CEA mRNA检测诊断胃周围淋巴结癌细胞微转移

[摘要] 目的：评估癌胚抗原(CEA) mRNA在诊断胃癌细胞淋巴结微转移方面的应用价值。方法：以胃周围淋巴结为检测标本，用反转录套式聚合酶链反应技术(RT-NP-PCR)检测CEA mRNA，用常规病理学方法检查癌细胞。结果：胃癌组胃周围淋巴结38.8% CEA mRNA阳性,病理学检测17.9%癌细胞阳性；良性胃病组胃周围淋巴结均阴性。RT-NP-PCR检测CEA mRNA与病理学检查癌细胞的结果比较，有非常显著性差异(P

[关键词] 胃癌；癌胚抗原信使核糖核酸；淋巴结；癌细胞微转移

[中图分类号]R446[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（b）-013-02

Detection of CEA mRNA in lymph node for diagnosis of gastric cancer

cells micrometastasis

WANG Zhu-jun, LI Ling, SHEN Xing-bin, SUN Bao-xin, HU Jian-gong, XUE Cheng-yan

（Center Laboratory, Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Chengde 067000，China）

[Abstract] Objective: To acquaint the applied value on carcinoembryonic antigen (CEA) mRNA being detected in lymph node to diagnose gastric cancer cells micrometastasis. Methods: The detected specimens were the lymph nodes nearby stomach in the study. CEA mRNA in the specimens was detected by reverse transcriptase-nested primers-polymerase chain reaction (RT-NP-PCR). Cancer cells were detected by routine pathologic method. Results: In the gastric cancer group, the positive results of CEA mRNA were 26 (38.8%) and the positive results of cancer cells were 12 (17.9%) in the lymph nodes from 67 patients with gastric cancer. In the control group, the detected results were all negative in lymph nodes from 21 patients with benign gastric disease. The difference positive results were significant (P

[Key words] Gastric cancer; Carcinoembryonic antigen mRNA; Lymph node; Cancer cells micrometastasis

了解胃周围淋巴结是否有胃癌细胞微转移，对手术后的治疗措施制订和对预后的判断等方面具有重要的意义。但由于方法学的限制，常规病理学方法对癌细胞微转移检测的敏感性较低，难以满足临床诊断胃癌细胞微转移之需要。研究发现，应用反转录-套式-聚合酶链反应(reverse transcriptase-nested primers-polymerase chain reaction，RT-NP-PCR)技术，检测胃周围淋巴结标本癌胚抗原信使核糖核酸(carcinoembryonic antigen messenger ribonucleic acid，CEA mRNA)指标，诊断胃癌细胞淋巴结微转移有较高的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

所选88例病例均经临床检查、病理学及实验室诊断、影像学诊断、介入检查、临床治疗等而确诊。其中，胃癌患者67例，男34例、女33例，年龄42～66岁；良性胃病患者(对照组)21例，男14例、女7例，年龄40～70岁，包括良性胃穿孔11例、良性胃溃疡10例。

1.2 标本处理

选取手术后送病理检查的新鲜淋巴结组织为检测标本，所有用于实验检测的组织标本均有明确的病理学诊断结论，其中胃癌组67人份、对照组21人份。检查癌细胞，按病理学操作要求处理标本；检测CEA mRNA，从同一淋巴结组织的不同部位分别钳取约1/2绿豆大小的3块组织，在玻璃纸上将每块组织剪为4小块，放入1.5 ml离心管中用无RNA酶水振荡、离心洗涤3次，除去标本表面的血液等沾染物，液氮保存备用。PCR实验用品经彻底清洁后高压蒸汽消毒。

1.3 实验方法

①检测CEA mRNA应用反转录套式聚合酶链反应(RT-NP-PCR)技术，CEA mRNA套式引物序列[1]为：外套引物 a. 5′-TCTGGAACTTCTCCTGGTCTCTCAGCTGG-3′，b. 5′-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGAAGAAGC-3′；内套引物 c. 5′-GGGCCACTGTCGG -CATCATGTTGG-3′，d.5′-TGTAGCTGTTGCAA ATGCTTTAAGGAAGAAGC-3′。PCR试剂盒由上海复星医药股份有限公司提供。RT-NP-PCR 检测CEA mRNA操作经过消化裂解组织标本、RNA模板提取、反转录合成CEA mRNA特异的cDNA、内外套引物PCR扩增、扩增产物检测分析等步骤，出现与阳性对照同齐的(188 bp)核酸电泳带为CEA mRNA阳性结果。②对同一份组织标本，在检测CEA mRNA的同时用常规病理学方法检查癌细胞。

1.4 统计学方法

应用卡方检验(组间：四格表Fisher精确概率检验法；组内：配对卡方检验法)，P

2 结果

实验结果见表1。以胃周围淋巴结为标本，PCR方法检测CEA mRNA指标和病理学方法检查癌细胞的特异性均为100% 。在胃癌组，病理学检查癌细胞阳性结果的淋巴结标本，RT-NP-PCR检测CEA mRNA也均呈阳性结果。对淋巴结标本，RT-NP-PCR检测CEA mRNA的阳性率和敏感性远远高于病理学检查癌细胞，两者的差别具有极显著性差异(配对χ2 test，χ2=12.07，P

3 讨论

CEA mRNA是一个较新的被公认具有恶性特异性的核酸类肿瘤标志[1～5]。选择CEA mRNA 作为肿瘤标志物，始于20世纪90年代Gerhard等[1]对骨髓中肿瘤微转移的研究。CEA mRNA是指导合成癌胚抗原蛋白(CEA p)的模板，CEA mRNA与CEA p共同构成CEA mRNA-CEA p系统(简称CEA系统)，在肿瘤时呈现高度活跃的表达状态[1～5]，可能与细胞识别各种生长因子受体功能相关[1～3]，而且肿瘤细胞表达CEA系统呈现非均衡性(即CEA mRNA的表达活跃程度和表达量明显高于CEA)[4,5]。这种肿瘤细胞特有的表达CEA mRNA情况，是CEA mRNA作为敏感性高于CEA p的肿瘤标志物的基础。由于CEA mRNA可在多种肿瘤组织中活跃表达，且不能游离于细胞外，因此CEA mRNA是反映被检测部位存在肿瘤细胞或某些去分化细胞的指标，可以作为肿瘤细胞存在的直接证据[1～5]。由于CEA mRNA相对含量很少且仅存在于细胞内，检测CEA mRNA常采用RT-PCR技术和必须应用有核细胞标本。在肿瘤细胞学诊断中，尤其当细胞形态学鉴别有困难时，应用RT-NP-PCR这种极高灵敏性和特异性的技术检测CEA mRNA，可以帮助发现和鉴别肿瘤细胞，提高诊断的阳性率和准确性。

本实验结果显示，应用RT-NP-PCR检测胃周围淋巴结CEA mRNA指标诊断淋巴结转移癌的特异性为100%，与病理学检查一致；阳性率为38.8%，远远高于常规病理学方法(P

[参考文献]

[1]Gerhard M, Juhl H, Kalthoff H, et al. Specific detection of carcinoembryonic antigen-expressing tumor cells in bone marrow aspirates by polymerase chain reaction[J]. J Clin Oncol, 1994, 12(4): 725-729.

[2]Miyazono F, Takao S, Natsugoe S, et al. Molecular detection of circulating cancer cells during surgery in patients with billiard-pancreatic cancer[J]. Am J Surg, 1999, 177(6): 475-479.

[3]Kilima F, Nateugoe S, takao S, et al. Detection and clinical significance of lymph node micrometastasis determined by reverse transcription-polymerase chain reaction in patients with esophageal carcinoma[J]. Oncology, 2000, 58(1): 38-44.

[4]薛承岩, 梁岩, 李桂洁. 癌胚抗原mRNA在消化系统肿瘤时表达情况的观察[J]. 世界华人消化杂志, 2000, 8(9): 59.

[5]薛承岩, 梁岩, 孙宝信, 等. 消化道恶性肿瘤组织癌胚抗原mRNA表达情况的检测[J]. 中国癌症杂志, 2001, 11(3): 259-261.

（收稿日期：2007-06-029）

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