清开灵注射液细菌内毒素检查法的建立

[摘要] 目的 建立清开灵注射液的细菌内毒素检查方法。 方法 采用《中华人民共和国药典》（2010年版）附录细菌内毒素检查法，考察清开灵注射液对细菌内毒素检查的干扰作用，确定其最大不干扰浓度。 结果 清开灵注射液稀释至60倍后可消除干扰作用，使用灵敏度为0.125 EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查，无干扰因素的影响。 结论 使用鲎试剂检查清开灵注射液的细菌内毒素是可行的，可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。

[关键词] 清开灵注射液；细菌内毒素检查；鲎试剂；干扰试验

[中图分类号] R285.1 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2012）07（c）-0081-03

The establish of Bacterial Endotoxin test method for Qingkailing injection

WANG Xinfang

The Food and Drug Safety Supervision of Chaoyang City in Liaoning Province, Chaoyang 122000, China

[Abstract] Objective To establish the bacterial endotoxin test method for Qingkailing injection. Methods The bacterial endotoxins test of appendix in China Pharmacopoeia (2010 version) was used to investigate the interference effect of Qingkailing injection in the bacterial endotoxin test method, and the maximum noninterference concentration was confirmed. Results The interference effect could be eliminated when Qingkailing injection was diluted 60 times. When the sensitive of tachypleus amebocyte lysate with 0.125 EU/mL to do the bacterial endotoxins test, the results were no interference. Conclusion It is feasible to check the bacterial enolotoxin in Qingkailing injection by using tachypleus amebocyte lysate, and the bacterial enolotoxin test method can replaced the pyrogen test method.

[Key words] Qingkailing injection; Bacterial endotoxin test; Tachypleus amebocyte lysate; Interference test

清开灵注射液是由中药复方制备而成的供静脉滴注的注射剂，具有清热解毒，化痰通络，醒神开窍之功效，已被广泛应用于多种不同临床适应症。该注射液现行标准《中华人民共和国药典》（2010年版）[1]1110规定的检查项是热原检查法，本文参考《中华人民共和国药典》（2010年版）附录“细菌内毒素检查法”等文献[1]附录88[2-4]进行试验，对清开灵注射液的细菌内毒素检查法的可行性进行探讨，为建立该品种的细菌内毒素检查法提供依据。现报道如下：

1 仪器与试剂

1.1 仪器

ZH-2型自动旋涡混合器（天津药典标准仪器厂）；DR-HW-1电热恒温水浴箱（天津医疗器械厂）；微量移液器50～250 μL，200～1 000 μL （上海精密仪器厂）。

1.2 试剂

鲎试剂（以下简称TAL）[批号1：1004026，灵敏度（λ）：0.25 Eu/mL，0.1 mL/支；批号2：1012082，灵敏度（λ）：0.125 Eu/mL，0.1 mL/支；批号3：1008125，灵敏度（λ）：0.25 Eu/mL，0.1 mL/支；批号4：1010110，灵敏度（λ）：0.125 Eu/mL，0.1 mL/支。其中，批号1、2由湛江安度斯生物有限公司生产，批号3、4由湛江博康海洋生物有限公司生产]。

细菌内毒素检查用水（以下简称BET水）（中国药品生物制品检定所，批号：201012，规格：10 mL/支）。

细菌内毒素工作标准品（以下简称CSE）（中国药品生物制品检定所，批号：150601-201174，160 Eu /支）。

清开灵注射液 （神威药业有限公司，批号：10050912、10081123、10042410，规格：2 mL/支；山西太行药业股份有限公司，批号：100527、100212、100610，规格：2 mL/支）。

2 方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度（λ）的复核

按《中华人民共和国药典》（2010年版）的细菌内毒素检查法进行灵敏度复核和结果判断，用BET水将CSE按12等比稀释成系列浓度的细菌内毒素溶液，然后与鲎试剂混合置于37 ℃恒温水浴60 min。4批鲎试剂λc（鲎试剂灵敏度的测定值）均在0.5 λ～2.0 λ（包括0.5 λ和2.0 λ）之间。见表1。

2.2 细菌内毒素限值（L）计算

根据公式L=K/M，L为供试品细菌内毒素限值，K为人每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂为5.0 Eu/（kg·h）。M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，清开灵注射液最大人用剂量为40 mL/d[5]，以10%葡萄糖注射液200 mL或NaCl注射液100 mL稀释后使用，1 h内静脉滴注，成人体重按60 kg计，计算L=5.0/40/60=7.5 Eu/mL。