银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

[摘要] 目的：研究银丹心脑通及其主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护性作用。方法：采用全心停灌再灌注的方法建立大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型。SD大鼠分为空白组（control），模型组（model），银丹心脑通全方组（YDXNTC），银杏提取物组（GBE），丹参醇提物组（SM-E），丹参水提物组（SM-H），混合物组（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片；MC），银杏+丹参醇提物配伍组，银杏+丹参水提物配伍组，丹参醇提物+丹参水提物配伍组。离体心脏平衡后，空白组正常灌流70 min；模型组正常灌流10 min，停灌30 min，复灌30 min；给药组以含有相应药物的灌流液正常灌流10 min，余同模型组。实验过程中全程记录心电图，观察室性心动过速/室颤（VT/VF）发生率，心脏停跳时间，复跳时间，正常律动时间及心率失常持续时间。复灌结束后，将心肌匀浆，测定SOD活力，MDA，LDH，CK-MB和心肌钙蛋白I（cTnI）释放量。结果：①银丹心脑通全方组，丹参醇提物，丹参水提物，混合物能够延长心脏停跳时间，缩短复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间，但对VT/VF发生的发生没有明显作用。银杏提取物对减少复跳时间、正常律动时间及心率失常持续时间有较好作用，同时能够改善VT/VF的发生。除银杏+丹参水提配伍对心脏停跳时间无明显影响以外，主要成分配伍对心脏停跳时间，复跳时间，正常律动时间及心率失常持续时间均有良好作用，且银杏+丹参醇提对VT/VF发生也有明显作用。②银丹心脑通全方组，银杏提取物，丹参醇提物，银杏+丹参醇提物配伍组，丹参醇提物+丹参水提物配伍组能够提高心肌SOD活力，降低MDA含量；丹参水提物，混合物，银杏+丹参水提物配伍组仅使MDA含量降低。③银丹心脑通全方组和丹参水提物减少了LDH的释放。银杏提取物，丹参醇提物，丹参水提物及银杏+丹参醇提物配伍降低了CK-MB含量。④银杏+丹参醇提物配伍抑制了cTnI的释放。结论：银丹心脑通、主要成分及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，其作用机制可能与抗氧化，减轻钙超载有关。

[关键词]银丹心脑通；主要成分配伍；心肌缺血再灌损伤；保护作用

冠心病是导致人类死亡的主要病因之一，再灌注是急性心肌梗死最有效的治疗手段，但再灌注损伤是影响再灌注治疗的重要因素[1]。心肌在经历缺血后，当再恢复血液供应时，由于能量衰竭，氧自由基生成，钙超载，炎症反应，细胞凋亡等因素，缺血心肌及周围组织会受到进一步的损伤[1-2]。因此预防及减轻再灌注损伤已成为抗心肌梗死的热点问题。

银丹心脑通是由银杏，丹参，灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片精制而成的天然苗药制剂[3-4]。临床上主要用于冠心病心绞痛，心律失常，心肌梗死等[3]。其相关研究主要集中在临床应用及疗效观察方面，有关药效物质基础的研究尚未报道。本实验采用离体心脏灌流模拟缺血再灌注损伤研究了银丹心脑通及主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，为探讨其主要作用物质基础奠定基础。

1材料

1.1药品与试剂

银杏提取物（GBE），丹参醇提物（SM-E），丹参水提物（SM-H），混合物（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片；MC），均由贵州百灵制药股份有限公司提供。乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（批号20130927）、丙二醛（MDA）试剂盒（批号20130911）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号20130912），均购自南京建成生物工程研究所。肌酸激酶同工酶（CK-MB）试剂盒（批号20131010）、心肌钙蛋白I（cTnI）试剂盒（批号20131010），均购自上海蓝基生物科技有限公司。

1.2动物

健康SD雄性大鼠，250～300 g，SPF级，购自北京大学医学部实验动物科学部，合格证号SCXK（京）2011-0012。

1.3仪器

Langendorff离体心脏灌流系统（西班牙PanLab公司）；FI55002蠕动泵（法国吉尔森公司）；MP150多导生理记录系统（美国Bipac公司）；DFM-96γ放射免疫分析仪（合肥众城电子系统有限责任公司）；MK3酶标仪（赛默飞世尔科技有限公司）。

2方法

2.1提取物制备[5]

2.1.1 银杏提取物制备 银杏叶粉碎，稀乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇，浓缩物加至大孔吸附树脂柱上，1次用水及不同浓度乙醇洗脱，收集相应洗脱液，回收乙醇，真空干燥，粉碎成极细粉，总黄酮质量分数25.4%，K-H液配制，用于实验。

2.1.2 丹参醇提物制备 乙醇回流提取2次，过滤，合并滤液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成极细粉，丹参酮ⅡA质量分数5.31%，K-H液配制，用于实验。

2.1.3 丹参水提物制备 2.1.2项的药渣加水煎煮2次，过滤，合并滤液，浓缩成清膏，加乙醇使醇含量达70%，搅匀，静置，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成极细粉，酚酸质量分数70.91%，K-H液配制，用于实验。

2.1.4 混合物制备 灯盏细辛（野黄芩苷质量分数2.75%）、绞股蓝（绞股蓝总皂苷质量分数20.90%）、山楂（酚类质量分数9.49%）及三七（总皂苷质量分数5.49%）加水煎煮2次，过滤，合并滤液，浓缩，加乙醇使醇含量达70%，搅匀，静置，取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎成极细粉；大蒜提取大蒜油（大蒜素质量分数0.73%）；天然冰片研成极细粉（质量分数81.48%）；将各成分混合备用，K-H液配制，用于实验。

2.1.5 配伍组制备 分别将上述银杏提取物、丹参醇提物、丹参水提物的极细粉两两混合，K-H液配制，用于实验。

2.2分组

SD大鼠分为空白组（control），模型组（model），银丹心脑通全方组（YDXNTC），银杏提取物组（GBE），丹参醇提物组（SM-E），丹参水提物组（SM-H），混合物组（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片MC），银杏+丹参醇提物配伍组（GSEC），银杏+丹参水提物配伍组（GSHC），丹参醇提物+丹参水提物配伍组（SEHC），根据前期实验结果确定给药剂量，每组6只，见表1。

2.3模型建立

SD大鼠用20%的乌拉坦麻醉，迅速摘取心脏置于Langendorff离体心脏灌流装置，用Krebs-Henseleit 灌流液以恒定速度进行灌流（K-H液：NaCl 118 g， NaHCO3 24 g， CaCl2・2H2O 2.5 g， KCl 4.7 g， KH2PO4 1.2 g， MgSO4・7H2O 1.2 g， Glucose 11 mmol・L-1，pH 7.4）[6-7]。装置内部保温系统保持心脏温度37 ℃，灌流液持续通以95%O2-5%CO2的混合气体。连接MP100多导生理记录系统，将2根电极分别插在心尖部（+）和主动脉根部（-），全程记录离体心脏的心电图。稳定15 min后，空白组正常灌流70 min；模型组正常灌流10 min，停灌30 min，复灌30 min；药物处理组用含有药液的K-H液正常灌流10 min， 其余操作同模型组[6-8]。

2.4指标检测

2.4.1 心电图指标观察 实验过程中全程记录心电图，观察VT/VF发生率，心脏停跳时间，复跳时间，正常律动时间，心率失常持续时间。

2.4.2 抗氧化指标检测 复灌结束后，立即取下心脏，称取心尖部组织用生理盐水制成10%的心肌匀浆，离心后取上清-20 ℃冻存。按照试剂盒操作测定SOD， MDA含量。

2.4.3 心肌酶指标检测 实验结束后，迅速摘下心脏，称取心尖部组织用生理盐水制成10%的心肌匀浆，离心后取上清-20 ℃冻存。按照试剂盒操作检测LDH， CK-MB。

2.4.4 心肌钙蛋白I（cTnI）测定 方法同2.3.3。

2.5数据统计分析

数据以±s表示，采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，P

3结果

3.1对心率失常的影响

与模型组比较，银杏提取物和银杏+丹参醇提物配伍组的VT/VF发生率明显降低（P

3.2对抗氧化指标的影响

与空白组相比，模型组SOD活力明显降低，MDA含量显著升高（P

3.3对心肌酶指标及cTnI的影响

与模型组比较，银丹心脑通全方及丹参水提物明显减少LDH释放（P

4讨论

尽管心血管疾病的基础研究及临床治疗在不断发展，但冠心病仍发病率较高[1，9]。目前为止，冠心病的治疗方法主要有溶栓、介入、外科搭桥、冠状动脉血管再通等[10]。但不论何种治疗都会面临心肌缺血再灌注损伤[10]。据此，尽可能的预防及减轻心肌缺血再灌注损伤是心血管研究领域的热点问题[11]。

银丹心脑通由几种天然中草药制成，遵循中医理论配伍使用能够活血、行气止痛、消积化滞[1]。用于治疗心绞痛、气滞引起的高血压及中风、血瘀、痰阻等[12]。同时，银丹心脑通也具有增加冠脉血流量，改善心肌缺血缺氧状况，临床疗效较好[12]。

本文采用离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观察银丹心脑通及主要成分配伍对心肌的保护作用，并探讨其药效物质基础。

研究结果表明，银丹心脑通，其主要成分及主要成分配伍均对缺血再灌注损伤有一定的保护作用。首先，银丹心脑通全方，丹参醇提物，丹参水提物，混合（灯盏细辛，三七，山楂，绞股蓝，大蒜，天然冰片）能够延迟停灌后的心脏停跳时间，减少复灌期的心脏复跳时间、恢复正常律动时间及心率失常持续时间，显示对缺血再灌注损伤引起的心率失常具有保护作用。银杏提取物对VT/VF的发生有明显改善作用，同时减少了复灌期的心脏复跳时间、恢复正常律动时间及心率失常持续时间。主要成分配伍对VT/VF的发生，心脏停跳时间，复跳时间，恢复正常律动时间和心率失常持续时间也有明显的改善作用。同时，银丹心脑通全方及其主要成分提高缺血心肌SOD活力，降低MDA含量。结果说明银丹心脑通、主要成分及主要成分配伍具有一定的抗氧化作用。心肌酶指标检测显示，银丹心脑通全方和丹参水提物能够减少LDH释放；银杏提取物、丹参醇提物、丹参水提物降低CK-MB水平；提示银丹心脑通及主要成分对心肌酶有一定影响。钙超载是心肌缺血再灌注损伤发生的机制之一。本文结果表明，银杏+丹参醇提物抑制心肌损伤过程中cTnI的产生，说明银丹心脑通对心肌缺血再灌注损伤的保护作用可能与抑制钙超载有关。综上，银丹心脑通、主要成分及其主要成分配伍对心肌缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

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Protection effect of Yindan Xinnaotong capsule and main compositions

compatibility on myocardial ischemia/reperfusion injury

WANG Wan-dan1， WANG Lan2， CHENG Long3， YIN Xiao-jie2， XU Hai-yu2， WANG Jian-lu2，

LIANG Ri-xin2*， YANG Hong-jun2*

（1.Traditional Chinese Medicine of College， Capital Medical University， Beijing 100069， China；

2.Institute of Chinese Materia Medica， Chinese Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

3.Medicinal Plant Research Institute， Chinese Academy of Medical Sciences， Beijing 100193， China）

[Abstract] Objective： To study the protected effect of Yindan Xinnaotong capsule （YDXNTC） and main components compatibility on myocardium ischemia/reperfusion injury. Method： Global ischemia/reperfusion was adopted to induce myocardial ischemia/reperfusion injury （MIRI） in isolated rat heart. Sprague-Dawley （SD） rats were divided into control， model， YDXNTC， Ginkgo biloba extract （GBE） group， ethanol extract of Salvia miltiorrhiza （SM-E） group， aqueous extract of Salvia miltiorrhiza （SM-H） group， mixed compatibility of other components in YDXNTC （MC）， GBE and SM-E compatibility （GSEC）， GBE and SM-H compatibility （GSHC）， and SM-E and SM-H compatibility （SEHC）. During the experiment， electrocardiogram was recorded to observe cardiac arrest time， heart resuscitation time， regaining normal rhythm time， the incidence and duration of arrhythmias （VT/VF）.At the end of reperfusion， hearts were arrested and homogenated to assay the activity of superoxide dismutase （SOD），and the content of malondialdehyde （MDA）， lactate dehydrogenase （LDH）， creatine kinase-MB （CK-MB）， cardiac troponin I. Result： ①YDXNTC， SM-E， SM-H and MC elevated cardiac arrest time， also reduced rebeating time， restoring normal rhythm time as well as the duration of arrhythmia， but no remarkable impact on VT/VF occurrence. GBE was effective for incidence of VT/VF， also achieved good effect on shortening rebeating time， restoring normal rhythm time and arrhythmia duration. Likewise， obviously reduced rebeating time， restoring normal rhythm time and arrhythmia duration， and evaluated cardiac arrest time were also exhibited in compatibility groups except that no lengthened cardiac arrest time was detected in GSHC. And the incidence of VT/VF was decreased by GSEC.②YDXNT， ginkgo biloba extract （GBE）， ethanol extract of salvia miltiorrhiza （SM-E）， GBE and SM-E compatibility （GSEC）， and SM-E and aqueous extract of salvia miltiorrhiza （SM-H） compatibility （SEHC） could improved SOD and decreased MDA level. SM-H， mixed compatibility of other elements in YDXNTC （MC） and GBE and SM-H compatibility （GSHC） showed a role on MDA reduction.③LDH was declined by YDXNT and SM-H. CK-MB was reduced by GBE， SM-E， SM-H， and GSEC. ④The release of cTnI was only inhibited by GSEC. Conclusion： YDXNTC，primary materials and main components compatibility has a certain protection effect on MIRI， its mechanism may be related to antioxidant and calcium overload reduction.

[Key words] Yindan Xinnaotong capsule； protection； main components compatibility； myocardial ischemia/reperfusion

doi：10.4268/cjcmm20140929