Beagle犬静脉滴注清开灵注射液1个月长期毒性试验研究

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2011)05－0033－01

Investigation of toxicological effects of Qingkailing injection in

Beagle dogs by traditional approaches

【摘要】目的:观察Beagle犬静脉滴注清开灵注射液1个月长期毒性反应。方法:实验设清开灵注射液低、中、高剂量组及溶剂对照组共4个组，每组4只动物，雌雄各半。静脉滴注给药，每天给药1次，连续给药1个月。观察给药后动物的皮肤外表、行为活动、粪便性状等一般药物反应，并于给药期不同时点进行血液学、血液生化学、尿液、骨髓涂片、心电图等检测。结果:Beagle犬静脉滴注清开灵1个月后，低、中、高剂量组与溶剂对照组在一般药物反应上无明显差异，给药期及恢复期不同时点进行血液学、血液生化学、尿液、骨髓涂片心电图各项指标也无明显改变（P

【关键词】Beagle犬清开灵注射液毒性反应

【Abstract】ObjectiveObservation of toxicological effects of qingkailing injection in Beagle dogs by traditional approaches. MethodsAll the animals were being randomly assigned to 4 groups of 4 with 2 in each gender, control group (0.9% sodium chloride only) and 3 dosed groups, low, middle and high-dose groups respectively. The dogs in three test and control group were intravenously administered with qingkailing daily for one month. During the administration periods, the skin, activities, feces properties of those animals were observed. Meanwhile the routine analysis of blood, clinical chemistry and routine were tested in different time points. Results No significant anomalies were found in the animals in test groups, comparing to those in the control group, including hemogram, hepatorenal functions, routine examination of urine, bone marrow slides and electrocardiogram (P>0.05). Conclusion Intravenous administration of qingkailing daily for one month in beagle dogs was safe. But since there are clear differences between human and other animals, further research of QKL was demanded for human.

【Key words】Beagle dogsQKL injectiontoxicological effects

近年来，清开灵注射液因其具有生物利用度高、起效快、作用强等特点，在临床上受到越来越多的关注。目前，清开灵注射液主要应用于治疗热病神昏、中风偏瘫、上呼吸道感染、肺炎、高热等疾病的治疗［1-2］。有关其不良反应，如过敏性休克、药物性皮炎、喉头水肿、急性左心衰等的报告亦相继增多［3］。本研究观察Beagle犬静脉滴注清开灵注射液1个月后的毒性反应，以期为提高其质量及临床应用安全性提供科学依据。

1材料

1.1实验药物：清开灵注射液，棕黄色或棕红色澄明液体，10 ml/支，生产厂家：河北神威药业有限公司，批号：08032713，有效期至2011年02月。生理盐水，成都青山利康药业有限公司提供，无色澄明液体，2000ml/袋，室温、密闭保存，A0703025，有效期至2009年2月。

2.2 实验仪器：全自动血液生化分析仪（瑞士Roche Integra 400 Plus）、全自动血液细胞分析仪（美国雅培CELL-DYN 3700SL）、全自动血凝分析仪（日本SYSMEX CA-500）、全自动网织红细胞分析仪（日本R-520）、四道生理记录仪（成都仪器厂 RM6240）、电子天平等。

2.3 实验动物：普通级成年健康Beagle犬16只，雌雄各半，体重5～8 kg。由四川省医科院实验动物研究所提供，生产许可证号：SCXK(川)2006－024。

Beagle犬饲养于国家成都中药安全性评价中心普通动物房（实验动物房使用许可证号：SYXK（川）2003－030），不锈钢犬笼分笼饲养，饲养条件符合国标GB14925-2001，室温21±5℃（日温差≤4°C），相对湿度55±15％，12小时明暗交替，换气次数8～10次/小时。犬配合饲料（北京科澳协力饲料有限公司提供，生产许可证SCXK（京）2005-0007）喂养，反渗透水自由饮用。动物耳号和笼上贴标签作为动物识别标记。

2 实验方法及观察指标

2.1 实验方法：QKL临床拟用量为静脉滴注每天20~40ml原液（即0.33~0.67 ml/kg）。设QKL低、中、高剂量组，即4、10、25ml原液/kg（分别为临床用量的6、15、37.5倍），另设一溶剂对照组（给予36 ml/kg的生理盐水注射液）。

本品临床给药途径为静脉滴注，参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》（2005年3月），本试验给药方法定为静脉滴注给药，滴注速度为40-60滴（2～3ml）/分，每天给药1次，连续给药1个月。

2.2 观察与检查指标

2.2.1 一般状况观察：每天观察记录动物给药前、后行为活动、给药部位反应、食量、呼吸、腺体分泌、生殖器、肛周、粪便、死亡等情况及其他中毒表现，如出现毒性症状，需增加观察次数。

2.2.2 体重：给药前测定一次体重，给药后每1周测一次体重。

2.2.3 体温：第一次给药前及给药后0.5h各测定体温一次，以后每周测定体温一次。测定方法：肛温计直接测定。

2.2.4 血液学指标：检测指标：红细胞计数（RBC，电容法）、血红蛋白（HGB，HiCN法）、红细胞容积（HCT，电容积分法）、平均红细胞容积（MCV，计算）、平均红细胞血红蛋白（MCH，计算）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC，计算）、网织红细胞计数（RET，荧光染色法）、白细胞计数（WBC，激光法）及分类（中性粒细胞NEU、淋巴细胞LYM、单核细胞MONO、嗜酸性粒细胞EOS、嗜碱性粒细胞BASO，激光法）、血小板计数（PLT，电容法）、凝血酶原时间（PT，发色底物法）、活化部分凝血酶时间（APTT，发色底物法）。

检测时间：给药2周结束，给药1月结束后。

方法：自Beagle犬前肢静脉采血检测。血液学检查用血以EDTA抗凝，凝血时间用血以枸橼酸钠抗凝。

2.2.5 血液生化指标：检测指标：天门冬氨酸氨基转移酶（AST，IFCC P-5’-P法）、丙氨酸氨基转移酶（ALT，IFCC P-5’-P法）、肌酸磷酸激酶（CK，HK-G6PD法）、碱性磷酸酶（ALP，4-NPP法）、尿素氮（Urea，Urease-GLDH-Kinetic法）、总蛋白（TP，Biuret法）、白蛋白（ALB，BCG法）、白球比（A/G，计算）、血糖（GLU，GLK-G6PDH法）、总胆红素（TBIL，Diazo法）、肌酐（Crea，JAFF法）、总胆固醇（CHOL，CHOD-P法）等。

检测时间：给药2周结束，给药1月结束后。

方法：自Beagle犬前肢静脉采血检测。不抗凝。

3 统计分析与结果判定：体重、血液学、血生化和尿BUN、SG、pH等定量指标采用均数±标准差（）描述。采用单因素方差分析（ANOVA）分别对动物的体重、血液学、血生化指标均数的组别差异，进行统计学检验；均数差异有统计学意义时（P＜0.05），采用LSD法对组间均数的差异进行两两比较（即ANOVA分析后接LSD法两两比较）。LEVENE方差齐性检验，提示方差不齐时（P＜0.05），采用Kruskal-Wallis非参数方差分析（K-W法）对上述指标均数的组别差异，进行统计学检验；均数差异有统计学意义时（P＜0.05），Mann-Whitney U检验（M-W法）对组间均数的差异进行两两比较（K-W法方差分析后接M-W法两两比较）。所有检验均为双侧检验＝0.05 。所有的统计分析，均在SPSS13.0软件下完成。

3 结果

3.1 一般状况：给药过程中以及每次给药结束时，清开灵高剂量组4只动物出现不同程度的呕吐、流涎症状，其余各组动物给药期间未见呕吐、流涎、抽搐等症状，皮毛光泽度良好，无竖毛，摄食正常，给药局部未出现硬结、红肿。

3.2 体重： 给药结束后，各给药组与对照组相比体重差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。

3.3 体温：给药期间清开灵注射液各剂量组在不同时点体温与对照组相比降低，其差异有统计学意义（P

3.4 血液学、生化指标： 给药一月结束后，QKL注射液各剂量组与溶剂对照组血液、生化各指标均未出现异常改变，且各组比较指标差异无统计学意义（P>0.05）（见表3、4）。

3.5 心电图：心电图各指标心率、P波波幅、P波时间、T波时间、R波波幅、R-R间期、P-R间期、QRS波时间、Q-T间期、ST段等各给药组各时间点均未见异常改变。QKL注射液各剂量组与对照组相比，差异均无统计学意义（P>0.05）（表5）。

3.6 骨髓检查：给药1月结束，各细胞系百分比均数和有核细胞增生的组别差异无统计学意义（P>0.05）(见表6)。

4讨论

清开灵为纯中药制剂,由胆酸、珍珠母、猪去氧胆酸、栀子、水牛角、板蓝根、黄芩苷、金银花组成。现代药理学研究证明,清开灵注射液主要作用于脑、肝、心、肺等器官,能改善这些器官的循环,具有解热、镇静、抗病毒、抗菌作用,能抑制病毒复制和多种致病菌生长。但随着清开灵注射液临床应用的增加，不良反应的报道越来越多，不同研究方法显示清开灵注射剂平均不良反应发生率为3.38 -12.77%［4］，主要表现为过敏反应，且发现多种说明书记载以外的罕见类型，其中以过敏性休克最为严重。本实验对比了Beagle犬静脉滴注不同剂量清开灵注射液1个月后的一般状况、体重、血液、生化、尿液、心电图及骨髓涂片指标，结果并未出现有统计学意义的差异。虽然体温检测，给药组提问均有降低，与对照组相比有统计学意义，但本供品临床用于清热解毒，试验中所表现出来的各剂量组体温降低，可能与本品的解热作用有关。总之，清开灵注射液用于beagle犬毒性反应不明显。究其原因，我们认为不同物种之间存在有差异，且清开灵注射液引起的不良反应主要是过敏反应，而过敏反应过程中，上述指标可能并不出现异常。对于清开灵注射液的毒性应做进一步深入研究，以提高临床应用的安全性。

参考文献

［1 ］ 李爽.清开灵的药理作用与临床应用［J］.现代中西医结合杂志，2009，18( 1):108-109.

［2 ］ 杨慧峰.清开灵注射液临床应用进展［J］.中国现代药物应用,2009,2(3):191-192.

［3 ］ 王志国,巧,魏峰.清开灵注射液不良反应分析［J］.中国中医基础医学杂志,2010,16(1):82-84.

［4 ］ 周永良，陈红梅，陆红.。清开灵注射剂不良反应文献系统评价［J］.中国药业，2007,16（24）：50-52.

作者单位：611732 四川省成都市郫县人民医院

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