Cdx2基因过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响分析

【摘要】目的对Cdx2基因过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响进行分析。方法分别抽取Cdx2转染组和对照组的细胞总RNA，分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子（Cy3/Cy5）标记cDNA探针，与含有21522条人类22K基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号，应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析。结果在21522条基因中，胃癌细胞间差异性表达基因为有551条，其中302条上调，249条下调。其中与免疫相关的基因共有7个，分别为HLA-E、RRAS、ULBP2、HLA-G、HLA-C、CTSB、CTSL，均表达上调。结论Cdx2过表达上调了胃癌MGC-803细胞免疫相关基因的表达，这可能与胃癌细胞生物学行为的改变有关。

【关键词】胃肿瘤；尾型同源盒基因2；肿瘤生长 文章编号：1004-7484（2013）-12-6932-02

尾侧型同源转录因子-2（CDX2）是人体中肠道特异性表达的核转录因子，在肠黏膜上皮细胞的发育及保持其形态、结构特征中起着重要作用。CDX2蛋白在正常胃黏膜中无表达，在绝大多数胃黏膜肠化生中呈阳性表达，提示CDX2蛋白在胃黏膜细胞中的异常表达是发生胃黏膜肠化生的重要起始事件。

1资料与方法

1.1主要试剂人胃癌MGC-803细胞株购自中国科学院上海生物细胞研究所；稳定过表达Cdx2的胃癌细胞株由本实验室保存；Trizol购自In-virogen公司；基因表达谱芯片采用博奥生物公司提供的22k人类基因组寡核苷酸芯片；扫描仪为LuxScan10K/A双通道激光扫描仪；处理软件为GenePixPo3.0 [1]。

1.2方法

1.2.1总RNA提取及mRNA的纯化用常规的一步法抽提MGC-803/Cdx2细胞和胃癌MGC-803细胞的总RNA；紫外分析及电泳。

1.2.2芯片扫描及数据处理送博奥生物有限公司检测制备。芯片用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪进行扫描。采用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行分析。先把图像信号转化为数字信号，根据Cy5和Cy3总体信号的globalmean对各芯片进行片间线性校正；然后对芯片上的数据进行归一化；最后以差异为2畅0倍的标准，即Cy5和Cy3比值（Ratio）>2.0或

2生物信息学分析结果

根据以上判断标准胃癌MGC-803细胞组和MGC-803/Cdx2细胞组之间差异性表达基因551条，其中表达上调的差异性基因302条，下调基因249条，差异性表达基因中功能信息不明的有73条。进一步的Pathway分析显示，差异性表达基因中与免疫相关的基因共有7种，均表达上调，见表1。

3讨论

基因芯片是伴随着人类基因组计划发展起来的一项高通量筛选技术，具有低消耗、高灵敏度的特点，它能在同一实验条件下同时筛检众多基因的差异表达，这对肿瘤易感因素的判定、发生发展机制的明确、早期诊断和治疗以及预后的估计等诸多方面发挥着重要作用[3]。

CDX2录属于尾相关性同源盒基因家族，属于肠特异性的转录因子，最早CDX2基因及其相关蛋白在果蝇中分离成功，发现与parahox家族是呈高度同源性。近年来人体染色体的研究表明，CDX2基因的全长22 23kb，位于染色体的13q12-13，是由3个外显子和2个内合子组成，而与之相对应的CDX2蛋白包含有311个单氨基酸，其通过螺旋-环-螺旋的方式结合于DNA的相应区域，以转录因子的形式调节着DNA的表达。

总之，在胃癌的进展过程中，Cdx2的过表达引起了众多基因的表达发生改变。提示Cdx2过表达不仅影响一大批基因的正常表达，还对免疫相关基因有影响，最终导致了胃癌细胞生物学行为发生改变。继续对本研究结果中的免疫相关基因进行深入研究将有助于阐明Cdx2影响胃癌生物学行为的分子机制，进而寻找出新的胃癌诊断和治疗靶标。

参考文献

[1]李姝，王邦茂，张洁.Cdx2和MUC2在反流性食管炎Barrett食管和食管腺癌中的表达[J].中华消化内镜杂志，2006（05）.

[2]王娜娜，秦蓉，储婧，等.CDX2在胃癌及癌前病变组织中的表达及其临床意义.中国组织化学与细胞化学杂志，2010，19（6）：597-603.

[3]马玉林，肖强，谢玉波，李雷，唐振勇，尹永硕.Cdx2对胃癌细胞生物学性状的影响[J].中华实验外科杂志，2008，25（4）.