人巨细胞病毒活动性感染与习惯性流产的关系探讨

[摘要] 目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染与习惯性流产的关系。方法：选择2008年5月~2010年5月我院妇产科收治的反复性流产孕妇40例作为研究组，选择同期体检正常孕妇50例作为对照组，采集两组患者外周血，离心分离出有核细胞及血浆，采用实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测HCMV-DNA和HCMVpp65抗原，分析HCMVpp65抗原阳性与流产的关系及两种检测方法的一致性。结果：研究组HCMVpp65抗原阳性率明显高于对照组，两组比较，差异有统计学意义（χ2=7.69，P

[关键词] 人巨细胞病毒；活动性感染；习惯性流产

[中图分类号] R511；R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）12（a）-046-02

Relationship between HCMV active infection and habitual abortion

NING Lin1, JIA Hui2

1.Department of Gynecology, Maternal and Child Care Service Centre of Shaanxi Province, Xi'an 710003, China; 2. Medical Experimental Center, Maternal and Child Care Service Centre of Shaanxi Province, Xi'an 710003, China

[Abstract] Objective: To investigate the relationship between human cytomegalovirus (HCMV) active infection and recurrent spontaneous abortion (RSA). Methods: 40 cases of RSA pregnant women in our hospital from May 2008 to May 2010 were selected as study group, and 50 cases of normal pregnant women were selected as control group. Peripheral blood of two groups were collected, mononuclear cells and plasma were centrifuged, then HCMV-DNA and HCMVpp65 antigen were detected by real-time PCR and immunofluorescence. The relationship between positive HCMVpp65 antigen and abortion, and the consistency of the two detection methods were analyzed. Results: The positive rate of HCMVpp65 antigen of study group was significantly higher than that of control group, the difference was statistically significant (χ2=7.69, P

[Key words] Human cytomegalovirus; Active infection; Habitual abortion

习惯性流产（RSA）为自然流产连续3次以上者，每次流产往往发生在同一妊娠月份。RSA的原因大多与孕妇黄体功能不全、甲状腺功能低下、子宫发育异常、染色体异常、自身免疫等有关。人巨细胞病毒（HCMV）是宫内感染最常见的病原体之一，易导致流产、死产、新生儿畸形、智力低下等[1]。传统的HCMV-DNA检查不能很好的显示病毒的活动状态，本文笔者采用免疫荧光技术检测外周单个核细胞HCMVpp65抗原，探讨HCMV活动性感染与习惯性流产的关系，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年5月~2010年5月本院妇产科收治的反复性流产患者40例作为研究组，年龄25~37岁，平均（26.5±3.7）岁；全部孕妇均有不明原因3次及以上自然流产，平均流产（3.5±1.2）次；流产时间为妊娠1~3个月。选择同期体检正常孕妇50例作为对照组，年龄23~35岁，平均（25.7±3.2）岁，妊娠1~3个月。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

两组患者均采集外周静脉血5 ml，离心后分离血浆及外周血有核细胞，无菌PBS洗涤后计数细胞，制作外周血单个核细胞涂片（2×105/片）并固定。采用免疫荧光法（美国DAKO公司试剂盒）检测外周血单个核细胞HCMVpp65抗原，严格按说明书操作。荧光显微镜下观察每片HCMVpp65抗原阳性细胞数≥10个为阳性。采用HCMV-DNA荧光定量PCR试剂盒（中山大学达安基因诊断公司）以及全自动荧光定量PCR显示仪（美国Roche公司），检测外周血HCMV-DNA含量。HCMV-DNA 拷贝数≥103/ml为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，采用spearman相关性检验进行HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA拷贝数的相关性分析，以P

2 结果

2.1 两组外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率比较

研究组外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率明显高于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P

表1 两组HCMVpp65抗原阳性率比较（例）

注：与对照组比较，χ2=7.69，P

2.2 研究组不同流产次数孕妇HCMVpp65抗原阳性率比较

研究组中流产次数多的孕妇，HCMVpp65抗原阳性率明显高于流产次数相对较少的孕妇，两组比较，差异有统计学意义（P

表2 研究组不同流产次数孕妇HCMVpp65抗原阳性率比较（例）

注：与流产≥4次的孕妇比较，χ2=8.58，P

2.3 研究组HCMVpp65抗原与HCMV-DNA检测的一致性

研究组中实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA和免疫荧光法检测HCMVpp65抗原的一致性较好，达92.5%（37/40）。见表3。并且每份标本中HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA拷贝数呈正相关（r=0.647，P

表3 研究组HCMVpp65抗原与HCMV-DNA检测结果比较[n（%）]

3 讨论

HCMV是人类疱疹病毒的一种，有典型的疱疹病毒结构，在人群中广泛传播。程丽平等[2]报道显示，我国成人HCMV感染率可达80%~97%，并且多为隐性感染。HCMV可由唾液、血液、尿液、乳液、、子宫分泌物等携带，通过口腔、生殖道、胎盘、出血等途径转移[3]。正常情况下患者无明显临床症状，当机体免疫功能下降时，病毒激活发生显性感染。妊娠期妇女免疫力下降，容易导致病毒激活[4-5]，尤其是妊娠早期，病毒通过胎盘进入胎儿体内，可引起胎儿神经系统、心血管系统等损害而发生流产。

传统的HCMV检测多采用HCMV-DNA及抗HCMV IgM抗体检测，但该方法不能很好地显示病毒的活动状态。近年来孕妇外周血单个核细胞HCMVpp65抗原检测逐渐成为检测HCMV活动性感染的标准[6]。本研究结果显示，HCMVpp65抗原检测与HCMV-DNA定量检测一致性达92.5%，且HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA拷贝数呈正相关（r=0.64、P＜0.05），从而证实了HCMVpp65抗原检测在判断HCMV活动性感染中的有效性。本研究结果还显示，RSA孕妇外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率明显高于正常孕妇，并且随着HCMVpp65抗原阳性率的升高，孕妇流产次数增加，提示HCMV活动性感染与孕妇RSA有密切关系。至于HCMV活动性感染导致孕妇流产的具体机制尚需进一步研究证实。

综上所述，HCMV活动性感染与孕妇RSA有密切关系，外周血有核细胞HCMVpp65抗原检测，对判断孕妇HCMV活动性感染，早期预防RSA有较高的应用价值。

[参考文献]

[1] 芦雅苹,李冬梅,张燕玲,等.人巨细胞病毒感染与自然流产的关系[J].广东医学,2006,27(3):406-407.

[2] 程丽平,韩爱民.自然流产妇女中人巨细胞病毒感染调查[J].山西临床医药,2001,10(3):204-205.

[3] 张富青,宫亚红,刘毅,等.早孕自然流产妇女人巨细胞病毒感染的临床分析[J].中国妇幼保健,2004,19(7):97-98.

[4] Nigro G, Adler SP, La-Torrre R, et al. Passive immunization during pregnancy for corgenital cytomegalovirus infection [J]. N Engl J MED,2005,353(13):1350-1362.

[5] 夏吉荣,王富兰,祝继华.人巨细胞病毒活动性感染的分析[J].重庆医科大学学报,2003,28(2):195-197.

[6] Boeckh M, Huang M, Ferrenberg J, et al. Optimization of quantitative detection of cytomegalovirus DNA in plasma by Real-Time PCR [J]. J Clin Microbiol,2005,42:1142-1148.

（收稿日期：2011-08-10）