健膝丸对大鼠膝骨关节炎SOD、MDA、NO的影响

【摘 要】目的：通过观察健膝丸对膝骨关节炎模型SD大鼠血清SOD、MDA、NO表达水平的影响，以探求健膝丸在防治膝骨关节炎方面的作用机理，从而为本药的临床应用及药物开发提供科学的理论依据，同时进一步探索骨关节炎的发病机制。方法：以40只雌性SD大鼠为实验对象，随机分为正常组、模型对照组、健膝丸组、抗骨增生胶囊组，每组10只。除正常组外，其余各组均采用改良Hulth法对大鼠进行造模。术后连续3 d肌肉注射青霉素20万U，1周后开始强迫大鼠每天活动0.5 h，连续8周。同时各组大鼠均采用灌胃给药途径给予相应药液，根据人与动物体表面积等效剂量折算出健膝丸组及抗骨增生胶囊组灌胃给药量。正常组及模型对照组给予质量浓度0.9%的生理盐水，连续8周。8周后分别抽取各组大鼠腹腔静脉血，离心后取上清，按照SOD、MDA、NO测试盒说明操作，用754分光光度计测各管吸光度（OD值），从而进一步计算出各组血清中的各指标的含量。结果：血清中SOD、MDA、NO含量测定结果显示，模型对照组与正常组比较，模型对照组血清中SOD活性显著下降（P < 0.01），MDA、NO含量显著升高（P < 0.01）。健膝丸组与正常组比较，SOD活性差异无统计学意义（P > 0.05），MDA及NO含量差异有统计学意义（P < 0.05）。健膝丸组与模型对照组比较，SOD活性显著升高（P < 0.01），MDA含量差异无统计学意义（P > 0.05）、NO含量显著下降（P < 0.01）。对SOD、MDA、NO含量的影响，健膝丸组与抗骨增生胶囊组比较，差异无统计学意义

（P > 0.05）。结论：通过对实验各组SD大鼠血清中SOD、MDA、NO水平的检测，结果显示，在膝骨关节炎模型SD大鼠血清中， SOD活性下降，MDA及NO含量升高，由此可知氧自由基等因子在骨关节炎的发病及软骨细胞的破坏进程中起到重要作用。健膝丸对血清MDA的含量影响不明显，但可显著提高SOD活性、清除体内过量的氧自由基，同时抑制了NO的过度产生、降低其生物效应，改善关节微循环、保护软骨细胞或促使受损细胞的修复，从而起到延缓关节软骨退变的作用。

【关键词】 骨关节炎，膝；健膝丸；软骨细胞；血清SOD；血清MDA；血清NO；大鼠

健膝丸是全国名老中医娄多峰教授治疗膝骨关节炎（knee osteoarthritis，KOA）的经验方，经长期的临床运用及观察发现，健膝丸可减少大鼠骨关节炎（osteoarthritis，OA）软骨Ⅱ型胶原和蛋白多糖丢失，减轻关节软骨破坏，减缓软骨下骨硬化，延缓OA的发展进程[1]。本实验采用复制KOA实验动物模型的方法，从观察血清生化指标的角度入手，深入研究健膝丸治疗KOA的作用机制。

1 实验材料

1.1 供试品 健膝丸（药物组成：制首乌、淫羊藿、千年健、海桐皮、鸡血藤、川牛膝、木瓜等），每1 g药片含原生药3.017 g，河南风湿病医院院内制剂，豫药制字Z04010008。

1.2 对照品 抗骨增生胶囊（药物组成：熟地黄、鸡血藤、肉苁蓉、莱菔子、狗脊、骨碎补、女贞子、牛膝、淫羊藿等），江苏康缘药业股份有限公司生产，国药准字Z10980006。

1.3 实验动物 40只雌性健康4月龄SD大鼠，清洁级，空腹体质量200～220 g，购自郑州大学实验动物中心，动物质量合格证号0003224。

1.4 主要仪器 754分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；FA104 型电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司生产；SHH1WH-420型高效三用恒温水箱，天津市泰斯特仪器有限公司生产；TDZ42WS低速自动平衡离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司生产。

1.5 主要试剂 注射用青霉素钠，华北制药股份有限公司，批号E0910401；硫化钠，天津市德恩化学试剂有限公司，批号20080102；戊巴比妥钠，上海西唐生物科技公司，批号20080615；超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20090626；丙二醛（MDA）测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20090626；一氧化氮（NO）测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20090626。

2 方 法

2.1 动物分组 SD大鼠在自然光照、自由进食水、常温条件下饲养，以适应环境。1周后称重，采用区组随机法将大鼠分为正常组、模型对照组、健膝丸组、抗骨增生胶囊组，每组10只。

2.2 造模方法 正常组给予假手术处理，仅打开关节腔，不损伤韧带和半月板，缝合皮肤，无菌辅料包扎。其余各组均采用改良Hulth法进行手术造模。术前1 d用质量浓度8%硫化钠水溶液对各组大鼠右下肢进行脱毛，术前用质量浓度2%戊巴比妥钠对大鼠行腹腔注射以麻醉。麻醉成功后，各大鼠右膝常规消毒、铺无菌巾，取大鼠右膝关节内侧为手术入路，范围长约1 cm，在显微镜下切断内侧副韧带及前后交叉韧带，摘除内侧半月板，行抽屉试验检查，呈阳性后，无菌敷料包扎，手术结束。术后伤肢不进行固定，使其自由活动。术后各组大鼠，行抗感染治疗，肌肉注射青霉素20万U，连续3 d，以预防感染。1周后开始强迫大鼠活动，每日1次，每次0.5 h，连续8周。

2.3 药物配制及给药 术后1周，在造模的同时，开始给药。根据人与动物体表面积等效剂量折算，抗骨增生胶囊用质量浓度0.9%生理盐水加热配成

0.472 5 g・kg-1的溶液（临床常用量），健膝丸用质量浓度0.9%生理盐水加热配成1.35 g・kg-1的溶液，相当于原药15 g（临床常用量）。用药各组灌胃给予相应药液，正常组和模型对照组则按1 mL・（100 g）-1

给予等体积质量浓度0.9%生理盐水灌胃给药，每日1次，连续8周。

2.4 标本的采集与制备 8周后，分别麻醉各组动物后置于手术台，仰卧位，腹壁消毒，铺无菌巾。腹中部切开，取腹腔静脉血5 mL，静置2 h后放入离心机3 000 r・min-1离心5 min，取上清，置-20 ℃