Survivin和PTEN在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨Survivin和PTEN在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。 方法 应用免疫组织化学EnVision法检测80例NSCLC组织和30例癌旁肺组织中Survivin及PTEN的表达，并分析其与临床病理因素之间的关系。 结果 肺癌组织中，Survivin和 PTEN的阳性表达率分别为72.5%和33.8%，癌旁组织中Survivin和 PTEN的阳性表达率分别为 0和83.3%，Survivin随着肿瘤恶性程度增高，阳性表达率逐渐升高，而PTEN的表达则相反，二者在肿瘤中的表述呈负相关（r = -0.235，P < 0.01）。 结论 Survivin和PTEN的异常表达与NSCLC的发生发展有关，可作为判断肺癌生物学行为和预后的参考指标。

[关键词] Survivin；PTEN；非小细胞肺癌；免疫组织化学

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）22-0050-03

肺癌是世界上发病率和病死率均居首位的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）所占比例约为肺癌总数的80%～85%[1]，成为严重危害人类健康的疾病之一。肺癌的发生发展是多个癌基因和抑癌基因共同参与的过程，另外还与细胞增殖和凋亡调控异常有关。Survivin是凋亡抑制基因，具有抑制细胞凋亡、调控细胞周期及参与血管形成的作用，在肿瘤形成中起着重要作用。PTEN基因是一个具有酪氨酸磷酸酶活性的抑癌基因，在肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移中起作用。本研究通过检测Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺组织中的表达并分析其与临床病理学特征之间的关系，研究二者在非小细胞肺癌的发生发展中的作用及相关性，为判断NSCLC的生物学行为及患者预后提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

随机选取2005年1月～2012年12月濮阳市人民医院胸外科手术切除并经病理证实的肺癌标本80例和相应的癌旁组织30例，所有患者术前均未行化疗、放疗和其他抗肿瘤治疗。患者年龄38～80岁，平均年龄（62±3.2）岁；男46例，女34例；其中鳞癌45例，腺癌35例；高、中分化52例，低分化28例。TNM分期：I期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期22例，IV期15例；有淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者32例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，分别进行HE染色及免疫组化染色。

1.2 方法

采用免疫组化EnVision法，多克隆兔抗人Survivin抗体、鼠抗人PTEN抗体和EnVisionTM检测试剂盒均购自DAKO公司。将已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定参考Falleni等[2]的半定量计数方法。每张切片选10个高倍视野，计数至少500个肿瘤细胞，取其平均值计算阳性细胞百分率。肿瘤细胞阳性率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。根据染色强度分为4级：0分：无染色；1分：淡黄色；2分：黄色；3分：棕黄色或棕褐色。阳性细胞率与染色强度得分相乘为每例积分。规定0～1分为阴性（-），积分≥2为阳性。其中2～4分为弱阳性（+），5～8分为中度阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计分析软件进行数据分析，阳性率比较采用χ2检验，相关性采用校正χ2检验、Spearman等级相关分析，以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺组织中的表达

Survivin的阳性表达信号位于胞浆，呈棕黄色细颗粒。在肺癌组织与癌旁组织Survivin的阳性表达率分别为72.5%和0。PTEN的阳性表达信号大部分位于胞质内，少数病例位于胞核，呈不同染色程度的棕黄色细颗粒。肺癌组织中PTEN的阳性表达率为33.8%，明显低于癌旁组织 （83.3%）（P < 0.01）。见表1。

2.2 Survivin和PTEN在NSCLC中的表达与肺癌临床病理学特征之间的关系

Survivin和PTEN的表达与肿瘤的分化程度、临床分期及有无淋巴结转移相关（P均< 0.05），Survivin的表达随着肿瘤组织分化程度的降低、临床分期的增高和有淋巴结转移组织而逐渐增高。PTEN的表达则与之相反。二者的表达与患者的性别、年龄、肿瘤类型差异均无统计学意义（均P > 0.05）。见表2。

2.3 NSCLC中Survivin的表达和PTEN表达的相关性分析

Survivin、PTEN两者经相关性检验得出，Spearman相关系数r = -0.235，P < 0.01，表明Survivin与PTEN之间存在负相关关系。见表3。

3 讨论

Survivin基因定位于人染色体17q25，全长1476nt，长度范围在75～130 kb，包含4个外显子和3个内含子，由1.9 kb的mRNA转录和编码，编码142个氨基酸组成相对分子质量约16 200的胞浆蛋白，并被证实是一种结构和功能独特的IAP家族成员，是IAP家族中分子结构最简单、最独特的，也是迄今发现最强的IAP。Survivin主要通过直接作用于凋亡末端通路，抑制Caspase-3、Caspase-7活性，阻断细胞的凋亡过程[3]，参与肿瘤的发生。Survivin 主要在胚胎组织及分化未成熟的组织和大多数肿瘤组织中表达，在成人体内所有分化成熟的组织内均无表达。Akyurek等[4]研究表明，在正常的支气管上皮细胞中、低分化的非典型腺瘤样增生以及癌旁肺组织中，Survivin的表达为阴性；而在鳞状化生和发育异常的非典型腺瘤样增生组织中Survivin的表达为阳性。说明Survivin阳性表达是肿瘤发生的早期分子事件，提示组织学尚正常的组织存在癌变的可能[5]。为NSCLC的早期诊断提供了可靠依据。朱丛中等[6]研究发现Survivin的表达与组织学分级、临床分期和有无淋巴结转移有关，我们的研究结果显示Survivin在NSCLC组织中表达的阳性率为72.5%，而在癌旁正常肺组织不表达，Survivin蛋白的表达与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移相关（P < 0.01），而与其他临床病理特征均无相关（P >0.05），提示Survivin蛋白表达与NSCLC的发生、发展密切相关， 同时也对预后评估提供了参考。

PTEN是一种具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色体10q23.3，全长200 kb，由9个外显子和8个内含子组成，编码403个氨基酸组成的蛋白质。参与细胞凋亡和细胞周期调控，与细胞黏附和肿瘤转移有关。PTEN突变使细胞生长失去了负调控，可导致肿瘤进行性生长[7]。研究表明PTEN表达缺失是非小细胞肺癌发生发展过程中的晚期事件之一，可成为判断肺癌分化程度、转移及判断病人病情预后的指标。Goncharuk VN等[8]用免疫组化方法对51例肺腺癌和53例肺鳞状细胞癌检测了PTEN的表达，发现PTEN缺失与肿瘤临床分期、远处转移和患者的预后显著相关，并且是独立的预后因子。Wang C等[9]检测了172例肺腺癌组织中PTEN的表达，发现PTEN与肿瘤分化程度、淋巴结转移和远处转移有关，对肺癌患者预后有着高度预测作用。本研究结果显示，PTEN的表达随着肿瘤组织分化程度的降低、临床分期的增高和有淋巴结转移组织而逐渐降低，为判断肺癌细胞生物学行为和患者预后提供了重要参考。

蒋晖等[10]报道，Survivin与PTEN均与细胞周期调控和细胞凋亡有关，但二者作用相反，当组织发生恶变时Survivin的表达上调，而PTEN表达下降或缺失，进而抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的凋亡，促进肿瘤细胞的增殖以及肿瘤血管的生成。本研究结果与文献报道一致。因此，研究Survivin和PTEN在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系，将对非小细胞肺癌的早期诊断、临床治疗和预后判断具有重要的指导意义。

[参考文献]

[1] Manegold C，Thatcher N. Survival improvement in thoracic cancer： progress from the last decade and beyond[J]. Lung Cancer，2007，57（SuppI 2）：S3-S5.

[2] Falleni M，Pellegrini C. Marehetti A，et al. Survivin gene expression in early-stage non-small cell lung cancer[J]. J Pathol，2003，200（5）：620-626.

[3] Shin S，Sung BJ，Cho YS，et al. An anti-apoptosis protein human survivin is a direct inhibitor of caspase-3 and 7[J]. Biochemistry，2001， 40（4）：1117.

[4] Akyarek N，Memis L，Ekinei O，et al. Survivin expression in pre-invasive lesions and non-small cell lung carcinoma[J]. Virchows Arch，2006，449（2）：164-170.

[5] 何朗，侯梅，张杰，等. 非小细胞肺癌中survivin亚细胞定位的相关研究[J]. 癌症，2009，28：955-960.

[6] 朱丛中，李芳，李赞，等. 非小细胞肺癌中Survivin和COX-2的表达及与肺癌发生、发展的关系[J]. 天津医科大学学报，2010，16（3）：433-436.

[7] Ali IU，Schriml LM，Dean M，et al. Mutational spectra of PTEN/MMAC1 gene： a tumor suppressor with lipid phosphatase activity[J].Nat Cancer Inst，1999，91（22）：1922-1932.

[8] Goncharuk VN，del-Rosario A，Kren L，et al. Co-downregulation of PTEN，KAI-1，and nm-23-H1 tumor/metastasis suppressor proteins in non-small cell lung cancer[J]. Ann Diagn Pathol，2004，8（1）：6-16.

[9] Wang C，Yang R，Yue D，et al. Expression of FAK and PTEN in bronchioloalveolar carcinoma and lung adenocarcinoma[J]. Lung，2009，187（2）：104-109.

[10] 蒋晖，汪晓庆，张端莲，等. PTEN与Survivin在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义[J]. 华中科技大学学报（医学版），2009，38（5）：602-607.

（收稿日期：2013-05-03）