酶法\苦味酸法及干化学法测定血清肌酐的方法学分析

摘 要 目的:比较肌氨酸氧化酶法、干化学法和苦味酸法测定血清肌酐的可靠性及其差异性。方法:通过对三种方法测定血清肌酐的方法学比较,计算其回归方程、相关系数,并对其线性范围、精密度及抗干扰能力进行比较。结果:三种方法均有较好的重复性。酶法的线性范围较苦味酸法及干化学法宽。酶法与干化学法在总胆红素为462μmol/L时基本无干扰,苦味酸法在总胆红素为82μmol/L有明显负干扰。结论:酶法与苦味酸法,干化学法与苦味酸法间无显著性差异,但相关性不如酶法与干化学法,酶法与干化学法间有显著性差异,相关性较好。

关键词 肌氨酸氧化酶法 苦味酸法 干化学法 肌酐

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.01.137

资料与方法

仪器:①湿化学分析仪:OLYMPUS AU600全自动生化分析仪。②干化学分析仪:VITROS 250干化学仪。

试剂:酶法试剂;KIT LOT:804RDG苦味酸法试剂;KIT LOT:D050735干化学法试剂;KIT LOT:1529-4754。

质控品:RANDOX公司提供;水平2:KIT LOT,360UN;水平3:KIT LOT,187UE/3。

校准液:RANDOX公司提供;水平2:KIT LOT,298UN/2;水平3:KIT LOT,193UE。

肌酐干粉试剂:KIT LOT,75-09-05。

结 果

相关性试验:随机抽取临床病人标本50例,分别用三种方法同时测定,对所得结果进行统计学处理,以得到两两比较的回归方程、相关系数并进行显著性t检验。结果如下:干化学法与苦味酸法:y=0.6364x+36.097,r=0.7668,两法无显著性差异;苦味酸法与酶法:y=1.0134x-4.6111,r=0.7780,两法无显著性差异;酶法与干化学法:y=1.1767x-10.272,r=0.9654,两法有显著性差异。

线性试验:称取肌酐干粉试剂1g加水5ml,稀释100倍后分别配制成不同浓度16份标准品溶液,分别用苦味酸法、酶法及干化学法进行测定:标准浓度(μmol/L):75、150、250、500、750、1000、1500、2000、2500、3000、3500、5000、7500、10000、12500、15000。苦味酸法结果(μmol/L):74、147、245、486、753、981、1476、1881、2203、2414、2565、3055、3565、4021、4327、4528。酶法结果(μmol/L):76、153、256、507、759、1015、1538、2045、2569、3085、3560、5124、7581、9851、12080、13750。干化学法结果(μmol/L):72、145、240、482、755、972、1443、1925、2379、2715、3125、3668、4205、4621、5026、5125。酶法线性:12840μmol/L;苦味酸法线性:1820μmol/L;干化学法线性:2420μmol/L。

精密度试验:取无黄疸、溶血、脂血标本10例配制混合血清分装20份,分别用苦味酸法、酶法和干化学法进行测定。苦味酸法:X=89.25μmol/L,SD=0.94,CV%=1.06%;酶法:X=89.57μmol/L,SD=0.78,CV%=0.87%;干化学法:X=89.35μmol/L,SD=1.31,CV%=1.47%。

抗干扰试验:取病人标本制成混合血清,利用胆红素氧化酶在肌酐测定前进行预处理,分别用三种方法各测定3次,其肌酐均值为102.2μmol/L。分别配制7份不同浓度的胆红素标准,以1∶9的比例加入待测定样本中分别用三种方法进行测定,同时测定总胆红素浓度。肌酐计算值为92μmol/L。总胆红素单位为μmol/L。

总胆红素浓度μmol/L:25、48、82、141、205、317、462。苦味酸法结果:89、81、72、65、54、30、-15;酶法结果:93、91、95、90、87、85、87;干化学结果:90、89、90、87、81、76、78。酶法与干化学法在总胆红素为462μmol/L时基本无干扰,苦味酸法在总胆红素为82μmol/L有明显负干扰,甚至出现负值。

讨 论

肌酐是肌酸代谢终产物,人体每天肌酐的生成量相当恒定,血中肌酐浓度取决于肾小球滤过功能。测定肌酐浓度可作为肾小球滤过率爱损的指标[1]。目前测定血肌酐的方法主要有苦味酸法、酶法及干化学法等,苦味酸法成本较低,但易受干扰物质的影响,且对管道易造成污染[2];酶法虽价格较昂贵,但因其基质效应影响小,结果稳定,重复性好,较受欢迎;干化学法具有方便、抗干扰能力强等优点。

综上所述,由于我科室同时采用干化学与湿化学两种方法测定肌酐,从以上结果可以看出干化学法与肌氨酸氧化法相关性良好,并无显著性差异,酶法具有线性范围宽、抗干扰能力强、重复性好等特点。在用干化学法测定肌酐时应注意标本可检测范围,另外,当同一实验室对同一实验同时有2种以上检测方法时,对于不同的方法都应确定其自己的参考范围,建议以酶法为基准[3]。

参考文献

1 陈文彬,王友赤.诊断学.北京:人民卫生出版社,2001:380-381.

2 曾宇娟,等.酶法与苦味酸速率法测定肌酐的技术性能比较.现代医院,2007,7(6):80-81.

3 张传洽.Jaffe速率法、电极法和酶法测定肌酐结果的比较.国际检验医学杂志,2006,3(3):283-284.