typeCa2+ current and decrease of L_type Ca2+ current in heart cells［J］. Peptides,2005,26(8):1410-1417.

［6］Prunier F, Kawase Y, Gianni D, et al. Prevention of ventricular arrhythmia s with sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase pump overexpression in a porcinemodel of ischemia reperfusion［J］. Circulation,2008,118(6):614-624.

［7］Kano S, Satoh K, Kaneta S, et al. Improvement of stunned myocardium in dogswith olmesartan, an angiotensin II type 1 receptor antagonist, is independent o f type 2 receptors［J］. Pharmacology,2008,82(1):22-29.

［8］Yang Y, Huo ZC, Peng J, et al. Protective effects of losartan against myoca rdial ischemic reperfusion in intact canine［J］. Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao,20 05,25(5):580-581.