尿液中检测HIV－1抗体进行男同性恋HIV病毒感染筛查的研究

作者：宋丹　陶晓燕　蔡文德　魏安业 【关键词】 尿液

摘要：目的：用酶联免疫吸附试验（ELASA）进行男同性恋者尿液中艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）抗体检测，并与血清学检测结果进行比较，探讨采用尿液检测HIV抗体进行特殊人群HIV感染筛查的可行性。方法：平行采集受检男同性恋者的外周静脉血及尿液标本，分别用血液和尿液ELISA法检测HIV抗体,阳性血清标本采用WB法确认。结果：检测109人，血清学检测结果3人阳性，并经WB实验确认为HIV病毒感染，尿液检测3人为阳性，与血清学实验对照，准确性为100%。结论：尿液检测HIV-1抗体结果可靠，可作HIV病毒感染的筛查。

关键词：男同性恋;酶联免疫吸附试验; 艾滋病病毒Ⅰ型

Analysis of HIV-1 Antibody in Urine Samples for MSM AIDS Infection Test

Abstract: Objective： To compare the consistency of result of detecting HIV-1 antibody in MSM urine samples and serum specimens by ELISA. Method：The grouped urine and serum samples of MSM were collected and HIV-1 antibodies in them were screened by urine and serum ELISA kits , respectively. The positive serum specimens were retested by western-blot test. Result：Of the 109 serum samples , 3 samples showed positive reaction; The results were confirmed by western-blot. Of the 109 urine samples , 3 showed positive reaction. The consistency of testing results was 100%.Conclusion: Urine specimen can be used to screen the HIV-1 antibody.

Key words:MSM；ELISA；HIV-1

目前,中国常用酶联免疫吸附试验( ELISA) 法检测血液中艾滋病病毒I 型(HIV-1) 抗体的方法筛查HIV 感染者,采集标本时对病人造成针刺损伤,给被检者带来痛苦和不便，不利于标本的采集，给大规模特殊人群的筛查带来一定的困难，不利于预防工作的开展。本研究引进尿液检测HIV抗体的方法，平行检测尿液、血液标本，以血液检测结果为对照，评估尿液检测结果的准确性，为开展人群HIV-1抗体筛查作出准备。

1 材料与方法

1.1 检测对象：采集深圳市各酒吧及娱乐场所中109名男同性恋并愿意接受HIV-1抗体检测者的尿液及静脉血，同一人的尿液标本及血液标本编号统一对应。尿液每份留8ml，转入一次性朔料试管封口后，保存于4℃。将静脉血离心后分离血清，转入一次性塑料试管封口保存于-20℃，待检。

1.2 尿液检测方法：使用美国Calypte Biomedical Corporation 公司生产的Calypte TM HIV-1 尿酶免疫试剂盒。检测严格按说明书操作。在550型酶标仪上判读,计算Cut off 值,判定结果。

1.3 血液检测方法：采用北京金豪生物技术有限公司生产的血液HIV抗体ELISA 试剂盒，按说明书操作。阳性血清标本用WB确证实验进行确诊。

2 结果

在收集的109份男同性恋的尿液标本中，经Calypte TM HIV-1 尿酶免疫试剂ELISA方法检测，检测出3份标本为阳性，血清标本ELISA方法检测，3人为阳性，阳性标本经WB确认试剂检测，确认为HIV-1病毒感染。以血清学检测结果为准，尿液ELISA检测HIV-1抗体感染的准确性及符合率为100%。深圳市男同性恋HIV-1病毒感染率为2.75%。

3 讨论

目前,中国最常用检测HIV 抗体的方法是用ELISA 法检测血液中的HIV 抗体,并以蛋白印迹法 (WB) 加以确证。ELISA 法的基本原理为免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物。用酶标记法检测样品时,酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计、普通光学显微镜和电子显微镜观察结果。在ELISA检测中,酶的催化有放大作用,故这种技术特异性强,灵敏度高,半衰期较长。蛋白印迹试验(WB) 常用于鉴别抗特异抗原决定簇的抗体,敏感性和特异性均较其它方法高,本法现作为HIV 感染的确诊实验。基本原理是HIV 全病毒抗原经过SDS - PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后将通过电泳转移技术转入硝酸纤维膜上。将此膜切割成条状,每条膜上均含有经电泳分离过的HIV 病毒抗原。待检血清用稀释液稀释,再直接加到硝酸纤维膜上使其充分接触,如血清中含有抗-HIV ,此时就会与膜条上的抗原结合,冲洗除去多余抗体,再加入抗人-IgG酶结合物并孵育,经洗涤后滴加底物,抗原、抗体结合条带呈紫褐色为阳性反应。由于不同带型的出现在诊断中意义不同,因此,严格的阳性指标应该是env、gag 和POL 三种基因产物各有条带出现。

由于血液采集须用损伤性标本采集法,检测对象的依从性差,还易使工作人员暴露于HIV 感染的危险之中,这给进行人群HIV病毒感染筛查工作带来了一定的困难。研究结果表明，HIV 感染者的尿液、唾液、、泪液中均含有HIV-1 抗体,而尿液为最易得且无损伤的标本,其HIV-1 抗体与血清抗体平行［1］，其成分主要为IgG［2］。尿液标本易采集、保存和运输,采集HIV感染者尿标本时保密性强,患者易于接受。由于在安全、便捷等方面更具优势,尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新手段,并得到世界艾滋病预防中心的大力推荐。并为艾滋病检测提供了一个全新的发展方向［3，4］。

本研究平行采集高危人群血液和尿液标本检测HIV抗体,以血液WB检测结果为准,验证和探讨尿液ELISA法检测HIV-1抗体的可行性。本次检测结果表明，尿液ELISA 法检测HIV-1 抗体的灵敏度达100%，特异性也为100%，证实尿液ELISA法不仅是一种灵敏度和特异度都较高的HIV-1抗体检测方法,而且具有安全、无损伤、标本收集简便、容易保存等优点, 从尿液中检测HIV-1 抗体,给HIV感染者和AIDS防治工作提供了极大的便利,可用于HIV 感染者监测和筛查。在本研究中由于调查的群体的特殊性，标本取样时很多是在一种较为特殊的环境中进行的，采集血液标本时很不方便，有些人就因此拒绝采样，容易造成漏检；相反，尿液标本的采集很顺利，而且被检者容易接受。在人群筛查时，可作为一种常规取样手段，尿检阳性后，再抽血进行确诊，标本采集的范围大大缩小，这无疑会给检测工作带来极大的方便，提高筛查的人群比率。

当然，目前尿液还存在一定的问题，Calypte TM HIV-1 尿酶免疫试剂盒只包被HIV-1抗原,因此只能检出HIV-1抗体，无法检测HIV-2抗体。有研究者认为这客观上会有HIV-2感染的漏检。但目前人类流行的基本上都是HIV-1 ,HIV-2 主要分布在西非,东南亚及中国少见［5］。中国虽有数例经血清学证实的HIV-2 ,但经基因水平证实的只有2例,且都是从非洲归国者。因此,用尿液ELISA 法作HIV-1 抗体检测进行高危人群HIV病毒感染筛查是可行的。

参考文献：

［1］Cao y ,Hosein B ,Borkowsky W,et al. Antibodies to human immunodeficiency virus type 1 in the urine specimens of HIV-1 seropositive individuals［J］. AIDS Res Hum Retro ,1989 ,5 :311-319.

［2］Cao Y ,Friedman Kien AE ,chuba JV ,et al. IgG antibodies to HIV-1in urine of HIV-1 seropositive individuals［J］. Lancet ,1988 ,337 (2) : 831.

［3］魏民．HIV 实验室检测研究进展和发展趋势［J］．国外医学病毒学分册, 2003,10(3):65-69．

［4］Mylonakis E , Paliou M, Lally M, et al .Laboratory testing for infection with human immunodeficiency virus :established and novel approaches［J］.Am Med , 2000 ,109(7) :568-576.

［5］Weber B , Berger A , Rabenau H , et al . Evaluation of a New Combined Antigen and Antibody Human Immunodeficiency virus screening assay ,Vidas hiv duo ultra［J］. Clin Microbiol , 2002 ,40(4):1420-1426.