HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量

摘 要：目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）检测法测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，以蒸发光散射检测器检测，采用外标二点法对数方程计算含量。色谱柱为KromasilNH2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，以甲醇-乙腈(50∶50)为流动相，流速:1.0mL/min，柱温：30℃，蒸发光散射检测器：雾化器温度:60℃，漂移管温度：90℃，气体（氮气）流速：1.0L/min。结果：盐酸水苏碱进样量在0.16~1.6μg范围内呈良好的线性关系，r=0.9990，平均回收率为98.73％，RSD=0.93％(n=6)。结论：本方法快速简便，结果准确可靠，重现性好，可用于益母草流浸膏的质量控制。

关键词：益母草流浸膏；盐酸水苏碱；HPLC-ELSD

中图分类号：R914文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0045-02

益母草流浸膏是2005年版《中国药典》一部收载的品种，其中以薄层扫描法测定益母草中盐酸水苏碱的含量，考虑到而薄层扫描法的影响因素较多，对益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量测定方法进行了探索。用HPLC-ELSD法测定了益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量，该法操作更简便、灵敏度高、稳定性及重现性好，可作为母草流浸膏中盐酸水苏碱含量测定的新方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Agilent 1200高效液相色谱仪，英国PL-ELS2100型蒸发光散射检测器，浙江大学N2010色谱数据工作站，日本GR-202电子分析天平(十万分之一)。

1.2 试药

益母草流浸膏（广西医科大学制药厂，批号：20060701），盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：11702-200508），流动相甲醇、乙腈为色谱纯（美国Scientific Fisher Technology），甲醇、乙醇均为分析纯（广东光华化学厂有限公司）。

2 实验方法与结果

2.1 色谱及检测的条件

色谱柱：KromasilNH2(250mm×4.6mm，5μm，S/N:22N25110)，柱温：30℃，流动相：甲醇-乙腈（50∶50），流速：1.0mL/min。ELSD检测器：雾化器温度：60℃，漂移管温度：90℃，载气N2流速：1.0L/min。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品14.50mg，置10mL容量瓶中，加乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.45mg/mL的溶液，0.22μm滤膜滤过作为对照品储备溶液。精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品8.10mg，置100mL容量瓶中，加乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.081mg/mL的溶液，0.22um滤膜滤过作为对照品溶液。进样量：10μL、20μL。

2.3 供试品溶液的制备

取益母草流浸膏约1g，精密称定，置25mL容量瓶中，加入乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，0.22μm滤膜过滤后作为供试品溶液。进样量：10μL。

2.4 线性关系的考察

精密吸取对照品溶液（0.08mg/mL）2μL、5μL、15μL、20μL按2.1项下的色谱条件分别进样，测得峰面积，以进样量的常用对数为横坐标，以峰面积的常用对数为纵坐标，绘制标准曲线计算得回归方程。Y=1.511X+5.073，r=0.9990。表明盐酸水苏碱在0.16~ 1.6ug范围内呈良好的线性关系。

2.5 专属性实验

精密取缺益母草的阴性样品1.0529gmL，按供试品制备阴性对照品溶液。按上述方法测定，结果阴性对照样品在盐酸水苏碱峰位置无干扰。见图1。

2.6 精密度实验

取同一份盐酸水苏碱对照品溶液（0.080mg/mL），在2.1项的色谱条件下连续进样6次，进样量10μL，测定其峰面积，求得盐酸水苏碱峰面积对数平均值为：4.95，求得RSD为0.12％，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性实验

取同一供试品溶液（批号：20060701），分别于2，4，6，8，12h在2.1项的色谱条件进样测定，进样量10μL，测定其峰面积，求得盐酸水苏碱峰面积对数平均值为：5.20，RSD为0.38％，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一供试品溶液(批号：20060701)，平行取样6份，按2.2法操作并检测。结果盐酸水苏碱平均含量为2.98mg/g，RSD为0.85%，表明方法重复性良好。

2.9 回收率试验

取已知含量的益母草流浸膏样品，精密平行称取6份样品，分别精密加入0.36mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液4.0mL、4.1mL、4.2mL、4.3mL，按2.2.2项下供试品溶液制备的方法处理，按2.1项的色谱条件测定含量，并计算回收率。，结果平均回收率为98.73％，RSD=0.93％(n=6)，结果见表1。表明方稳定可控。

2.10 样品测定

取三批益母草流浸膏样品，2.1、2.2、2.3项色谱条件及对照品和供试品溶液的制备方法检测，并计算盐酸水苏碱的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 检测方法的选择

取盐酸水苏碱对照品于紫外分光光度计上扫描，结果在波长201nm处有最大吸收，已低于甲醇等常用流动相的截止波长，不宜用紫外检测器对其进行检测，而可以用通用型检测器蒸发光散射检测(ELSD)器进行检测。

3.2 HPLC-ELSD法和TLCS的比较

《中国药典》2005年版一部益母草流浸膏的含量测定为檗层扫描法（TLCS法），对同一批益母草流浸膏(批号：20060701)平行取样6份进行含量测定，得到其盐酸水苏碱含量为0.298mg/g，RSD=2.95%，可见TLCS法和HPLC-ELSD法测得含量的结果是相同的，而且用HPLC-ELSD法的RSD更小，操作更简便，耗时更少。

3.3 色谱柱和流动相的选择

色谱柱的选择:经实验，当采用C18反相柱时，盐酸水苏碱的峰有严重的脱尾的现象，而当采用氨基正相柱时，峰形较好，故采用氨基柱。

流动相的选择:经实验用甲醇-水(95∶5)或乙腈-水(95∶5)作为流动相时供试品图谱的分离度均大于1.5，但盐酸水苏碱峰的峰形拖尾，且基线不平，而用甲醇-乙腈(50∶50)作为流动相时，样品中盐酸水苏碱峰分离效果及峰形均良好，故选择甲醇-乙腈(50∶50)作为流动相。

参考文献：

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:化学工业出版社，2005:280.