Soleris系统在保健食品中霉菌与酵母菌快速检测领域的应用

摘 要：传统的微生物检测方法由于存在检测周期长、程序复杂等缺点，已远远不能满足现代检测的需求。Soleris微生物实时光电快速检测系统（以下简称Soleris系统）是基于传统的培养基理论和染色技术准确检测微生物常规指标的新技术，能够有效缩短检测时间、提高检测效率，提前预警。完美（中国）有限公司通过实验验证Soleris方法对常规微生物在既定时间内进行检测的准确性，应用Soleris系统对本公司保健食品进行微生物检验，结果证实Soleris系统用于保健食品检测的报警时间可控制在30小时以内，完整的检测报告输出可控制在48小时以内，并且检测结果的准确率≥97%。

关键词：Soleris快速检测系统 微生物检测 阳性试验 准确率

食品安全是一个全球性的话题，全球食品行业每年有5000亿的产值，保障食品质量与安全需要所有相关行业的共同努力。近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，可导致人类感染的致病菌的种类越来越多，微生物对人类的威胁越来越大。随着人们对食品安全的关注越来越高，与其相关的理念与技术也不断升级。传统的微生物检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与[1，2]。繁琐的检测程序不仅占用了大量的检测资源，更重要的是冗长的检测周期既不利于生产者对食品的在线控制，也不利于监管部门对问题食品的快速反应，因此运用食品微生物快速检测技术，对防止食源性疾病的危害以及对企业的发展具有重要意义[3]。

本实验主要应用Soleris微生物实时光电快速检测系统对完美（中国）有限公司自产保健食品中霉菌酵母菌进行检测，以判定该系统应用于保健食品的及时性和准确性。Soleris系统原理是基于传统的培养基理论和染色技术，结合了光电检测技术和计算机控制的模块化分析系统，对产品中的微生物进行检测。在预制的Soleris试剂瓶中放置特异性的培养基和专用指示剂，当微生物在培养瓶中生长时，会发生代谢产物改变培养基pH值或释放CO2等生化反应，从而引起指示剂的颜色变化。Soleris系统利用光电检测仪器，每隔6分钟监测试剂瓶底部琼脂栓的颜色变化，Soleris软件将监测到的数据收集并传输到计算机中进行分析统计，然后即可得到准确的检测结果[4]。

1 实验部分

1. 1 仪器与试剂

Soleris微生物实时光电快速检测系统，高压灭菌锅，生化培养箱，超净工作台，冰箱，水浴锅，天平，微量移液枪，DYM-109试剂瓶，YI-110（补充液）。

检测保健食品：胶囊产品健扬胶囊（英文缩写JYC）、粉剂产品肽藻营养粉（英文缩写PSN）、口服液产品活立多（英文缩写OLI）（以上均为完美（中国）有限公司所产保健食品）。

1.2 样液制备

1.2.1 菌液制备

菌种来源：黑曲霉ATCC16404、白假丝酵母菌ATCC10231以及完美高纤乐产品中分离出的霉菌。混合菌液：酵母菌菌种斜面培养物和霉菌菌种斜面培养物2～8℃保存（第二代）。从斜面培养物中传代至PDA斜面上，28℃培养3天，作为工作菌株使用。首先用接种环在新鲜接种培养的酵母菌斜面上挑取两环酵母菌至90mL无菌水中，混合均匀。然后再用10mL无菌水洗脱一支新鲜接种培养的霉菌斜面，用接种环轻轻来回擦拭霉菌斜面，将孢子洗脱下来。用移液管吸取5mL孢子洗脱液沿瓶壁缓慢注入上述90mL无菌水中，混合均匀，得到霉菌酵母菌的混合菌液。此菌液100记为原液C0。用移液管吸取上述混合菌液10mL至90mL无菌水中，震摇使其混合均匀，此菌液10-1记为C1。依次按此操作程序，制备10倍系列稀释菌液。每递增稀释一次，换用一支移液管。菌液记为C0，C1，C2，…C7，C8。

1.2.2 样品液制备

称取10g样品至80mL无菌水中，共计称取7组，分别记为样①，样②，…，样⑦。然后分别向样品液中接种10mL上述已制备的菌液，即加10mL C2菌液至样①中，加10mL C3菌液至样②中，…，加10mLC8菌液至样⑦中，含不同浓度霉菌酵母菌的1∶10的阳性样品液制备完成。

1.3 检测流程

加入150μL YI-110（补充液）于DYM-109检测试剂瓶中，将配置好的样①～⑦加入到DYM-109检测试剂瓶中，拧紧盖子轻轻振摇使待检样品与试剂瓶内液体混合均匀。将试剂瓶置于Soleris快速检测系统培养，录入样品检测信息开始检测，28℃，培养48h，读取检测结果进行统计（包括假阳性率*、假阴性率*、准确性*、特异性*、灵敏度*）。同时对样①～样⑦采用国标方法（GB/T 4789.15-2003）检测霉菌、酵母菌。

2 结果与讨论

2.1 芦荟矿物晶Soleris快速方法验收结果（与基准方法国标方法相比），见表1、图1。

GB法检测结果

2.2 肽藻营养粉Soleris快速方法验收结果（与基准方法国标方法相比），见表3、表4、图2。

2.3 活力多Soleris快速方法验收结果（与基准方法国标方法相比），见表5、表6、图3。

准确性即指参考方法（G B平板法）与替代方法（Soleris快速法）对于指定样品所得到的检测结果的一致性。特异性即指当参考方法没有检测到目标分析物时，替代方法相对于参考方法也不会检测到目标分析物的能力，即评估该方法的假阳性率。灵敏性即指当参考方法检测到目标分析物时，替代方法也检测到目标分析物的能力，即评估该方法的假阴性率。

由图1可见， Soleris快速法检测健扬胶囊产品的曲线中Soleris快速检出时间与含菌量存在较好的负相关的关系，即含菌量越多，检出时间越早。当产品中含菌量大于标准25CFU/g时，系统在22h左右报警。由图2可见，Soleris快速法检测肽藻营养粉产品的曲线中Soleris快速检出的曲线跟阳性曲线一致，且检出时间与含菌量存在较好的负相关的关系，即含菌量越多，检出时间越早。对肽藻营养粉而言，当产品中含菌量大于标准25CFU/g时，系统在20h左右报警。由图3可见，Soleris快速法检测活力多产品的曲线中Soleris快速检出的曲线跟阳性曲线一致，同样其检出时间与含菌量存在较好的负相关的关系，即含菌量越多，检出时间越早。对活力多而言，当产品中含菌量大于标准25CFU/g时，系统在20h左右报警。快速检测及其自动化综合引用微生物学、化学、分子生物学等试验技术对微生物进行分离、检测。和传统方法比较，更快、更方便、更灵敏，可以同时得到定量的检测结果。因此Soleris系统既可以适应国内食品检测的特定要求，又能为企业的快速放货提供信心保证[5]。完美公司遵从质量第一原则从满足消费者对食品安全与生命健康的迫切要求出发，将新型检测技术与传统检测相结合，给予产品质量双重保障，对存在微生物风险的产品能够在30h内发出警报，缩短了分析不合格的原因，减少了不合格品的产生，提高了过程监控反应速度，利于产品的质量控制与生产控制，既是对自己严格要求，也是对消费者负责任的体现。

参考文献

[1] 唐灵， 郭奕芳， 吴翊等. Petrifilm 纸片法和国际法检测奶制品细菌总数和大肠菌群数的结果比较[J].中国卫生检验杂志，2000， 10 （3）：325-327.

[2] 吴清平， 周艳红， 蔡芷荷. 卫生微生物特异性显色培养基的研究与应用[J].中国卫生检验杂志，2005， 15（1）： 124-126.

[3] 熊强，史纯珍，刘钊.食品微生物快速检测技术研究进展.食品与械[J].2009，9（25）

[4] 北京安普生化科技有限公司.Soleris系统在乳制品微生物快速检测领域的应用[J].食品安全导刊.2012，7-34-35

[5] 于宝军，Jake Knickerbocker. Soleris微生物快速检测系统：专注微生物快速检测保障食品安全[J].食品安全导刊，2011，334-35.