注射口蹄疫O型-亚洲I型双价灭活疫苗畜体抗体消长实验报告

随着人们生活水平的不断提高，肉类食品在人们的饮食结构中占的分量越来越大，养殖业的发展也越来越快，但家畜疫病也频繁发生，对养殖业造成的危害很大，有些疫病甚至是毁灭性的。这两年随着防疫监督体系的完善和加强，主要依靠增加防疫次数来控制疫病的发生。我区牛羊１年进行三次口蹄疫O型-亚洲I型双价灭活疫苗免疫，一是给国家造成巨大的经济负担，二是给基层工作人员增加了劳动强度。本实验通过春、夏、秋三季家畜口蹄疫抗体水平监测，以确定家畜注射疫苗后体内抗体的增消情况，为科学制定防疫计划提供依据。

1实验材料与方法

1.1实验设计本实验在我区果园、银达、三墩三乡镇进行，选择饲养周期较长的牛羊作为实验对象。每年春季防疫结束一个月，分别采集这三个乡镇选定的牛羊血清（亲自注射疫苗，佩带免疫标识），监测一次抗体水平，夏季防疫不注射疫苗，只采集血清监测抗体，秋季防疫前（不注射疫苗）再采一次血，测定抗体水平。通过比较，分析家畜体内抗体水平变化。

供试家畜：春季防疫一个月后采集样本，果园乡采集牛血样6份，羊血样6份；银达镇采集牛血样6份，羊血样5份；三墩镇采集牛血样3份，羊血样5份。夏季未注射疫苗，果园乡采集牛血样6份，采集羊血样1份；银达镇采集牛血样5份，羊血样2份；三墩镇采集牛血样3份，羊血样4份。秋季打防疫针之前采集血样，果园乡采集牛血样5份；银达镇采集牛血样5份，羊血样2份；三墩镇采集牛血样1份，羊血样3份。

1.2 实验方法本实验采用免疫抗体检测液相阻断ELISA法，通过预先滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被了口蹄疫型特异型抗体ELISA中，没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获，亦与随后加入的豚鼠抗血清中的抗体结合，再通过免抗豚鼠IgG酶结合物和底物溶液显色。按实验孔呈现的颜色与抗原对照（未加血清）孔呈现颜色相比较，判定结果。抗体滴度以能阻断50%病毒抗原的血清稀释度表示。

1.3实验试剂与器材

1.3.1主要试剂

①捕获抗体：口蹄疫病毒免抗血清；②检测抗体：口蹄疫病毒豚鼠抗血清；③酶结合物：免抗豚鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物；④病毒抗原与病毒对照抗原：用BEI灭活的病毒细胞培养物；⑤标准阴性、阳性血清；⑥底物溶液：邻苯二胺（OPD）/双氧水（H2O2）溶液；⑦终止液：1.25mol/l硫酸溶液（H2SO4）；⑧缓冲液：包被缓冲液：0.05mol/l碳酸钠（Na2CO3）/碳酸氢钠（NaHCO3），pH9.60；稀释液：0.05%吐温-20（Tween-20）加入0.01mol/l PBS，pH7.40（PBST）；豚鼠抗血清稀释液：5%脱脂奶粉-PBST；洗涤液：0.01mol/l PBST，pH7.40。

1.3.2主要仪器材料

① ELISA板：96孔平底聚苯乙烯ELISA板；② 抗原抗体反应板：96孔U型聚丙烯微量板；③ 移液器：0.50～20ul、5～40ul、50～200ul、200～1000ul可调移液器各１把，8道或12道可调移液器１把，移液槽5～6个，配套枪尖若干；④ 可调恒温培养箱１台；⑤ 酶标仪：492波长滤光片；⑥ 吸水纸巾

2结果分析

2.1结果判定

2.1.1牛、羊O型血清抗体效价与保护力的关系：抗体效价大于等于1：128，99%以上保护；效价小于等于1：16不保护；效价在1：22～90之间，50%保护。

2.1.2牛、羊亚洲I型血清抗体效价与保护力的关系：抗体效价大于等于1：128，99%以上保护；效价小于等于1：16不保护；效价在1：22～90之间，50%保护。

2.2结果分析

从监测结果来看，第１次检测是在4月30日，注射疫苗时间为3月17日。O型抗体水平：共检测15份牛血样本，全部达到99%保护；15份羊血样本，10份样本达到99%保护；4份样本50%保护；1份样本没有保护率。亚洲I型抗体水平；共检测15份牛血样本，全部达到99%保护；共检测15份羊血样本，11份样本达到99%保护；4份样本50%保护；抗体滴度小于1：16的没有。第２次监测是在7月11日，没有注射疫苗。O型抗体水平：14份牛血样本，全部达到99%保护；7份羊血样本，6份样本达到99%保护；1份样本50%保护；没有保护率的没有。亚洲I型抗体水平：14份牛血样本，11份样本达到99%保护；2份样本50%保护；1份样本没有保护率。第３次监测是在秋季防疫前，采血日期10月15日。 O型抗体水平：9份牛血样本，全部达到99%保护；羊血样本4份，1份样本99%，其余3份样本50%；没有保护率的没有。亚洲I型抗体水平：9份牛血样本，5份99%保护；3份50%保护；1份不保护。羊血样本4份，1份样本99%保护；1份样本50%保护；2份样本不保护。

3小结与讨论

从这一年的监测中可以看出，牛在注射疫苗后，畜体产生的抗体较高。第１次监测O型抗体，100%的牛抗体水平达到有效保护。第２次监测,抗体水平依然维持在第１次监测的水平,仍在有效保护范围之内,100%保护。第３次监测,也是100%保护,抗体滴度≥1:128。羊在注射疫苗后,第１次监测,94%达到100%保护,第２次监测,86%达到100%保护。第３次监测只能达到25%保护。亚洲I型抗体第１次监测，牛100%全部保护，羊73%达到100%保护。第２次监测，牛79%保护，羊57%保护。第３次监测，牛56%保护，羊25%保护。

从以上分析中可以看出，牛对口蹄疫疫苗比较敏感，产生抗体较高，在第１次监测时，都能达到≥1：128，第２次监测，抗体水平仍很高，≥1：128；第３次监测时已距注射疫苗由6个月时间，抗体仍较高，这说明抗体在畜体内维持时间较长。羊就不如牛，第１次监测，抗体较高，间隔3个月，抗体就有所下降，86%保护，间隔6个月，抗体已经降的很低，只有25%保护。还可以看出，经多次注射疫苗的家畜，体内抗体较高，维持时间也较长。

还有一个问题就是同时注射的是口蹄疫O型-亚洲I型双价灭活疫苗，大多数的家畜两种抗体都高，但也有个别家畜O型抗体高，达到≥1：256；而亚洲I型抗体低，＜1：32；或者O型抗体低，＜1：32；亚洲I型抗体高，≥1：256。这方面的原因我们也在探索，一是个体差异，对一种抗原敏感，而对另一种不敏感，再就是疫苗注射后产生抗体时有无相互抑制的因素，因个体差异，一种抗体产生抑制另一种抗体的产生。