土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响

[摘要] 目的 探讨土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响。 方法 将70只KM小鼠随机分为对照组、地塞米松组、消银颗粒组、异常黏液质成熟剂组、土大黄根提取物组（1 g/kg组、2 g/kg组、4 g/kg组）7个组，每组各10只，按体重分别给予0.5%羧甲基纤维素钠、1.05 mg/kg地塞米松、1.577 g/kg消银颗粒、2 g/kg异常黏液质成熟剂及1、2、4 g/kg土大黄根提取物灌胃。采用小鼠尾部鳞片角化不全模型，观测灌胃给药后小鼠的一般状况、体重、脏器指数、血生化指标及尾部皮肤组织病理学变化。 结果 与对照组比较，1、2、4 g/kg组小鼠行为活动、皮毛、粪便、饮食等均未见异常，脏器指数、体重无明显变化，差异无统计学意义（P > 0.05）；血清肌酐、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇均升高（P < 0.05或P < 0.01）。与对照组比较，1 g/kg组血清碱性磷酸酶升高、磷酸肌酸激酶降低；2 g/kg组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶升高，尿素降低；4 g/kg组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、三酰甘油升高，磷酸肌酸激酶、尿素降低，差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。1、2、4 g/kg组促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，且呈剂量规律性。 结论 土大黄根提取物能改变银屑病表皮的角化不全，但其作用与血生化指标的变化可能无明显关联。

[关键词] 土大黄根提取物；小鼠尾部鳞片角化不全模型；组织病理学；血生化

[中图分类号] R965 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）07（b）-0004-05

[Abstract] Objective To explore the effect of Rumex L. root extract on mouse tail model. Methods 70 mice were randomly assigned to CON group， DXM group， XYKL group， MB group and Rumex L.root extract group （1 g/kg group， 2 g/kg group， 4 g/kg group）， with 10 mice in each group， and according to the weight they were given 0.5% CMC-Na， 1.05 mg/kg Dexamethasone， 1.577 g/kg Xiaoying granules， 2 g/kg Munziq Balgam， and 1， 2， 4 g/kg Rumex L.root extract respectively by gavage. After gavage， general condition， body weight， organ index， blood biochemistry， tail skin histopathology of mice were observed by mouse tail scales parakeratosis model. Results Compared with CON group， mice of the 1， 2， 4 g/kg group had no obvious abnormalities in activity， fur， faeces， diet， and had no obvious change in organ index and body weight， there were no statistically significant differences （P > 0.05）； serum Crea， GLU， TP， ALB， TCHO， HDL-C， LDL-C of the 1， 2， 4 g/kg group increased （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with CON group， serum ALP of the 1 g/kg group increased and CK decreased； serum ALT， AST of the 2 g/kg group increased and Urea decreased； serum ALT， AST， ALP of the 4 g/kg group increased and CK， Urea decreased （P < 0.05 or P < 0.01）. 1， 2， 4 g/kg group promoted formation of epidermis granular layer on mouse tail skin and dose dependent. Conclusion Rumex L.root extract can change parakeratosis of psoriasis skin， which has a therapeutic effect， but its function and blood biochemical parameters of mice may not have clear correlation.

[Key words] Rumex L. root extract； Mouse tail model； Histopathology； Blood biochemistry

土大黄（Rumex L.）是蓼科（Polyonaceae）酸模属（Rumex）植物，多年生草本。维吾尔药物名为阿提库拉克（At kulak）、欧麻孜（Hummaz）、土日谢（Turux）、塔给库斯（Tag kusi），其药用部位为全草、叶子、根茎及根，用于肾、肝、胃肠疾病及皮疹、皮肤瘙痒等[1-3]。本研究探讨土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响。

1 对象与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药材及药品 土大黄根由新疆华安中药饮片有限责任公司（GSP）提供（批号：12110），并由新疆大学资源与环境科学学院努尔巴依・阿不都沙力克教授鉴定为土大黄根。醋酸地塞米松（DXM）片（国药准字H3302 0822，批号：140670，浙江仙琚制药股份有限公司）。消银颗粒（XYKL）（国药准字Z20000019，批号：130809，陕西康惠制药股份有限公司）。异常黏液质成熟剂（MB）（批号：M20052633）由新疆维吾尔自治区维吾尔医院制剂室（GMP认证）提供。

1.1.2 实验动物 KM小鼠80只，雄性，体重18～22 g，由新疆实验动物研究中心提供。实验动物生产许可证号：SCXK（新）2011-0001。实验动物使用许可证号：SYXK（新）2011-0005。实验开始前检疫，经一般行为观察，选用符合要求的70只小鼠进行试验。

1.2 实验仪器与试剂

1.2.1 实验仪器 7100全自动生化分析仪（日立公司），KD-TS3D生物组织自动脱水机、KD-BM生物组织自动包埋机（浙江金华科迪仪器设备有限公司），RM2235切片机、DM2500生物显微镜、MVC2000显微成像系统（德国莱卡公司）。

1.2.2 试剂 丙氨酸氨基转移酶（ALT，批号：140113030）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST，批号：140215020）、碱性磷酸酶（ALP，批号：140314022）、磷酸肌酸激酶（CK，批号：142514019）、总胆红素（TBIL，批号：140615012）、总蛋白（TP，批号：140815002）、白蛋白（ALB，批号：140915013）、葡萄糖（GLU，批号：141514029）、尿素（Urea，批号：141315001），肌酐（Crea，批号：141014014）、总胆固醇（TCHO，批号：141614024）、三酰甘油（TG，批号：141714028）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C，批号：142114020）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C，批号：142014016）均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产。

1.3 方法

1.3.1 土大黄根提取物的制备 称取适量土大黄根以8倍量的70%乙醇溶液室温密闭浸泡1 h后回流提取3次（1.5～2 h），过滤，合并滤液减压浓缩，真空干燥，得干膏粉。

1.3.2 分组及用药 因小鼠尾部表皮天然缺少颗粒层细胞，类似银屑病表皮角化不全病理改变，因而可作为银屑病角化异常的传统天然模型[4-7]。将70只KM小鼠，按体重随机分为7组：CON组（0.5% 羧甲基纤维素钠）、DXM组（1.05 mg/kg DXM）、XYKL组（1.577 g/kg XYKL）、MB组（2 g/kg MB）、土大黄根提取物组（RE-L组、RE-M组、RE-H组，分别给予1、2、4 g/kg土大黄根提取物），每组各10只。给药组以0.2 mL/10 g体积灌胃给予相应药物，CON组灌胃等体积的0.5%（0.5%羧甲基纤维素钠），每日1次，连续15 d。

1.3.3 观察指标及检测方法 末次给药2 h后，摘眼球法取血。4℃下3000 r/min离心10 min，通过7100全自动生化分析仪检测血清生化指标。取小鼠脾脏、胸腺、心脏、脑、肾脏、肝脏观察并称重，计算脏器指数（脏器指数 = 脏器重量/体重）。随后，取鼠尾距离根部3 cm皮肤标本，用15%福尔马林溶液固定、脱水、石蜡包埋并HE染色。在光镜下观察尾部皮肤组织病理学变化。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用One-Way ANOVA检验，两组间比较采用LSD-t检验；若方差不齐，两两比较采用Dunnett's T3法。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠一般状况及体重变化

与CON组比较，各给药组小鼠在实验期间，行为活动、皮毛、粪便、饮食等均未见异常，体重无明显变化，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.2 脏器指数变化

与CON组比较，DXM组小鼠脾脏指数、胸腺指数降低，脑指数升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。其他各组小鼠心脏指数、肾脏指数、肝脏指数与CON组比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.3 血生化变化

与CON组比较，DXM组、XYKL组和MB组小鼠血清ALT、TP、ALB、TCHO、HDL-C升高；DXM组小鼠血清AST、Crea、GLU、TG升高，XYKL组小鼠血清CK降低、Crea升高，MB组小鼠血清LDL-C升高，Urea降低，差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。与CON组比较，RE-L组、RE-M组、RE-H组小鼠血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C升高；RE-L组小鼠血清ALP升高，CK降低；RE-M组小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低；RE-H组小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低，差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。见表3。

2.4 皮肤组织病理学变化

CON组小鼠皮肤完全角化，缺乏颗粒层。棘层、基底层正常，基底膜完整。与CON组比较，DXM组小鼠皮肤部分出现颗粒层；XYKL组小鼠皮肤可见部分区域出现颗粒细胞层；MB组小鼠皮肤完全角化，出现1～2层颗粒细胞层；RE-L组小鼠皮肤少部分区域出现颗粒细胞层；RE-M组小鼠皮肤部分区域出现颗粒细胞层；RE-H组小鼠皮肤大部分区域出现颗粒细胞层。见图1。

3 讨论

目前常用的银屑病动物模型有小鼠尾部鳞片角化不全模型、普萘洛尔诱导耳部角化模型、咪喹莫特诱导小鼠模型等[8-12]。其中，小鼠尾部鳞片角化不全模型[13-17]于20世纪70年代初被应用于探讨药物抗银屑病样作用，目前已被国内外公认，并得到了普遍应用。小鼠尾部鳞片角化不全模型间接评价药物疗效的动物模型。该模型可以部分模拟银屑病表皮动力学紊乱的特点，且经济易得，故被作为筛选抗银屑病药物的常用模型。

土大黄的植物来源较多，我国大部分省区均有分布，药用资源丰富，在民间广泛使用。据现代药理学研究文献综述发现[18]，土大黄具有多种药理学作用，其中抗炎、抗肿瘤作用研究较多，对皮肤病研究报道极少。近几年，本课题组对新疆维吾尔自治区进行民间调查后发现，土大黄用于治疗银屑病等各种皮肤病，并取得了一定的临床效果。本课题组前期实验结果表明，土大黄根提取物具有治疗实验性银屑病的作用[19-20]。本实验结果表明，与CON组比较，1、2、4 g/kg土大黄根提取物处理后，小鼠行为活动、皮毛、粪便、饮食等未见异常，脏器指数、体重无明显变化（P > 0.05），而血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C均升高（P < 0.05或P < 0.01）；此外，1 g/kg土大黄根提取物可使实验小鼠血清ALP升高，CK降低（P < 0.05或P < 0.01）；2 g/kg土大黄根提取物可使小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低（P < 0.05或P < 0.01）；4 g/kg土大黄根提取物可使小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低（P < 0.05或P < 0.01）。1、2、4 g/kg土大黄根提取物均可促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，且呈剂量规律性。

综上所述，土大黄根提取物（1、2、4 g/kg）能改变银屑病表皮的角化不全，从而具有治疗作用。但其作用与小鼠血生化指标变化可能无明显关联，这方面有待于深入研究。

[参考文献]

[1] 阿不力克木・努尔买买提阿吉，穆塔力甫・艾力阿吉・艾米奇.维吾尔医常用草药（维文）[M].乌鲁木齐：新疆人民卫生出版社，2006，3：335-336.

[2] 吐尔洪・吾买尔.维吾尔医生药学（维文，上册）[M].乌鲁木齐：新疆人民卫生出版社，2006，3：362-363.

[3] 刘勇民.维吾尔药志：下册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：319-323.

[4] Wu J，Li H，Li M. Effects of baicalin cream in two mouse models：2，4-dinitrofluorobenzene-induced contact hypersensitivity and mouse tail test for psoriasis [J]. International Journal of Clinical and Experimental Medicine，2015，8（2）：2128-2137.

[5] 李正翔，杨东，段蓉，等.凉血化斑颗粒治疗银屑病的药理作用及临床疗效观察[J].中草药，2015，46（7）：1028-1033.

[6] 石敏，石婷，向阳芳，等.吴茱萸次碱软膏对小鼠尾部鳞片银屑病模型的治疗作用[J].现代生物医学进展，2015，15（28）：5414-5417.

[7] 杨皓瑜，王金平，李梦琳，等.清热凉血中药对小鼠银屑病模型的干预机制[J].北京中医药大学学报，2015，38（2）：111-114.

[8] Schaper K，Dickhaut J，Japtok L，et al. Sphingosine-1-phosphate exhibits anti-Proliferative and anti-inflammatory effects in mouse model of psoriasis [J]. Journal of Dermatological Science，2013，71（1）：29-36.

[9] Xia JX，Mei XL，Zhu WJ，et al. Effect of FGF10 Monoclonal antibody on psoriasis-like model in guinea pigs [J]. International Journal of Clinical and Experimental Pathology，2014，7（5）：2219-2228.

[10] Sun Y，Zhang J，Huo R，at al.Paeoniflorin inhibits skin lesions in imiquimod-induced psoriasis-like mice by down regulating inflammation [J].International Immunopharmacology，2015，6，24（2）：392-399.

[11] Andrés RM，Montesinos MC，Navalón P，et al. NF-κB and STAT3 inhibition as a therapeutic strategy in psoriasis：in vitro and in vivo effects of BTH [J]. Journal of Investigative Dermatology，2013，133（10）：2362-2371.

[12] Kundu-Raychaudhuri S，Datta-Mitra A，Abria CJ，et al.Severe combined immunodeficiency mouse-psoriatic human skin xenograft model：a modern tool connecting bench to bedside [J]. Indian Journal of Dermatology Venereology & Leprology，2014，80（3）：204-213.

[13] Jarrett A. The physiology and pathophysiology of the skin [J]. The Lancet，1973，302（7826）：445.

[14] Spearman RIC，Jarrett A. Biological comparison of isomers and chemical forms of vitamin A（retinol） [J]. British Journal of Dermatology，1974，90（5）：553-560.

[15] Bhatia A，Singh B，Wadhwa S，et al. Novel phospholipid-based topical formulations of tamoxifen： evaluation for antipsoriatic activity using mouse-tail model [J]. Pharm Dev Technol，2014，19（2）：160-163.

[16] 魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2010：1315-1318，737-761，1299-1300

[17] 热比姑丽・伊斯拉木，阿瓦姑力・伊斯拉木，斯拉甫・艾白.银屑病动物模型研究概况[J].中国药房，2015，26（19）：2726-2729.

[18] 热比姑丽・伊斯拉木，斯拉甫・艾白.土大黄研究进展[J].科技导报，2013，31（30）：67-71.

[19] 张燕，李治建，斯拉甫・艾白，等.土大黄提取物中蒽醌类成分的含量测定及其对ECV-304细胞的增殖作用[J]. 中药药理与临床，2012，28（3）：144-146.

[20] 热比姑丽・伊斯拉木，曼尔旦・尼亚孜，尤力都孜・买买提，斯拉甫・艾白.土大黄不同提取物对银屑病小鼠模型的作用[J].西北药学杂志，2015，30（1）：47-51.

（收稿日期：2016-04-02 本文编辑：任 念）