IL―17在脊椎结核组织中的表达及作用研究

摘要：目的：探讨IL-17在脊椎结核组织的表达及作用。

方法：搜集脊椎结核病灶清除术患者的血液标本及组织，检测其IL-17及下游通路蛋白表达情况。使用病理组织切片检测病变特点及细胞浸润特点。

结果：脊椎结核患者血清中IL-17含量显著高于健康人群，病变组织中存在IL-17表达，其下游通路蛋白RORγt也被激活。IL-17表达强弱程度与局部病变组织炎症浸润程度正相关。

结论：IL-17在脊椎结核组织中高表达，并介导了局部的强炎症反应及破坏，这可能是椎体结核导致组织破坏的重要因素。

关键词：脊椎结核IL-17炎症

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.01.013

【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1671-8801（2014）01-0011-01

脊椎结核患者的病变部位往往存在严重的炎症反应，IL-17作为近年来广受重视的炎症因子，在脊椎结核中，相关研究内容还很缺乏，本研究通过对患者术后病理组织及血标本中IL-17监测，初步探讨IL-17在脊椎结核组织中的表达及作用。

1资料与方法

1.1临床资料。选取我院胸、腰段脊椎结核患者30例，均经术后病理检测确诊。其中男性患者17例，女性患者18例，患者平均年龄48.9岁，平均病程10.6个月。患者均经过系统性抗痨治疗2周，ESR100g/L基础上，择期手术治疗。

1.2研究方法。第一：患者在术前，术后1个月，抽取血液标本3ml，离心后留上清液，-80℃保存待ELISA检测。同时随机选择本院体检中心健康人血液标本30例作为对照组。

第二：对所有入组研究患者，在手术后，取出病变骨组织，及病变骨周围组织。部分组织迅速10%甲醛固定并石蜡切片包埋用作HE染色，部分组织迅速转运至实验室，提取组织总RNA，并逆转录为cDNA后-20℃保存，供后续RT-PCR试验用。其余组织迅速转移到-80℃冰箱留存备用。供后续Western Blot检测用。

第三：组织切片请病理科医师盲法阅片，计数浸润炎症细胞数量。cDNA，使用荧光定量PCR方法，以β-actin为内参，检测il-17a，ROR-γt mRNA表达情况。蛋白使用WB检测其中IL-17蛋白的表达。ELISA检测指标为血清中IL-17a的含量。使用SPSS16.0进行数据输入及处理，数值变量组间采取t检验，双变量相关性分析比较两组间数值变化相关性，以P

2结果

2.1血液中IL-17含量检测。健康人群血清IL-17含量为11.28±3.29pg/ml，术前患者血清IL-17含量为71.48±21.95pg/ml，术后1个月，患者血清IL-17含量26.25±11.28pg/ml。治疗前后及患者与健康人员数据对比均有显著差异。

2.2病变组织IL-17及ROR-γt表达情况。以健康人组织荧光强度为1。病变组织IL-17，NF-κB相对荧光强度为3.86±1.28，4.67±2.96。病变周围组织IL-17，NF-KB相对荧光强度为0.68±0.15，0.79±0.31。病变组织IL-17m RNA表达及下游通路蛋白mRNA表达情况显著升高。WB测定结果与PCR一致。具体见图1。

2.3病变组织炎症浸润细胞计数及与IL-17表达相关性分析。不同患者病变组织炎症细胞计数，按照细胞计数大小层次分为3组，并与组织中IL-17相对荧光强度表达一一对应，列表如表1。相关系数T=0.954，P

3讨论分析

活动性结核往往对人体实质性器官造成器质性损害，其中免疫反应是导致器官破坏的重要原因。近年，IL-17在结核免疫反应中的作用及其机制得到了越来越的重视及探讨。本研究通过健康人群与脊椎结核患者人群对照的方式，揭示了脊椎结核患者血清的IL-17高水平维持状态，且这种血清蛋白高水平，在术后显著下降，这提示着IL-17含量，与局部病变组织的存在及炎症反应的强弱程度密切相关。在此基础上，本研究进一步利用局部病变组织及病变周围正常组织，进行患者的自身对照，可见病变组织中IL-17的RNA及蛋白表达均显著提高，这进一步提示了患者体内IL-17的高表达与局部存在的结核杆菌感染密切相关。

NF-κB通路蛋白是细胞胞内的重要通路蛋白，在多种自身免疫相关性疾病中，该通路蛋白均呈现激活的表现。在本研究中，也可观察到结核组织中，该通路蛋白表达显著提高，这说明IL-17-NF-κB通路可能是局部免疫反应性破坏的重要因素。

由于IL-17的强大促炎作用，本研究还将局部炎症破坏的指标：炎症细胞浸润与IL-17表达进行相关性分析，结果显示在不同患者中，IL-17表达与炎症浸润呈现正相关，这进一步说明，IL-17在椎体结核中的促炎症破坏作用。

最后，本研究揭示了椎体结核患者血清及病变组织的IL-17高表达状态，并进一步展现了IL-17高表达下NF-κB的激活情况，最后通过相关性分析揭示了这一激活对于局部炎症的影响。最终本研究阐释了IL-17在椎体结核中的存在及促炎效应，针对这一炎症通路的抑制，可能成为临床治疗缓解结核相关性椎体破坏的治疗靶点。

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