乳制品中三聚氰胺检测方法的改进

摘 要：本文在《GB/T22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》的基础上对样品前处理进行了优化，在保证检验结果准确性的前提下，缩短了检测用时，提高了工作效率。

关键词：乳制品；三聚氰胺；液相色谱；快速检测

中图分类号：TS 252.1 文献标识码：A

1药品及设备

1.1 药品

甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、三氯乙酸（分析纯）、柠檬酸（优级纯）、辛烷磺酸钠、三聚氰胺。

亚铁氰化钾溶液：用水溶解106g 亚铁氰化钾并稀释到1000 mL。

醋酸锌溶液：用水溶解219g 二水合醋酸锌和32ml 醋酸，并稀释到1000mL。

1.2 仪器和设备

高效液相色谱仪（U3000，戴安）、高速离心机、涡旋混合器、超声机。

2方法与结果

2.1 标准储备液配制

准确称取50mg （精确到0.1mg） 三聚氰胺标准品于50mL容量瓶中，用20%甲醇水溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的标准储备液，冷藏避光保存。用20%甲醇水将标准储备液逐级稀释得到浓度为2mg/L 的标准工作液。

2.2 三聚氰胺样品前处理方法探讨

2.2.1 方案1

称取奶粉样品2g置于25mL比色管中，加甲醇5mL，用1%三氯乙酸溶液定容至25mL，混匀，旋涡震荡约2min，超声20min，转移至50mL离心管中，设置8000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，供HPLC测定。

2.2.2方案2

称取奶粉样品2g置于25mL比色管中，加入10mL水，5mL甲醇，混匀，旋涡震荡约2min，超声20 min，依次加入0.5mL亚铁氰化钾、0.5mL乙酸锌旋涡震荡约2 min，用水定容至25mL，旋涡2min，转移至50mL离心管中，设置8000r/min离心10min，上清液过0.22μm 滤膜，供HPLC测定。

2.2.3方案3

称取奶粉样品2g置于25mL比色管中，加1%三氯乙酸15mL，混匀，旋涡震荡约2min，超声20min，依次加入0.5mL亚铁氰化钾、0.5mL乙酸锌旋涡震荡约2 min，用甲醇定容至25mL，旋涡2min，转移至50mL离心管中，设置8000r/min离心10 min，上清液过0.22μm滤膜，供HPLC测定。

2.2.4方案4

称取奶粉样品2g置于25mL比色管中，加1%三氯乙酸10mL，甲醇5mL，混匀，旋涡震荡约2min，超声20min，依次加入0.5mL亚铁氰化钾、0.5mL乙酸锌旋涡震荡约2 min，用水定容至25mL，旋涡2min，转移至50mL离心管中，设置8000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，供HPLC测定。

2.3 结果讨论

采用方案1对样品进行前处理，样品处理液较浑浊，经滤膜过滤后仍然浑浊，无法满足上机检测要求。采用方案2对样品进行前处理，检测结果经计算回收率小于90%，无法满足方法准确性的要求。采用方案3对样品进行前处理，上机检测发现加标样品的目标峰保留时间与标品的保留时间出现偏移，对检测结果无法准确定性。采用方案4对样品进行前处理，初步满足实验的各项要求。因此采用方案4对样品进行前处理。

2.4 确定的样品前处理步骤

奶粉类样品处理步骤：称取奶粉样品2g置于25mL比色管中，加入1%三氯乙酸10mL，甲醇5mL，混匀，旋涡震荡约2min，超声20min，依次加入0.5mL亚铁氰化钾、0.5mL乙酸锌旋涡震荡约2min，用水定容至25mL，旋涡2min，转移至50mL离心管中，设置8000r/min离心10min，上清液过0.22μm 滤膜，供HPLC测定。

液体奶类样品处理步骤：称取液体奶5g置于25mL比色管中，加入1%三氯乙酸5mL，甲醇5mL，混匀，旋涡震荡约2min，超声20min，依次加入0.5mL亚铁氰化钾、0.5mL乙酸锌旋涡震荡约2 min，用水定容至25mL，旋涡2min，转移至50mL离心管中，设置8000 r/min 离心10 min， 上清液过0.22μm 滤膜，供HPLC测定。

2.5 仪器条件

色谱柱：艾杰尔 Venusil ASB C18柱，（250×4. 6 mm）；流动相：离子对缓冲液-乙腈（90∶10） ，离子对缓冲液（柠檬酸2. 10g、辛烷磺酸钠2.16g，用980mL水溶解，调节pH至2.9～3.1，定容至1L备用）；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；波长：240nm；进样量：20μL。

2.6 准确性测试

2.6.1检出限

在本实验条件下，按3倍基线噪声（S/N=3）计算该方法的检出限为2mg/kg。

2.6.2 回收率测试

配制三聚氰胺浓度为10mg/kg的加标样品，按照以上方法对样品进行检测，计算回收率，检测结果如下：

2.6.3 精密度测试

用同一加标样品重复检测6次，计算相对标准偏差RSD（%），结果如下表：

3总结

由上述分析可知，采用本方法，样品的回收率均满足90%～110%的要求，精密度也满足要求，说明此方法可以保证检测结果的准确性，是可行的。本方法与国标方法相比，检测用时和检测费用都节约了一半，可以用于三聚氰胺的快速检测。

参考文献

[1] GB/T22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法[S].