实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中沙眼衣原体的分析

[摘要] 目的 评价实时荧光核酸恒温扩增技术（SAT）检测尿液中沙眼衣原体（CT）的特异性和敏感性。方法 对175例疑似患者生殖道拭子行CT-SAT、PCR检测和沙眼衣原体培养，同时对对应的175份尿液标本行CT-SAT检测。结果 SAT对同一患者的拭子标本和尿液标本的检测结果符合率100%。1例淋球菌培养阴性而SAT阳性，2例PCR阳性而SAT阴性。结论 SAT技术检测拭子及尿液中的沙眼衣原体具有很高的灵敏度和特异性，为CT的实验室诊断提供新的检测方法。

[关键词] 沙眼衣原体；SAT； PCR；培养；尿液

[中图分类号] R374.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2011）22-124-02

Real-time Fluorescence Detection of Nucleic Acid Amplification Constant Urine Analysis of Chlamydia Trachomatis

SUN Yuhua CHEN Feng CAI Ruiyun

Guangji Hospital in Dongguan City of Guangdong Province，Dongguan 523690，China

[Abstract] Objective To evaluate the real-time isothermal nucleic acid amplification fluorescence（SAT） Chlamydia trachomatis in urine（CT） of the specificity and sensitivity. Methods 175 cases of suspected patients of genital swab line CT-SAT，PCR testing and Chlamydia trachomatis culture，while the corresponding urine specimens of 175 CT-SAT test. Results SAT on the same source swab specimens and urine samples consistent results：Case of SAT-positive and N.gonorrhoeae culture-negative，2 SAT-negative and PCR positive. Conclusion SAT swabs and urine detection of Chlamydia trachomatis with high sensitivity and specificity of laboratory diagnosis for the CT to provide a new detection method.

[Key words] Chlamydia trachomatis； SAT； PCR； Culture；Urine

实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing，SAT）是将新一代的核酸恒温扩增技术和实时荧光检测技术相结合的一种新型核酸检测技术，该技术具有高灵敏度、高特异性、低污染、反应稳定等优点。

1 材料与方法

1.1 主要仪器及试剂

CT-SAT试剂盒由上海仁度生物科技有限公司提供，PCR试剂盒由深圳匹基生物工程有限公司提供，沙眼衣原体培养使用Mc Coy培养皿，实时荧光核酸扩增仪为杭州博日科技有限公司生产。

1.2 标本来源

2009年9月～2010年7月来本院就诊的疑似患者175例，其中男62例，女113例，每份患者取3份分泌物拭子标本和1份尿液标本。

1.3 标本采集

准备3个无菌拭子，分别以A、B、C标示。B号拭子的管内加入1mL无菌生理盐水，C号拭子的管内加入1.5mL无菌生理盐水。患者采样前2h不排尿，取材方法按常规操作[1]。即男性患者由尿道口内3cm处、女性患者由宫颈口内1～1.5cm处取材。棉拭插至取材处后，转动并停留数秒种后取出。A拭子用于淋球菌培养，1h内尽快接种。B拭子取后-20℃冰箱保存，作PCR测定待用。C拭子取后取1mL混合液至专用尿液保存液（试剂盒提供）中，混匀，-20℃冰箱保存，作CT- SAT测定待用。另取1mL首段尿液至专用尿液保存液（试剂盒提供）中混匀，-20℃冰箱保存，用于CT-SAT测定待用。

1.4 检测方法

尿液标本和拭子标本从冰箱取出，平衡至室温同时行CT-SAT检测，按照试剂盒说明书进行操作。

1.5 沙眼衣原体培养

见参考文献[1]。

1.6 统计学分析

应用SPSS10.0软件对数据进行χ2检验。

2 结果

2.1 SAT、PCR及沙眼衣原体培养的检测

SAT检测的阳性63例尿液标本其对应的63例拭子标本SAT检测也是阳性，符合率100%，1例沙眼衣原体培养阴性而SAT阳性，2例PCR阳性而SAT阴性。尿液标本不适用于PCR和沙眼衣原体培养，故均以拭子结果为参照[4]。见表1。

2.2 CT-SAT检测的敏感性及特异性

与沙眼衣原体培养结果作比较，CT-SAT尿液/拭子标本的检测灵敏度为98.41%（62/63），特异性为99.11%（112/113），经χ2检验，差异无显著性（χ2=0.01，P＞0.05）；与PCR结果作对比，CT-SAT尿液/拭子标本的检测灵敏度为100%（63/63），特异性为98.21%（110/112），经χ2检验，差异无显著性（χ2=0.05，P＞0.05）。见表1。

2.3 CT-SAT法对拭子标本和尿液标本检测结果的符合率分析

CT-SAT法对175例患者的拭子标本和尿液标本进行检测，两组标本检测结果的符合率为100%，差异无显著性（P＞0.05）。

3 讨论

目前CT检测都是以患者的泌尿生殖道分泌物进行沙眼衣原体抗原检测、沙眼衣原体培养和/或PCR检测。取生殖道分泌物容易增加患者的取样痛苦，同时几种检测方法在敏感性和特异性上都有不足。沙眼衣原体抗原检测多用胶体金试剂，阳性率都较低容易造成女性患者尿道感染的漏检。沙眼衣原体培养的敏感性和特异性都较好，但是耗时长。PCR检测的是DNA，患者治疗后病灶处残留的DNA包括杀死后还没排出的菌体DNA都会导致PCR阳性结果。病人经治疗后病菌死亡、症状消失即可判为治愈，如果要等PCR转阴，势必造成过度治疗[2]。本研究中有2例PCR阳性而CT-SAT及沙眼衣原体培养均阴性就是这种情况。CT-SAT检测病原菌体RNA，RNA在死亡的病原体中快速降解，活菌中才有完整的RN段，故能排除患者治疗后病灶处的残留物对检测结果的影响，有利于临床用药后的疗效监测及判愈。在175例标本中1例CT-SAT阳性，而沙眼衣原体培养阴性，可能是沙眼衣原体培养敏感性不足的原因，此例标本经PCR实验后得到验证，也证明了CT-SAT的高灵敏度。而且CT-SAT可以对尿液标本进行检测，尿液作为一种非侵入性的取样标本，取样方便，减少了患者采样的痛苦，也减少了医生的工作量[3]。RNA在环境中极不稳定，容易降解，大大降低了交叉污染概率及环境污染[4]。

本研究显示，利用SAT技术检测沙眼衣原体，不仅特异性好，灵敏度高，可用于临床用药后的疗效监测及判愈，而且尿液标本可以代替拭子标本。在临床应用中表现出采样方便、耗时短、低污染、结果准确可靠等优点，为沙眼衣原体的实验室诊断提供新的采样方式和检测方法[5]，是一种值得推广的检测方法。

[参考文献]

[1] 叶顺章.性传播疾病的实验室诊断[M].北京：科学出版社，2001：73-81.

[2]叶顺章，王千秋，王荷英，等. PCR检验技术在性病临床标本实验诊断中应用价值的研究[J].中国皮肤性病学杂志，2002，16（1）：6-8.

[3] 王彬.泌尿生殖道支原体感染的特征及药敏结果分析[J].中国当代医药，2010，17（4）：123-124.

[4] Lowe P，Oloughin P，Evans，et parison of the gen-probe APTMA Combo-assay to the AMPL ICOR CT/NG assay for detection of Chlam ydia trachamatis and neisseria gonorrhoeae in urine samples from Austrlian men and women[J].J Clin Microbiol，2006，44（7）：2619-2621.

[5] 王宝玺，朱学骏，倪安平，等.细胞培养、连接酶链反应和六种聚合酶链反应试剂盒检测沙眼衣原体的比较研究[J].中华皮肤科杂志，2001，343：181-183.

（收稿日期：2011-03-10）