复方参芪祛斑颗粒冲剂中黄芪甲苷的含量分析

[摘要] 目的：测定复方参芪祛斑颗粒冲剂中黄芪甲苷的含量。方法：采用薄层扫描法。结果：测定方法的平均加样回收率为97.10%，RSD为1.34%。结论：本方法简便、准确、重现性好，为该制剂质量控制提供一定的参考。

[关键词] 复方参芪祛斑颗粒；黄芪甲苷；薄层扫描法

复方参芪祛斑颗粒冲剂由黄芪、当归、人参、红花、丹参、麦冬、白芷等中药材组成，具有养血调肝、益气健脾、洁面消斑的功效。主要用于治疗和预防肝血不足、脾气虚弱、脉络不畅所致的黄褐斑。该制剂中成分复杂，方中黄芪为君药，黄芪甲苷为黄芪中的主要成分之一，本文为控制本品的内在质量，参考文献【1~3】采用薄层扫描法测定制剂中黄芪甲苷的含量，为该制剂生产的质量保证奠定了基础。

1仪器与材料

1.1仪器

日本岛津CS-930型双波长薄层色谱扫描仪；SP100紫外检测器；UV2401PC紫外―可见分光光度计（日本岛津）；定量毛细管（USA，Drummond Scientific Co.）；D101大孔吸附树脂柱（天津制胶厂）；H54AR电子分析天平（瑞士Mettle）。

1.2材料

复方参芪祛斑颗粒冲剂及所用药材均由本医院制剂室提供（颗粒冲剂由999单味中药配方颗粒组成），黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供；薄层层析硅胶G（烟台市化学工业研究所生产）；所用试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱条件吸附剂：硅胶G（含0.3%CMC―Na），薄层板厚度约300un，于105℃活化0.5h。展开剂：氯仿―甲醇―水（13：7：2）在10℃以下放置过夜的下层溶液。展开8cm。显色条件：喷以10%硫酸乙醇液，105℃烘5-6min。

2.2溶液的制备

对照品溶液的制备精密称定黄芪甲苷对照品5.05mg，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备取样品约6g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40mL浸泡过夜，再加入甲醇适量，加热回流提取6h，提取液蒸干，残渣加水20mL溶解，溶液置分液漏斗中，以水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇液；用氨试液洗涤3次，每次20mL，弃去氨试液；再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL；正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加少量水溶解，加入已处理好的D101大孔吸附树脂柱上（内径1.5cm，长12cm，先用70%的乙醇100mL、继用水100mL预洗），以50mL水洗脱，弃去水液；再用40%的乙醇60mL洗脱，弃去40%的乙醇洗脱液；最后用70%的乙醇100mL洗脱，收集70%的乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

阴性对照溶液的制备取缺黄芪阴性样品，按供试品溶液制备的提取方法，制得缺黄芪阴性对照溶液。

2.3扫描条件用薄层扫描仪，在370~700nm对在上述条件下展开的黄芪甲苷斑点进行光谱扫描，可见黄芪甲苷对照品与供试品斑点在530nm处有最大吸收，且缺黄芪的阴性对照无干扰，故选择测定波长为530nm，参比波长为700nm，采用反射法锯齿扫描，线性参数SX=3，狭缝为0.4mm*0.4mm，灵敏度中等。

2.4线性关系分别精密吸取上述黄芪甲苷对照品溶液1、2、3、4、5μL依次点于薄层板上，按上述拟定条件层析展开，，扫描测定。以点样量为横座标，峰面积值为纵座标，绘制回归方程：Y=176.4984X―0.1273，r=0.9986。结果表明黄芪甲苷在0.50~5.05μg范围内有良好的线性关系。

2.5稳定性试验取同一对照品溶液点于薄层板上，展开，显色，每隔30min对同一斑点扫描一次，取2h内测定结果，峰面积值基本未变，RSD为1.78%，结果表明显色后2h内稳定。

2.6精密度试验同板吸取对照品溶液6份，各4ul，点于同一硅胶G薄层板上，按上述方法展开，显色，扫描，结果表明同板精密度较好。其中点样次数n=6，平均值=14025.2，RSD=1.02%。

异板吸取对照品溶液5份，各4ul，分别点于6块硅胶G薄层板上，按上述方法展开，显色，扫描，结果表明异板精密度较好。其中点样次数n=5，平均值=14227.4，RSD=6.49%。

2.7重复性试验取同一批号复方参芪祛斑颗粒样品5份，按含量测定项目下的方法进行测定，测得结果x=0.0218%，RSD=2.21%。

2.8加样回收率试验取已知含量的复方参芪祛斑颗粒样品（黄芪甲苷含量为0.0217%）约2g，精密称定，加入一定量黄芪甲苷对照品，依上述方法测定，回收率测定范围在95.37%~100.05%之间。（结果见表1）

表1复方参芪祛斑颗粒中黄芪甲苷回收率测定

2.9样品含量测定照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液5μL，对照品溶液2、4μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，按上述层析扫描条件测定，结果见表2。

表2黄芪甲苷含量测定结果

3小结与讨论：

1、中药成分复杂，仅以单一成分为对照，难以反映药物质量，在可能的情况下，应采用有效成分（或指标成分）与对照药材的办法，真实反映药品质量。

2、黄芪系方中君药，黄芪甲苷是黄芪中主要活性成分之一，因此，以黄芪甲苷为指标，采用薄层色谱扫描法测定该制剂中黄芪甲苷的含量。因本品所含成分较多，在含量测定过程中，为减少干扰，本文用乙醚萃取除去挥发油等脂溶性成分的干扰，再经正丁醇萃取，用氨试液洗涤以除去酸性成分的干扰，通过D101大孔吸附树脂柱洗脱，有效地排除了背景色带的干扰现象，其斑点分离清晰。

3、黄芪甲苷含量测定试验中，采用排除干扰时，还应注意选用液乙醇的比例，当分别用水、10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇和40%乙醇洗脱时，除去杂质，不会造成黄芪甲苷损失。选用50%及以上乙醇液经检验含有黄芪甲苷，故选用水及40%乙醇洗脱杂质，收集70%乙醇洗脱液备用。

附图：

1~3、供试品

4、黄芪甲苷对照品

5、阴性对照

999单味中药配方颗粒

参考文献：

[1]中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]苗明三主编.现代实用中药质量控制技术，第一版.北京：人民卫生出版社，2002.

[3]郑虎占主编.中药现代研究与应用，第一版.北京：学苑出版社，1997.