复方甘草口服溶液微生物限度检查法验证实验

[摘要] 目的：建立复方甘草口服溶液的微生物限度检查法。方法：根据《中国药典》2005版二部附录ⅪJ微生物限度检查法常规法进行验证试验。结果：试验组的菌回收率均大于70%，控制菌常规法验证检出阳性菌，阴性菌未检出。结论：复方甘草口服溶液微生物限度检查法符合《中国药典》的验证规定。

[关键词] 复方甘草口服溶液；微生物限度检查；验证

[中图分类号]R927.1 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（a）-30-02

Validation of microbial limit test method of Compound Glycyrrhiza Oral Solution

GAO Jie

(Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 226001,China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the microbial limit test of Compound Glycyrrhiza Oral Solution.Methods:A validation of microbial limit test method was conducted in accordance with routine method stated in the Appendix of Chinese Pharmacopoeia(2005 edition).Results:The recoveries of test organisms by routine method were more than 70%, the test organisms were detected in the control bacteria test and were not detected in the negative control bacteria test. Conclusion:The method for the microbial limit test of Compound Glycyrrhiza Oral Solution was validated.

[Key words] Compound Glycyrrhiza Oral Solution; Microbial limit test; Validation

复方甘草口服溶液为甘草流浸膏、复方樟脑酊、甘油等组成的自制合剂，具有祛痰镇咳作用，用于上呼吸道感染、支气管炎和感冒产生的咳嗽及咳痰不爽。按照2005年版《中国药典》规定增加验证项目。

1 仪器与试药

1.1药品

复方甘草口服溶液（本院自制，100 ml/瓶，批号：070522，070526，070606）。

1.2 菌种

大肠埃希菌[CMCC（B）44102]第3代，金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]第3代，枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]第3代，白色念珠菌[CMCC(F) 98001]第3代，黑曲霉[CMCC(F)98003]第3代。以上菌种均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 培养基

①营养琼脂培养基（批号：070310），②玫瑰红钠琼脂培养基（批号：070712），③营养肉汤培养基（批号：070916），④胆盐乳糖培养基（批号：070426），⑤乳糖胆盐发酵培养基（批号：070511），⑥MUG培养基（批号：070727），⑦麦康凯琼脂培养基（批号：070328），均由北京三药科技开发公司提供。

1.4 稀释液

pH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（北京三药科技开发公司，批号：070711）。

1.5仪器设备

见表1。

2 方法与结果

依据《中国药典》2005年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法进行验证试验。

2.1菌落计数方法的验证

2.1.1 菌液制备①取经(33±1)℃培养24 h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的肉汤培养物1 ml+ 0.9%无菌氯化钠溶液9 ml，10倍稀释至10-7；枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1 ml+0.9%无菌氯化钠溶液9 ml，10倍稀释至10-5，细菌数为50~100 cfu/ml的菌悬液，做活菌计数备用。

②取经(25±1)℃培养39 h的白色念珠菌改良马丁培养物1 ml+0.9%无菌氯化钠溶液9 ml，10倍递增稀释至10-6，含菌数为50~100 cfu/ml的菌悬液，做活菌计数备用。

③取经(25±1)℃培养1周的黑曲霉改良马丁斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液5 ml洗下霉菌孢子，并过滤孢子悬液至无菌试管内，吸取3 ml孢子悬液加0.9%无菌氯化钠溶液2 ml混匀，然后用无菌氯化钠溶液10倍递增稀释至10-6，含孢子数为50~100 cfu/ml，做活菌计数备用。

2.1.2供试液制备准确吸取复方甘草口服溶液10 ml，置无菌三角瓶中，加入90 ml稀释液（pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液），充分混匀，即为1∶10的供试液。

2.1.3 菌落计数方法平皿法计数。验证试验进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。

2.1.3.1 试验组取1∶10供试液1 ml，分别注入10个平皿中，再依次加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌的菌悬液1 ml（含50~100 cfu），每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置30~35℃培养48 h和23~28℃培养72 h。

2.1.3.2 菌液组分别取上述稀释的菌液1 ml注入平皿内，每个菌株平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。

2.1.3.3 供试品对照组取1∶10供试液1 ml，分别注入4个平皿中，立刻倾注营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备2个平皿，分别置30~35℃培养48 h和23~28℃培养72 h。以测定供试品的本底菌数。试验结果见表2。

以上试验结果表明，采用平皿法检验复方甘草口服溶液，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的回收率均大于70%。因此，复方甘草口服溶液的细菌数、霉菌及酵母菌数的测定可采用平皿法进行。

2.2 控制菌(大肠埃希菌)检查方法的验证

2.2.1 试验组吸取1∶10供试液10 ml，分别接种至100 ml和200 ml的胆盐乳糖增菌培养基内，加入84 cfu大肠埃希菌，于(36±1)℃培养18~24 h，均可见培养基混浊，有气体产生，然后分别取上述培养液0.2 ml接种至含5 ml MUG培养基的试管内培养，于5、24 h在366 nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照，观察结果，管内培养液均呈现荧光，为MUG阳性；然后沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面均呈现玫瑰红色，为靛基质阳性。本底对照为MUG阴性和靛基质阴性。

2.2.2 阴性菌对照组吸取1∶10供试液10 ml及75 cfu金黄色葡萄球菌，分别接种至100 ml和200 ml的胆盐乳糖增菌培养基内，于(36±1)℃培养18~24 h，培养基内均无混浊与气体产生。分别取上述培养液0.2 ml接种至含5 ml MUG培养基的试管内培养，于5、24 h在366 nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照，观察结果，管内培养液均未呈现荧光，为MUG阴性；然后沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面均呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照为MUG阴性和靛基质阴性。

2.2.3 结果判断上述方法试验组MUG阳性、靛基质阳性，检出大肠埃希菌；阴性菌对照组MUG阴性、靛基质阴性，未检出金黄色葡萄球菌。说明100 ml胆盐乳糖增菌培养基可以用于复方甘草口服溶液大肠埃希菌的检查。

[参考文献]

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[5]郎非.口服抗生素片剂致病性检验方法的探讨[J].药物分析杂志,1991,11(1):47.

（收稿日期：2007-10-29）

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