时间：2022-09-20 05:35:58
[摘要] 目的：探讨用高效液相色谱法检测消渴降糖胶囊中槲皮素的含量。方法：应用高效液相色谱法，采用C18柱，以甲醇-0.4%磷酸（55∶45）为流动相，以360 nm为检测波长，检测消渴降糖胶囊中槲皮素的含量。结果：槲皮素峰与相邻色谱峰能有效分离，柱效较高，槲皮素对照品进样量在0.056～0.560 μg范围内与峰面积呈良好的线性相关，回归方程为Y=40 103.2X-561.4，相关系数r值为0.999 8；精密度RSD=0.9%；10 h稳定性试验RSD=1.10%；重复性试验结果显示，5份样品含量的变异系数RSD=1.30%；3个不同浓度的加样回收试验，平均回收率为98.7%，RSD=0.90%。结论：采用高效液相色谱法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量，专属性强，结果可靠，重现性好，可用于消渴降糖胶囊中槲皮素的含量测定。
[关键词] 高效液相色谱法；消渴降糖胶囊；槲皮素
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）11（a）-078-03
Determination of quercetin in Xiaoke Jiangtang Capsule by HPLC
FU Qianxia
Gong′an Health School in Jingzhou City, Hubei Province, Jingzhou 434300, China
[Abstract] Objective: To explore the method of high performance liquid chromatography (HPLC) in the determination of quercetin in Xiaoke Jiangtang Capsule. Methods: High performance liquid chromatography was employed to test the quercetin contents of Xiaoke Jiangtang Capsules. C18 column, mobile phase of methanol-0.4% phosphoric acid (55∶45) and detection wavelength of 360 nm were adopted. Results: The peak of quercetin and the adjacent peaks could be differentiated with high column efficiency. The quercetin reference standard sample size of 0.056 to 0.560 μg had a good linear correlation with the regression equation of Y=40 103.2X－561.4 and peak area (r=0.999 8), the precision RSD was 0.9% and the RSD of 10 hours stability test result was 1.10%. In repeated tests, the RSD of coefficient of variation among the 5 samples content was 1.30%; added sample tests of 3 different concentrations had average recovery rate of 98.7% and RSD was 0.90%. Conclusion: It can be concluded that, HPLC is stable and reliable in the determination of quercetin in Xiaoke Jiangtang Capsule.
[Key words] High performance liquid chromatography; Xiaoke Jiangtang Capsule; Quercetin
消渴降糖胶囊为《部颁标准》中药成方制剂第十五册收载品种，其标准号为WS3－B－2983－98。该质量标准颁布于1998年，仅涉及番石榴叶中所含槲皮素的薄层鉴别，无含量测定项目。为了更有效地控制产品质量，笔者在消渴降糖胶囊的质量标准中增加了槲皮素含量测定项目，以便对药品质量进行定性鉴别和定量测定双重控制，更有效地保证消渴降糖胶囊的内在质量。本研究旨在探讨高效液相色谱法检测消渴降糖胶囊中槲皮素含量的可靠性。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪（P 3000型色谱泵，UV 3000型紫外检测器）；SK 8200H超声波仪（上海科导超声仪器有限公司，500 W，59 kHz）；色谱柱（KNAUER Eurospher 100，C18，5 μm，4.6 mm × 250 mm)；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸溜水。
1.2 药品
槲皮素对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：0081-9304，供含量测定用），消渴降糖胶囊样品（荆州金海药业有限公司）。
2 方法与结果
2.1 测定波长的确定
参照有关文献[1]及《中国药典》2005年版一部[2]中有关槲皮素含量测定的检测波长360 nm，同时参考槲皮素含量测定的相关文献资料，选用360 nm作为本品含量测定的检测波长。
2.2 流动相的选择
经查阅有关槲皮素含量测定的文献参考资料[3-5]，选用甲醇-0.4%磷酸（55∶45），结果该流动相能使槲皮素峰与相邻色谱峰有效分离，柱效较高，故选用甲醇-0.4%磷酸（55∶45）为流动相，流速为1 ml/min；柱温为室温；理论板数按槲皮素峰计算应不低于2 000。
2.3 提取溶剂的选择
比较甲醇和80%甲醇作为槲皮素提取溶剂，发现二者对槲皮素溶解能力相当，但用80%甲醇作溶剂时提取杂质少，槲皮素峰型对称，符合要求，故选择80%甲醇作溶剂。
2.4 提取时间的选择
取装量差异下本品内容物， 研细，分别称取3份，每份取样量分别为0.512 7、0.498 1、0.501 8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml,密塞，称定重量，分别超声处理（500 W，59 kHz）20、30、50 min，放冷至室温，密塞，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，加盐酸5 ml，水浴加热水解1 h，取出，立即冷却，转移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀后检测，即得提取含量，分别为3.74、4.01、4.00 mg/g。结果表明，超声提取30 min，即可提取完全，故选择提取时间为30 min。
2.5 水解时间的选择
取装量差异下本品内容物， 研细，分别称取3份，每份取样量分别为0.521 1、0.499 6、0.496 8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min（500 W，59 kHz），放冷至室温，密塞，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，加盐酸5 ml，分别水浴加热水解30、60、120 min，取出，立即冷却，转移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀后检测，即得提取含量，分别为3.66、4.01、3.98 mg/g。结果表明，水解60 min，可以水解完全。
2.6 盐酸加入量的选择
取装量差异下本品内容物，研细，分别称取4份，每份约0.5 g，除盐酸加入量分别为1、3、5、6 ml外，其余同含量测定方法。提取含量分别3.55、3.65、4.00、3.99 mg/g，结果表明，盐酸加入量为5 ml，即可水解完全。
2.7 溶液的制备
2.7.1 供试品溶液的制备 取装量差异下本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min（500 W，59 kHz），放冷至室温，密塞，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，加盐酸5 ml，水浴加热水解1 h，取出，立即冷却，转移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.7.2 对照品溶液的制备 精密称取经120℃干燥4 h后的槲皮素对照品适量，加80%甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。
2.7.3 阴性样品的考察 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，进样测定。结果表明，供试品中槲皮素可达到基线分离，峰保留时间适中，因此该分析条件可行。由于本品为单味制剂，且无辅料，故阴性样品即为溶剂，在上述色谱条件下，精密吸取80%甲醇10 μl，注入液相色谱仪，结果在槲皮素峰相应的位置上，无色谱峰出现，表明阴性样品对本品含量测定无干扰 。
2.8 线性关系的考察
精密称取槲皮素对照品2.8 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每毫升含28 μg的溶液，分别精密吸取2、4、8、12、16、20 μl，注入色谱仪，测定，以槲皮素的量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程和相关系数，得线性回归方程为Y=40 103.2X-561.4，相关系数r值为0.999 8。结果表明，槲皮素对照品进样量在0.056～0.560 μg范围内与峰面积呈良好的线性相关。
2.9 精密度试验
取一定浓度（26 μg/ml）的对照品溶液，连续进样5次，考察仪器精密度，精密度RSD=0.9%。结果表明，仪器精密度良好。
2.10 稳定性试验
取同一样品，在不同时间点进样测定，以测定结果的RSD来确定在一段时间内供试品溶液是否稳定，10 h稳定性试验结果显示，其RSD=1.10%。表明供试品溶液在10 h内保持稳定，能保证测定的时间要求。
2.11 重复性试验
取同一批样品5份，按标准正文所述方法测定，测定各份含量，以考察测定方法的重复性，结果测得5份样品含量的变异系数RSD=1.30%，表明方法的重现性良好。
2.12 加样回收率试验
取已知含量的同一批样品（含量为3.99 mg/g）6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液1、1、2、2、3、3 ml（对照品溶液浓度为510 μg/ml），按标准所述方法测定含量，计算回收率。结果表明，本方法的平均回收率为98.7%，RSD=0.90%。见表1。
3 讨论
实验研究表明，采用高效液相色谱法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量，在设定的色谱条件下，重现性好，检测结果稳定可靠，可以作为产品质量控制的常规检测方法。
样品检测：取样品6批，照拟定的方法测定含量，6批样品平均含量为1.19 mg/粒，按80%计则为0.95 mg/粒,考虑生产过程每批产品质量有一定的差异性，建议拟定为消渴降糖胶囊每粒含番石榴叶以槲皮素（C15H11O7）计，不得少于0.80 mg。
在提取时间的研究中发现，超声仪频率和功率对样品溶液的制备有一定的影响，建议使用同功率频率的超声仪，保证槲皮素得以有效的提出。
消渴降糖胶囊制剂的原药材仅为番石榴叶的一种，收载于广西壮族自治区中药材标准《中药材》1990年版，该药材标准无含量测定项。在对制剂进行增加含量测定情况下，必须增加对番石榴叶药材中槲皮素的含量控制，方能保证药品质量。建议番石榴叶中增加槲皮素含量检测项。[参考文献]
[1] 刘维信,冯希环,蔡宋宋，等.大葱槲皮素含量的测定[J].中国农学通报,2008,24(3):266-299.
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[3] 董关涛,宋良科,李小峰,等.天胡荽及其近缘植物的槲皮素含量测定[J].安徽农业科学,2010,38(10):5101-5103.
[4] 郭宗华,张沛,李明炬,等.银丹心泰滴丸的定性定量检测[J].中国药业,2003,12(10):32.
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（收稿日期：2011-05-19）