谈福尔马林对原生动物微生物的影响

瘤胃原虫的计数所用试剂：1号固定液（4％的福尔马林溶液40mL，NaCl9．0g，用蒸馏水定容到1000mL），2号固定液（0．3％冰醋酸），M．F．S溶液（35％福尔马林100mL，NaCl8．0g，甲基绿0．60g，用蒸馏水定容到1000mL）。将血球计数器进行改装作为镜检计数室：在血球计数器离计数室两边大约0．5cm处用胶水固定厚度为0．4mm的玻片，使计数室深为0．5mm。将瘤胃液样品解冻、摇匀，取1号、2号固定液按1∶2的比例混匀，取混合液与瘤胃液样品各0．1mL混匀，然后用M．F．S溶液倍比稀释。为便于镜检通常将瘤胃液稀释至3～8倍（稀释倍数以每个方格内平均有5个虫体为宜），静置2min，显微镜（10×40倍）下观察原虫形态，参照冯仰廉［6］和卢德勋等［7］的原虫特征进行分类。据公式计算：样品中的原虫数／mL＝每个小方原虫数×8．0×105×稀释倍数；其中8．0×105为每mL液体包含的小方格数。1．4．3瘤胃液氨态氮浓度的测定采用氧化镁蒸馏法［8］，蒸馏时每次瘤胃液的用量为2mL。1．5统计分析试验数据均以平均数±标准差表示，采用SPSS17．0统计软件One－WayANOVA中的Duncan进行数据处理。

结果与分析

绵羊瘤胃液细菌总数分别增加58．3％（P＜0．01）和减少21．7％（P＜0．01），34．1％（P＜0．01），表明瘤胃细菌数的增减可能是口服福尔马林作用“有利”或“不利”的原因。瘤胃小杆菌、球菌和新月芽菌数量变化的趋势与总数的变化相同，也是在“有利”剂量时显著增加，在“不利”剂量时显著减少。但大杆菌数随福尔马林剂量增大一直呈减少趋势。由表3知，瘤胃内原虫数量随口服福尔马林剂量显著下降，在口服福尔马林1．0，3．0和4．0mL／kg时，瘤胃原虫数量分别减少49％（P＜0．01），82．7％（P＜0．01）和88．5％（P＜0．01），并且在不同取样时间点、不同原虫种类情形均相同，没有显示出在“有利”剂量和“不利”剂量时变化趋势上的差异。福尔马林口服剂量对瘤胃液pH值和氨态氮浓度的影响由表4知，口服不同剂量对瘤胃液pH值没有显著的影响。由表5知，瘤胃液氨态氮浓度随福尔马林口服剂量一直呈下降态势，对于“有利”和不利剂量并没有呈现出转折性的变化。在1．0，3．0和4．0mL福尔马林口服剂量瘤胃液氨态氮浓度分别降低16．5％，39．9％和65．5％。福尔马林口服剂量对绵羊自由采食量的影响由表6知，在“有利”福尔马林口服剂量即1．0mL／kg日粮，绵羊的干物质自由采食量增加9．9％（P＜0．01），而在“不利”剂量（3．0或4．0mL／kg日粮）则分别降低5．4％（P＜0．01）或10．8％（P＜0．01），表明不同福尔马林口服剂量对绵羊采食量的影响不同。

讨论

福尔马林的口服剂量至关重要，在高于“有利”剂量即1．0mL／kg日粮时，口服福尔马林对绵羊营养代谢的促进作用会降低或截然相反［3］。而本研究表明，瘤胃原虫数量随福尔马林口服剂量增大不断减少，没有发生转折性的变化，因此不是动物营养代谢方向变化的根本原因，而瘤胃细菌总数则随福尔马林口服剂量变化的方向截然不同，在“有利”剂量时是增加的，在超过“有利”剂量后则不断减少，甚至低于正常对照组，提示瘤胃细菌总数的变化可能是口服福尔马林引起动物营养代谢变化的根本原因，即当口服福尔马林有利于瘤胃细菌总数增加时，动物的营养代谢就会改善，而使得瘤胃细菌总数减少时就恶化。不同福尔马林剂量作用不同的机理可能是，在一定剂量时，福尔马林可能只作用于原虫，原虫数量的减少使得被吞噬的细菌数量减少，因而造成瘤胃细菌总数量的增加，使得瘤胃的消化能力增加，进而动物的自由采食增加，营养供应增加；而当福尔马林剂量继续增加时，福尔马林还直接作用于瘤胃细菌，5在抑制原虫生长的同时也抑制了细菌的生长繁殖，因而造成瘤胃细菌数减少，瘤胃消化能力降低，动物采食减少。因此出现了福尔马林口服剂量不同，对瘤胃细菌作用不同，进而对瘤胃消化代谢甚至动物营养代谢也不同的现象。在瘤胃细菌中，大杆菌数量随福尔马林剂量增加而不断减少，可能是因为大杆菌对福尔马林更敏感，在较低剂量时就开始减少。然而，以上可能却面临着完全去原虫动物研究结果的挑战。完全去原虫动物瘤胃细菌的总数大量增加［9，10］，而瘤胃消化能力（有效降解率）却视日粮类型降低或不变。瘤胃原虫对于瘤胃消化不是必不可少的，但对微生物的作用过程又有重要的影响［11］。完全去原虫不能改善动物的营养代谢情况［12］。由于原虫在瘤胃消化中的确切作用并不十分清楚，所以部分去原虫所出现的作用也较难说清。可以初步假设口服福尔马林的作用是由于减少了瘤胃原虫数量，使得瘤胃细菌数量增加，而余下的原虫又足够发挥其正面的消化作用，从而增加了瘤胃微生物群落的消化代谢能力。瘤胃微生物除原虫和细菌外，还有真菌，因此，需要对福尔马林口服剂量对瘤胃真菌的影响进行研究。

作者：栗志坚 雒秋江 上官京 李海英 李昊 单位：新疆农业大学