570例肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的分析研究

[摘要] 目的 探讨不同年龄段肺癌患者T淋巴细胞亚群和NK细胞变化及临床意义。 方法 回顾分析570例肺癌患者淋巴细胞亚群的流式细胞术检测结果。 结果 肺癌在51～80年龄段内发病率占78.6 %；肺癌患者CD4+ T细胞相对减低、CD8+ T细胞相对增高、CD4+/CD8+比值明显降低，与正常对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）；随着肺癌患者年龄降低，NK细胞有明显降低趋势（P < 0.01），CD3+ T细胞有明显增加趋势（P < 0.01）。 结论 肺癌患者CD4+ T淋巴细胞亚群及NK细胞活性受到抑制，CD4+/CD8+比值显著降低，细胞免疫功能下降，年龄越年轻其细胞免疫功能越紊乱；流式细胞术检测外周血T淋巴亚群对评价疗效、判断预后具有重要价值。

[关键词] 肺癌；T淋巴细胞；NK细胞；流式细胞术

[中图分类号] R734 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）04（b）-0093-03

肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤。肺癌的5年生存率只有10%～20%[1]，预后极差。近50年来，我国肺癌发病率明显增高，在大中城市肺癌已居男性肿瘤之首。T淋巴细胞在抗肿瘤中具有极其重要的作用；T细胞应答是控制肿瘤生长发育的最重要的宿主应答；参与抗肿瘤免疫的两类T细胞亚群为CD4+辅助/诱导T细胞、CD8+抑制/细胞毒T细胞；T淋巴细胞及亚群可作为临床判断患者状态的一个敏感指标，对临床治疗具有重要意义。NK细胞在抗肿瘤的天然免疫和特异性免疫中发挥效应作用，能够直接杀伤各种肿瘤细胞和病毒感染细胞，是机体抗肿瘤的第一道防线。本文旨在探讨肺癌患者淋巴亚群变化和不同年龄组细胞免疫状况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

570例肺癌患者均为2009年1月～2012年10月淮南东方医院集团肿瘤医院初次住院的临床确诊患者，其中，男性481例，女性89例，男女比例为5.4∶1；最大年龄92岁，最小27岁，中位年龄66岁。正常对照组20例，其中，男性13例，女性7例，年龄35～57岁，均为体检未发现肿瘤及免疫性疾患的人员。

1.2 样本采集

肝素真空采血管采集静脉血2 mL，室温放置，样本24 h内做染色处理。

1.3 试剂仪器

使用BD MultitestTM IMK kit 四色荧光抗体试剂盒（Cat No：340503），CaliBRITETM 3 COLOR KIT（Cat No：340 486）和CaliBRITETM APC（Cat No：340487）定标荧光微球，FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司），调用四色免洗条件MultiSET软件自动分析淋巴细胞亚群；报告NK细胞（CD16+56+）、T淋巴细胞（CD3+）、辅助/诱导T细胞（CD3+ CD4+ CD8-）和抑制/细胞毒T细胞（CD3+ CD4- CD8+）占淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+细胞比值。

1.4 统计学处理

实验数据均以 x±s表示，组间比较用t检验，淋巴亚群结果的年龄趋势分析用线性回归分析，应用SPSS 17.0统计软件，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌不同年龄组构成比

本组结果在51～80岁年龄段内发病人数占肺癌总人数的78.3%，是肺癌高发年龄段。肺癌在71～80岁组发病率最高（28.8%），可能是人的衰老，免疫系统功能衰弱，特别是细胞免疫功能下降，导致肿瘤发病率增加。由于80岁以上人群数量明显减少，其发病率明显减低并不能说明其发生肺癌的概率会降低。各组比例如图1。

2.2 肺癌患者不同年龄组与对照组淋巴细胞亚群结果

肺癌患者CD4+ T细胞相对减低、CD8+ T细胞相对增高、CD4+/CD8+比值明显降低，与正常对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）；NK和CD3+ T细胞与对照组比较，差异无统计学意义。肺癌患者不同年龄组与对照组淋巴细胞亚群结果见表1。

2.3 肺癌患者淋巴亚群结果的年龄趋势分析

以年龄组（1）～（5）组为自变量，以淋巴亚群结果为因变量作线性回归分析，SPSS 17.0软件统计结果见表2。

随着肺癌患者年龄降低NK细胞有明显降低趋势（P < 0.01），CD3+ T细胞有明显增加趋势（P < 0.01），如图2。

3 讨论

CD4+ T细胞可直接杀伤肿瘤细胞，可识别肿瘤细胞分泌的可溶性抗原，参与B细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和细胞毒T细胞的激活，进而发挥抗瘤作用；CD4+ T细胞的减少可以解释肿瘤的免疫逃避机制。肿瘤细胞具有分泌多种免疫抑制因子功能，可抑制T细胞和NK细胞[2]，使CD4+ T细胞和NK细胞数量减少，CD4+ T细胞和NK细胞减少可削弱机体的免疫监视作用。本组结果显示CD4+ T细胞和NK细胞明显降低，说明肿瘤患者存在免疫逃避；随着年龄的增大CD4+ T细胞降低明显，免疫功能随年龄增加而不断下降[3]，肿瘤的免疫逃避增加。

CD8+ T细胞按CD28有无可分为CD8+/CD28+和CD8+/CD28-两类，前者有细胞毒细胞功能，而后者则有抑制功能，CD28分子在T细胞激活、增殖中具有重要作用；恶性肿瘤患者CD8+ T细胞CD28+分子表达率显著下降，影响T细胞的活化增殖，而CD8+/CD28- T细胞逐渐增高，进而造成机体对肿瘤免疫力的下降[3-4]。在抗肿瘤的免疫应答中，细胞毒性T细胞（CTL）成为抗肿瘤免疫的主要效应细胞[5]。本组结果CD8+ T细胞明显增加超过CD4+ T细胞减少的数量导致CD3+总T细胞增加，说明肺癌患者有抑制功能的T细胞增加，CD8+ T细胞不能被充分激活而无法产生有效抗肿瘤作用。在杀伤肿瘤中往往CD4+、CD8+两类细胞相互配合，共同协作。肿瘤形成发展过程中，产生或分泌可溶性免疫因子，可诱导CD8的产生同时阻止CD4的形成和成熟而导致CD4+/CD8+比值下降，CD4+/CD8+比值可反映机体的免疫功能状况。

NK细胞具有抗肿瘤，抗病毒感染，抗器官移植，参与T淋巴细胞、B淋巴细胞的调节及其免疫调节的功能。NK细胞通过受体作用维持平衡、发挥杀伤效应[6-7]。Cooper MA等[8]研究证明人外周血NK细胞可分为二群，80%～90%的NK细胞低表达CD56高水平表达CD16（CD56dim CD16brigh），此类细胞可有效地发挥细胞毒作用；10%～20%的NK细胞表型为CD56brighCD16dim或CD56brighCD16-，其功能主要是分泌细胞因子，参与机体的免疫调节。陈文宽等[9]研究78例喉咽鳞癌患者发现癌症组较非肿瘤对照组NK细胞活性低；局部晚期患者及有区域淋巴结转移患者的NK细胞活性同样降低。康培良等[10]报道胰腺癌根治手术治疗后可明显提高T细胞亚群和NK细胞的免疫功能。本研究肺癌患者NK 细胞降低与文献一致[9-11]，患者越年轻NK细胞免疫活性越低。

在21～40岁组NK细胞明显降低，CD3+细胞、CD8+ T细胞明显增高，CD4+/CD8+比值显著降低（P < 0.01），在71～80岁组NK细胞比前四组明显增高（P < 0.01）、稍高于对照组，说明年轻患者细胞免疫功能活跃，老年患者机体代谢慢、肿瘤生长也相对缓慢，老年机体本身免疫低下，细胞免疫反应降低。不同年龄的肺癌患者细胞免疫功能不同，其治疗策略、方法也应不同。肺癌患者越年轻细胞免疫功能紊乱越明显，提示年轻患者的治疗更要注重细胞免疫的调节和平衡。而老年患者机体本身免疫功能低下，细胞免疫对肿瘤的抑制能力有限，应注意机体的整体性治疗，防止并发症。

总之，肺癌患者的CD4+ T细胞降低、CD8+ T细胞升高、CD4+/CD8+比值显著降低，NK细胞降低，说明患者免疫功能处于抑制状态，T细胞亚群及NK 细胞活性检测可作为肺癌免疫功能及预后的监测指标。肺癌年轻患者细胞免疫功能紊乱明显，提示年轻患者的治疗更要注重细胞免疫的调节和平衡。

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（收稿日期：2013-01-29 本文编辑：郭静娟）