丙泊酚对内毒素诱导大鼠肺组织TNF

【关键词】丙泊酚；内毒素；肺瘤坏死因子；

摘要：目的：观察丙泊酚对内毒素(LPS)诱导大鼠肺组织肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)释放的影响。方法：将雄性Wistar大鼠60只随机分为正常对照组(C组，输注生理盐水)、LPS对照组(L组，股静脉注射LPS5mg／kg后输注生理盐水)和丙泊酚处理组(Lp组，股静脉注射LPS5mg／kg后立即输注丙泊酚10mg・kg-1・h-1)。按预设时相分别于1h、2h、3h、4h时间点放血处死各组动物，酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织细胞因子TNFα、IL1β水平的变化。结果：L组大肺组织中TNFα、IL1β水平与C组相比较显著增高(P<0.05或P<0.01），经丙泊酚处理后，此作用得到部分逆转。结论：丙泊酚能抑制内毒素诱导的大鼠肺组织细胞因子TNFα、IL1β水平上升。

关键词：丙泊酚；内毒素；肺瘤坏死因子；

白细胞介素1内毒素(LPS)侵入机体，引起肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素8(IL8)、细胞间粘附因子(ICAM1)等炎症介质过度表达，是导致急性肺损伤的一个重要因素［1，2］。近年来，已证实丙泊酚具有良好的抗氧化和抑制细胞因子的功能，然而，关于丙泊酚对内毒素所致肺部炎症的保护作用及其分子作用机理至今尚未完全阐明。本实验采用酶联免疫吸附注(ELISA)观察丙泊酚对内毒素诱导的大鼠肺组织TNFα、IL1β释放的影响，旨在探讨它们之间的关系。

1材料和方法

11实验材料

健康雄性Wistar大鼠60只，由武汉大学医学院实验动物中心提供，体重(200±50)g。丙泊酚(英国阿斯利康公司)；LPS(E.coliLPSserotype0111:B4)(美国Sigma公司)；大鼠TNFαELISA试剂盒(美国R&D公司)；大鼠IL1βELISA试剂盒(美国Bender公司)；WZS50FZ微量输液泵(德国B／Braun公司)。

12动物模型和实验分组

实验大鼠以1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射行基础麻醉。随机分为3组：①正常对照组(C组)：实验中单纯给予生理盐水，首次剂量为1ml/kg，随后以1ml・kg-1・h-1持续静脉滴注；②LPS对照组(L组)：股静脉注射LPS(5mg/kg)后，持续静脉输注生理盐水(1ml・kg-1・h-1)；③丙泊酚处理组(Lp组)：股静脉注射LPS(5mg/kg)后，立即输注丙泊酚(10mg/kg的诱导剂量，随后以10mg・kg-1・h-1的速度持续静脉输注)。按预设时相在1h、2h、3h、4h各时间点放血处死大鼠，立即开胸取肺，-70℃保存。

13细胞因子的测定

取右肺称重后置于匀浆缓冲液中，以每克组织加入10ml缓冲液的比例加入缓冲液。缓冲液中含蛋白酶抑制剂混合物，包括1mmol/LPMSF；1μg/mlleupeptin;1μg/mlaprotinin溶于含0.5%Triton×100的PBS中(pH72)。标本匀浆后，以15000g离心10分钟，取上清，使用大鼠ELISA试剂盒分别检测细胞因子TNFα和IL1β的含量。

14统计学分析

实验数据均以均数±标准差表示，应用SPSS软件进行单因素方差分析和t检验的统计学处理，P<0.05为差异有显著性。

2结果

21丙泊酚对大鼠肺组织TNFα水平的影响

与C组相比，L组大鼠肺组织TNFα水平显著上升，2h即达到峰值，此后迅速下降，但仍高于C组；Lp组大鼠肺组织TNFα水平也高于C组，但其上升幅度远低于L组，峰值延后，出现在3h，3h、4h点时L和Lp两组间均无显著性差异。见图1。

22丙泊酚对大鼠肺组织IL1β水平的影响

与C组相比，L组大鼠各时间点肺组织IL1β水平均显著增高，经丙泊酚处理后则明显降低，见图2。图1肺组织匀浆中TNFα水平的变化图2肺组织匀浆中IL1β水平的变化

3讨论

急性肺损伤(ALI)发病机制复杂，患病率和死亡率居高不下，一直是临床重症监护中的治疗难点。就其发病机理而言，目前普遍认为，前炎症介质(TNFα、IL1β、IL8等)、粘附分子(ICAM1、P选择素等)及细胞因子的过量生成起关键作用［1，2］。革兰氏阴性细菌败血症是临床急性肺损伤的常见原因之一，其内毒素脂多糖(LPS)中的类脂A具有极强的生物学活性，诱使细胞因子的释放和激活。LPS作为一种致伤因素，可直接损伤血管内皮细胞，使血管通诱性增加，大量富含蛋白质的液体由肺血管溢出，形成肺间质水肿和肺泡水肿，影响气体交换和血氧合功能，造成组织缺氧，从而造成对机体的损害。因此，本实验在股静脉注射LPS(5mg/kg)后应用ELISA实验方法，分别观察了LPS诱导的大鼠肺组织TNFα和IL1β释放的变化。结果显示，LPS致伤后，肺组织TNFα、IL1β水平显著增高，提示生物活性介质的过度表达在内毒素所致肺部炎症的发病过程中起到重要作用。

丙泊酚作为一种新型麻醉镇静药已广泛应用于临床，其对机体的免疫调节作用逐渐被人们所接受，并已证实有良好的抗氧化和抑制细胞因子的功能。Mikawa等［3］已经发现了异丙酚能够抑制中性粒细胞的吞噬作用以及活性氧的释放；Crozier等［4］发现异丙酚和阿芬太尼静脉麻醉时可抑制腹式子宫切除术患者血浆中IL6的释放；Galley等［5］证明异丙酚可抑制体外经LPS诱导中性粒细胞中IL8的产生；Taniguchi等［6］也发现了异丙酚可降低内毒素血症时血清TNFα、IL6、IL10水平及中性粒细胞的活化。本实验首次观察了丙泊酚对内毒素诱导的大鼠肺组织TNFα、IL1β释放的影响，发现丙泊酚能对动物肺组织中炎症因子TNFα、IL1β的释放产生抑制效应的，这可能是丙泊酚发挥免疫调节功能，对急性肺损伤起到保护效应的作用机制之一，这将为急性肺损伤的临床治疗提供一定的理论依据，但其详细作用机理尚有待于进一步研究。

参考文献

1ArmstrongL,MillarAB.Relativeproductionoftumournecrosisfactoralphaandinterleukin10inadultrespiratorydistresssyndrom.Thornx,1997,52:442~446.

2ThomasRM.LungcytokinesandARDS.Chest,1999,116:2~8.

3MikawaK,AkamatsuH,NishinaK,etal.Propofolinhibitshumanneutrophilfunctions.AnesthAnalg,1998,87:695~700.

4CrozierTA,MullerJE,QuittkatD,etal.Effectofanaesthesiaonthecytokineresponsestoabdominalsurgery.BrJAnaesth,1994,72:280~285.

5GalleyEF,DubbelsAM,WebsterNR.Theeffectofmidazoamandpropofoloninterleukin8fromhumanpolymorphonuclearleukocytes.AnesthAnalg,1998,86:1289~1293.

6TaniguchiT,YamamotoK,OhmotoN,etal.Effectsofpropofolonhemodynamicandinflammatoryresponsestoendotoxemiainrats.CritCareMed,2000,28:1101~1106.