天苍颗粒质量标准浅析

[摘要]目的？？建立天苍颗粒的质量标准。方法？？采用薄层色谱法对方中当归、天麻进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对方中的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进行含量测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（13﹕87）为流动相，检测波长为320nm。结果？？通过薄层色谱可鉴别出方中成分。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量测定线性范围为0.1132～1.132μg；平均回收率为99.60%；RSD值为1.2%。结论？？定性鉴别和含量测定方法准确可行，重复性好，可有效地控制天苍颗粒的质量。

[关键词] 天苍颗粒？？定性鉴别 含量测定

中图分类号：R28411 文献标识码：B 文章编号：

天苍颗粒由制何首乌、当归、白芷等药组成，具有温经散寒，除湿止痛，舒筋壮骨的功能。适用于跌打损伤、筋骨酸痛，各类关节炎、滑膜炎等各类骨病。但其质量标准并不完善，故需要深入研究。本文利用TLC法和HPLC法进行相应的标准研究，从而提高完善天苍颗粒的质量标准。

1.仪器和试药

LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10AVP紫外检测器（日本岛津公司），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品（0844-200003），当归对照药材（120927-200411），白芷对照药材（120945-200707），天麻对照药材（120944-200006），天麻素对照品（110807-200205），苍术对照药材（120970-200403）均购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他所用试剂均为分析纯。天苍颗粒样品（批号：20121101，20121102，20121103）。

2.定性鉴别

2.1当归薄层鉴别：？取本品5g，研细，加乙醚50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺失当归的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI？B）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。

2.2天麻薄层鉴别：？取本品5g，研细，加70%甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加70%甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取天麻对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺失天麻的阴性样品5g，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI？B）试验，分别吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液10μl，对照药材及对照品溶液各5μl，点样于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（9：1：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应位置上，有相同颜色斑点，阴性对照无干扰[1]。

3含量测定

3.1色谱条件：色谱柱Agilent？ODS？Cl8（5m，150？mm×4.6mm）；以乙腈-水（13﹕87）为流动相，检测波长为320nm，柱温35℃，流速1.0ml/min，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。

3.2样品的制备

对照品溶液的制备：取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异下的本品内容物，混匀，取适量，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，称重，超声处理（功率250W，频率30KHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，虑液置棕色瓶中备用。

阴性对照溶液的制备取处方除何首乌的全部药味，按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

3.3系统适用性实验

？？？？？？专属性实验：分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件检测，在待测成分保留时间处，阴性对照无其他成分干扰，结果表明，测定方法专属性强，无干扰。

线性关系考察：分别精密吸取对照品1、2、4、6、8、10μL溶液，？注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.1132～1.132μg范围内，呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样，连续测定6次，记录峰面积，RSD值2.13%，表明精密度良好，符合含量测定要求。

稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别在制备后0，2，6，12，24？h后依法测定何首乌苷的峰面积，结果2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积RSD为0.73%？，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

重复性试验：取同批样品，依法平行制备6份，分别测定2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值为1.03%，结果表明供试品制备方法重复性良好，符合含量测定要求。

回收率试验：取已知含量的样品6份，每份约0.5？g，精密称定，置具塞锥形瓶中再分别加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，按供试品溶液的制备项下操作，结果：称样量分别为0.0820g、0.0832 g、0.0814 g、0.0799 g、0.0841 g、0.0789 g；样品量分别为0.0262 mg、0.0266 mg、0.0260 mg、0.0256 mg、0.0269 mg、0.0252 mg；加入量均为0.025mg；测得量分别为0.051 mg、0.052 mg、0.051 mg、0.051 mg、0.052 mg、0.050 mg；回收率分别为97.92%、100.28%、101.32%、100.01%、99.30%；X%均值为99.60%；RSD值为1.2%

样品测定：分别精密吸取供试品溶液与对照液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得，结果：20121101批次样品含量0.3212mg/g、RSD值为1.3%；20121102批次样品含量0.3245mg/g、RSD值为1.5%；20121103批次样品含量0.3216mg/g、RSD值为2.7%；

4.讨论

2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为何首乌的主要有效成分，参考有关文献？，经研究对比，建立了2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定法，经方法学验证，本法重现性好、阴性对照无干扰，操作简单，便于满足工业化生产的需要，可有效控制本品的质量，为保证用药的有效性提供技术支持。

色谱条件的选择依据本文先后考察了甲醇-水、乙腈-甲醇-水，参照相关文献[2-4]最后采用乙腈-水（13﹕87）作为流动相测定连翘苷的含量，检测波长为320nm，流速为1ml/min。理论塔板数不低于3000，主峰与其他杂质峰分离度大于1.5，符合要求。

参？考？文？献：

1.国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

2.陈彦清， 张辉等.高效液相色谱法测定润燥通便合剂中二苯乙烯苷含量[J].中国健康月刊，2011，30（4）：391.

3.谢国芳，高敏，张利等.HPLC测定定益脑宁片中二苯乙烯苷的含量[J].现代中医药，2010，30（4）：86-87.

4.廖海民，胡正海，贺定翔.制首乌中二苯乙烯苷含量的HPLC测定[J].西北药学杂志，2006，21（1）：3-4.