小容量注射剂臭氧灭菌效果及周期验证研究

摘要：灭菌效果及灭菌周期的验证对于小容量注射剂的灭菌生产具有十分重要的意义，它是小容量之际生产安全的重要保障。本文首先对小容量注射剂臭氧灭菌的基本概念，以及灭菌的目的进行了明确，在此基础上对臭氧灭菌的具体实施进行了讨论。文章最后提出，尽管整个灭菌方法及目的非常明确，但是很多细节的工作必须进行严格把握，才能保证灭菌对于整个小容量之际生产的意义。

关键词：小容量注射剂，臭氧灭菌，灭菌效果，灭菌周期

中图分类号：R953 文献标识码：A 文章编号：1005-0515（2013）8-028-01

1 引言

灭菌是小容量注射剂生产过程中的重要环节，对于保证小容量注射剂的生产质量具有十分重要的意义。小容量注射剂灭菌方法有很多种，当前最为常用的是臭氧灭菌方法。在实际生产过程中，要保证臭氧灭菌的质量，需要对灭菌效果以及灭菌周期进行严格验证，从而保证将注射剂中的微生物含量控制在一定的范围内。当前很多企业在小容量注射剂臭氧灭菌环节中存在一些问题，这些问题对于小容量注射剂的生产质量产生一定的影响，因此，本文将针对这一生产环节进行详细分析，为实际的小容量注射剂生产提供一定的参考。

2 小容量注射剂臭氧灭菌方法及灭菌验证目的

从灭菌方式上划分，臭氧灭菌属于化学灭菌方法。它是利用臭氧的基本的物理化学性质，破坏微生物的基本组织结构，从而达到灭菌的效果。具体而言，臭氧具有较强的氧化能力，这一点在其它行业中已经被广泛的认识，同时，在常温以及常压下臭氧的基本结构并不稳定，可以分解为氧（O2）和单个氧原子（O），而后者具有很强的活性，对于细菌等微生物具有极强的氧化作用。在实际的灭菌生产中，主要利用O的这种特性，将细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏细菌的细胞膜，将其杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂，因此，不会对小容量注射剂生产产生任何的污染。

在工业生产中，臭氧灭菌的验证目的非常明确，主要包含两个方面的内容。第一，测试灭菌室内臭氧的浓度，在此基础上验证规定的时间内小容量注射剂车间洁净区各洁净间内臭氧浓度是否达到标准规定；第二，通过微生物挑战性试验，确定在一定时间内臭氧对小容量注射剂车间洁净室的灭菌效果，并按规定周期（每日）进行沉降菌和表面污染试验测定，确定消毒周期。通过这两个方面内容的验证，确定了室内浓度要求以及灭菌周期，而这两个方面恰恰是灭菌工业生产过程中最为直接、重要的生产要素。

3 小容量注射剂臭氧灭菌效果及周期的验证内容

在实际的工业生产过程中，灭菌效果及灭菌周期的验证过程较为复杂，它需要首先规划验证项目，并且按照要求设立标准，在此基础上进行一系列的灭菌实验。

3.1 验证项目及标准设立

小容量注射剂的种类有很多，但是，其灭菌验证项目以及其标准的设立基本相同。一般而言，灭菌效果以及周期的验证项目主要包括臭氧浓度、微生物挑战、沉降菌数量以及表面污染性等四个项目，具体内容如表1所示。

从表中的接受标准可以看出，不同洁净区域对于沉降菌的数量及浓度要求不同，因此，在实际工业生产中，应当首先划分好洁净区域，在此基础上进行一定的项目验证。

3.2 具体内容的验证

在确定了具体的验证项目以及可接受标准之后，就可以按照实际的验证方法开展工作。由于沉降菌以及表面污染试验具有明确的操作规程，因此，不在赘述，下文主要对臭氧浓度的验证以及微生物挑战试验两个方面进行讨论。

（1）臭氧浓度的验证

臭氧浓度的验证是整个验证过程的前提和基础，也是其他项目验证可靠性的保障。其整个验证过程可以分为三个步骤。首先，对生产车间内各个洁净区按照规定灭菌之后，在远离送风口处测定臭氧浓度；其次，在锥形瓶中依次加入100ml纯化水、20ml20%KI溶液、250ml纯化水。利用采样器采取2L左右的臭氧化气，并且与混合容易进行充分均匀；最后，在混合液中加入5ml密度为1.000mol/L的H2SO4溶液，混匀后放置10min后加0.5%淀粉指示液1ml，混匀。待反应至浅黄色时，用硫代硫酸钠滴定液（0.0010mol/L）滴定至无色。

那么利用臭氧灭菌的基本原理，整个灭菌区的臭氧浓度可以计算为：

H=（M×V×48×1000×1000）/（2×2×1000×1.963）

其中，M表示Na2S2O3克分子浓度；V为Na2S2O3消耗的体积，ML。

（2）微生物挑战试验

微生物挑战性试验，是确定灭菌周期的重要依据，在实际的工业生产中，整个验证过程主要分为四个步骤。第一，在平皿盖上用油性笔记录灭菌日期及位置，按洁净室环境微生物监测确定的位置和数量要求，在指定位置放置要求数量的生物指示剂。按本车间灭菌工艺要求同时灭菌；第二，在灭菌结束后回收生物指示剂，并在2小时内将载体投入胰酪胨大豆肉汤培养基中，进行无菌培养试验；第三，装有生物指示剂的培养管在35±2℃的温度下培养3天，逐日观察细菌是否被杀灭，若没有细菌生长，即培养液澄清、颜色不变为阴性，则为灭菌合格；若培养液变浑浊，则判为阳性，灭菌不合格；第四，微生物挑战性试验的同时作阳性对照和阴性对照，监测结果只有在阳性对照的生物指示剂有菌生长、阴性对照无菌生长的情况下才有效。

4 结语

通过文章的分析可以看出，小容量注射剂臭氧灭菌方法是一种操作方便，并且目标明确的灭菌方式。但是，在整个操作过程中，很多细节问题必须注意，例如所添加的溶液浓度及体积，细菌培养时间等，对于整体验证的可靠性影响较大，因此，在实际的生产过程中必须特别注意。

参考文献：

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