一种减小环境温度对高密度脂蛋白胆固醇测定结果影响的

论文关键词：血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）

内容摘要：

本文目的是提供一种血请高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂配方，用于沉淀低密度与极低密度脂蛋白(LDL与VLDL)，并与其它进口及国产同类试剂进行比较。结论是本法测定结果稳定，操作简单，并且通过调整血清与沉淀剂的比例，提高了酶法测定HDL-C的吸光度，增加了仪器测定的灵敏度。

论文内容：

近年来，国内外对HDL-C测定方法的讨论及推荐意见（1）有不少详细报道。其测定方法主要还是离心沉淀法。虽然目前已有一步法HDL-C测定试剂盒问世，但国际权威机构并未对其认可。而硫酸葡聚糖—镁（DS--Mg2+）测定法以其分离特异性好，Mg2+不干扰酶法测胆固醇，不受保温温度，离心温度及放置时间的影响，并且较少受PH影响等优点被广泛作为推荐方法[1]。但由于其原料国内无厂家生产且进口价格昂贵，而商品试剂盒又不能得到持续供应。因此，国内大部分医疗机构主要采用与DS—Mg2+法接近，试剂易得，稳定的磷钨酸—镁（PT--Mg2+）法。但此法对温度，PH的变化很敏感，使得实验数据的可重复性降低，不利于临床治疗前后效果的判定。我室根据自己的使用经验，对该方法进行了改良，提高了试剂对PH及温度变化的稳定性，测定结果与DS—Mg2+法有很好的一致性。

1. 材料与方法

1） 沉淀剂：

试剂一：Sclavo公司提供的商品试剂盒。主要成分为DS-Mg2+。该试剂为干粉试剂，临用前复溶。使用时沉淀剂与血清之比为1:10。

试剂二：北京化工厂提供的商品试剂盒。试剂组成为：磷钨酸盐浓度4.4g/L，镁离子浓度54.2 mmol/L。使用时沉淀剂与血清之比为1:1。

试剂三：采用自配试剂。配制方法如下：

Tris—HCL缓冲液：将48.0g Tris溶解于500ml无例子水中，加入浓HCL 40ml。

称取鳞钨酸钠41.25g ，MgCl。6H2O 203.3g 溶解于上述缓冲液中，并以HCL调PH至6.1+ 0.1。将该溶液以无例子水稀释至1000ml即为应用液。使用时沉淀剂与血清之比为1:10。混合物10分钟，2500转离心15分钟。

2) 胆固醇测定：

酶法测定胆固醇。采用北京化工厂提供的商品试剂盒，操作方法见试剂盒说明。

3) 胆固醇标准液：

采用宝灵曼公司提供的参考方法定值人血清质控物。

4) 使用仪器：

荷兰Vital半自动生化分析仪。

5) 标本来源：

取自正常人体检及患者血清。于取血2hr内分离血清，当日测定。

2. 实验结果

将自配试剂和北化提供的试剂盒分别与Sclavo公司的商品试剂盒作配对比较，所 得结果如下：

自配试剂：回归方程 y=0.993x-0.025 相关系数 0.971。

北化试剂盒：回归方程 y=1.09x+0.5相关系数0.893。

3. 讨论

对于HDL--C测定准确度的决定因素主要是沉淀剂的选择及胆固醇测定的方法。目前，随着检验新技术的发展及推广，胆固醇的测定方法在大多数有条件的医院已可基本上取得一致，因此，从测定方法上对HDL--C的测定可以取得良好的可比性。而目前国内采用的HDL沉淀方法主要是PT—Mg2+法。虽然其具有价廉，稳定，高TG血清能沉淀完全，不干扰酶法分析等众多要求，但此法对温度及PH变化很敏感[2]，影响了该法对临床标本测定的可比性。因此为避免温度变化（尤其是离心过程中）引起的变异，我室在配制试剂中加入Tris—HCL缓冲液，并使PH保持在6.1左右[3]，目前国内商品试剂盒还没有涉及到该类问题，由实验结果可以看到该法与进口DS—Mg2+法试剂有较好的可比性。同时，实验采用的标准品为参考方法定值人血清，使得CHO测定过程中的各种环境因素接近真实情况，并且可以随每次质控同时运作，避免了因标准品放置时间的间隔而产生的测定值变异，提高了实验的稳定性。并且在实验过程中发现通过以该质控物作为HDL—C测定标准物的同时观察该质控物的CHO测定值可以很好的提示HDL—C测定试剂及其他一些环境变异，利于质量控制。

参考文献：

1. 韩志均，等：血清高密度胆固醇测定。临床化学常用项目自动分析法。1995

2. Grove TH: Effect of reagent pH on determination of HDL by precipitation with sodium phosphotungscate-magnesium. Clin Chem 25:560,1979

3. 李培英，等：血清高密度脂蛋白胆固醇测定法的选择。中华医学检验杂志 7：132，1984