考马斯亮蓝法测定黄精蜗牛胶囊中蛋白质的含量

【摘要】目的：制定产品质量标准，控制产品质量。方法：采用考马斯亮蓝法测定黄精蜗牛胶囊中蛋白质含量。结果：考马斯亮蓝染色，用紫外分光光度计，在595nm处测定不同浓度蛋白标准溶液的吸光度。线性回归方程为：C=2.756+318.374*A，相关系数R=0.9983，表明蛋白标准溶液在20～100μg/ml范围内浓度与吸光度具有良好的正相关性。稳定性在20min内，RSD=2.44%，在60min内，RSD=4.83%，皆

【关键词】黄精蜗牛胶囊；考马斯亮蓝法；分光光度法

蛋白质是一切生命的物质基础，是机体细胞的重要组成部分。蜗牛是陆地上最常见的软体动物之一，含有大量的蛋白质，具有很高的食用和药用价值。本公司研制的黄精蜗牛胶囊以蜗牛为主料，佐以黄精、党参等药材，产品可以调节机体代谢，增加人体免疫功能。

本文使用考马斯亮蓝法测定黄精蜗牛胶囊中蛋白质含量，以确定产品质量标准，控制产品质量。

实验方法：

1、仪器与试药

1.1仪器：紫外分光光度计，岛津UX-2450；

分析天平，FA2004，上海方瑞仪器有限公司

1.2试药：牛血清白蛋白标准品，中国药品生物制品检定所；

考马斯亮蓝G-250，国药集团化学试剂有限公司。

黄精蜗牛胶囊由上海新亚药业邗江有限公司提供。

2、试液配制

2.1蛋白标准溶液的制备

将牛血清白蛋白标准品溶于蒸馏水，配成浓度为100μg/ml的蛋白标准溶液，精密量取浓度为100μg/ml的蛋白标准溶液10ml、20ml、30ml、40ml加蒸馏水定容于50ml容量瓶，浓度分别为20、40、60、80μg/ml。

2.2考马斯亮蓝G-250溶液的制备

精确称取考马斯亮蓝G-250 100mg，溶于50ml90%的乙醇，加入85%（W/V）磷酸100ml，用蒸馏水定容于1000ml容量瓶，浓度为100μg/ml。

2.3供试品溶液的制备

精确称取2g供试品，充分溶于蒸馏水，滤过，用蒸馏水冲洗滤纸，合并滤液定容于100ml容量瓶；精密吸取2ml，定容于1000ml容量瓶，配成浓度为40μg/ml的供试品溶液。

3、蛋白标准曲线及回归方程

精密量取浓度为20、40、60、80、100μg/ml蛋白标准溶液0.5ml分别于5支10ml具塞试管，再加入2.5ml考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀后，放置5～10min，待其充分反应后，用紫外分光光度计于595nm处测定吸光度，对牛血清白蛋白溶液浓度和吸光度进行线性回归，建立回归方程。

用紫外分光光度计，在595nm处测定不同浓度蛋白标准溶液的吸光度。以蛋白溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，线性回归，绘制标准曲线，线性回归方程为：C=2.756+318.374*A，相关系数R=0.9983，表明蛋白标准溶液在20～100μg/ml范围内浓度与吸光度具有良好的正相关性。结果见表1。

4、供试品中蛋白含量的测定

精密量取供试品溶液0.5ml于10ml具塞试管，再加入2.5ml考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀后，放置5～10min充分反应，用紫外分光光度计于595nm处测定吸光度，代入回归方程计算浓度。结果如表2所示。

5、稳定性实验

取供试品溶液，按实验方法4中的方法，在60min内的，每隔10min测定一次供试品的吸光度值，观测其稳定性，在20min内，RSD=2.44%，在60min内，RSD=4.83%，皆

6、加样回收率实验结果

精密量取浓度为40μg/ml的供试品溶液0.25ml加入10ml具塞试管，分为三组，每组6个重复，再加入与供试品溶液相同体积的蛋白标准溶液，分别浓度为16μg/ml、20μg/ml、24μg/ml。按实验方法4中方法，测定吸光度，代入回归方程，计算加样回收率。三组不同浓度的供试品加样回收率在100%～110%之间，平均值为106.57%，RSD=3.26%，表明用考马斯亮蓝法测定黄精蜗牛胶囊的蛋白含量结果较准确，方法可行，结果见表4。

7、讨论

考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，能与蛋白质通过范德华力相互作用形成蛋白质―考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，在595nm处有最大吸收，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质―考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。用此法测定蛋白质含量灵敏度高，测定快速、简便，干扰物质少。

本实验显示在加考马斯亮蓝溶液后10min～20min内完成测定样品的吸光度，数据稳定；实验结果表明用考马斯亮蓝法测定黄精蜗牛胶囊的蛋白质含量结果较准确，方法可行，可以有效控制产品质量。

参考文献

[1]孙士清.考马斯亮蓝法快速测定乳品中蛋白质含量[J].山东科学，2011，24，[6]：53―55

[2]王孝平.考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究[J].天津化工，2009，23，[3]：40―41

作者简介

张政，男，1961.9.，籍贯山东，执业药师，生物工程专业。