腺嘌呤、鸟嘌呤致高尿酸血症大鼠肝脏损害的研究*

【摘要】 目的：观察腺嘌呤、鸟嘌呤作用高尿酸血症大鼠肝脏时，肝脏功能变化情况及透射电镜下肝脏超微结构的变化。方法：选用实验用雄性Wistar大鼠36只，随机分为A组（对照组）、B组（造模对照组）、C组（腺嘌呤组）、D组（腺嘌呤淀粉糊组）、E组（腺嘌呤、鸟嘌呤组）、F组（鸟嘌呤组），每组6只。B、C、D、E、F组连续给予酵母浸膏溶液15 g/（kg・d）灌胃7 d，诱导高尿酸血症代谢模型。造模成功后，B组给予淀粉糊灌胃，C组给予20 mg/（kg・d）腺嘌呤淀粉糊混合液灌胃，D组给予10 mg/（kg・d）腺嘌呤淀粉糊混合液灌胃，E组10 mg/（kg・d）腺嘌呤混合10 mg/（kg・d）鸟嘌呤淀粉悬液灌胃，F组给予20 mg/（kg・d）鸟嘌呤淀粉糊混合液灌胃。持续14 d后，测定各组大鼠血清ALT、AST、UA，并作肝脏组织电镜切片观察肝脏损伤情况。结果：（1）电镜下观察C组溶酶体明显增多，分散在细胞核周围，并有深色颗粒物质。D组溶酶体数量略有增多，脂滴增多，开始进入溶酶体。E组溶酶体增多，脂滴增多，出现深色颗粒状物质。F组胆小管中有少量深色颗粒状物质。（2）C～F组大鼠谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平与B组比较差异均有统计学意义（P

【关键词】 腺嘌呤； 高尿酸血症； 鸟嘌呤； 肝脏损害； 超微结构

高尿酸血症是痛风的发病前兆，它指的是血液中尿酸浓度高出正常范围的一种机体状态[1]。痛风及高尿酸血症好发于男性中老年人群，其患病率与年龄增长呈逐正相关[2-4]。伴随生活水平的提高及居民饮食结构的变化，亚洲地区无症状高尿酸血症及痛风的发病率逐渐升高，并呈现年轻化趋势[3，5]。其产生的两大主要原因是，尿酸排泄减少以及嘌呤代谢障碍[6]。目前研究多认为，高尿酸血症的发生，多是由于体内细胞的DNA 分解代谢、产生的嘌呤代谢障碍[7-9]。腺嘌呤、鸟嘌呤是构成人类及大鼠DNA的主要嘌呤。本实验通过研究腺嘌呤、鸟嘌呤的不同组合对大鼠肝脏功能及肝脏超微结构产生的影响，初步探究两者对肝脏的损伤程度差异及两者间有无相互作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠36只（青岛市实验动物和动物实验中心提供），体质量（230±20）g。

1.2 主要仪器与试剂 OLMPUS AU2700Beckman全自动生化分析仪（日本OLMPUS公司），JEM-1200EX透射电镜（日本JEOL公司）。腺嘌呤V900471-25G（美国Sigma公司），鸟嘌呤V900473-25G（美国Sigma公司），酵母浸膏（北京双旋微生物培养基制品厂，批号20140320）。ALT、AST、UA试剂盒（上海科华诊断用品有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 实验分组及动物模型制备 雄性Wistar大鼠36只，按体重随机分为六组，每组6只。环境温度保持在15～24 ℃，相对湿度45%～55%，昼夜各12 h。实验动物给予普通大鼠颗粒饲料，自由取食。A组为空白对照组。B、C、D、E、F组每天给予酵母浸膏15 g/（kg・d）灌胃，持续7 d，制备高尿酸血症模型[10-12]。B组为造模对照组，每天给予实验组同体积的淀粉糊（浓度40 g/L）灌胃。C组腺嘌呤组，给予腺嘌呤20 mg/（kg・d）与混合淀粉糊灌胃。D组腺嘌呤淀粉糊组，给予腺嘌呤

10 mg/（kg・d）与混合淀粉糊灌胃。E组腺嘌呤鸟嘌呤组，给予腺嘌呤10 mg/（kg・d）与鸟嘌呤10 mg/（kg・d）混合淀粉糊灌胃。F组鸟嘌呤组，给予鸟嘌呤20 mg/（kg・d）与混合淀粉糊灌胃。实验持续14 d，末次灌胃后12 h进行剪尾采血，分离血清。并取肝脏组织，低温下将组织修成1 mm×1 mm×2 mm大小长条形，浸泡于体积分数为2.5%戊二醛中保存。

1.3.2 透射电镜观察 将肝组织样品切至1 mm×

1 mm×1 mm大小，至于2.5%戊二醛固定4 h；

0.1 mol/L磷酸缓冲液漂洗3次，10 min/次；1%锇酸固定1 h，pH 7.3；0.1 mol/L磷酸缓冲液漂洗3次，10 min/次；丙酮脱水，在30%、50%、70%、80%、90%丙酮中依次脱水10 min，100%丙酮脱水3次，10 min/次；丙酮溶液，环氧树脂（EPON812）包埋剂混合液（2∶1）浸透0.5 h；

丙酮溶液，环氧树脂（EPON812）包埋剂混合液（1∶2）浸透1.5 h；将样品移到EPON812包埋剂中，温箱固化。37、45、60 ℃ 24 h超薄切片机（Ultracue E）切片，厚度为1～10 μm，将切下的片子转移到干净的滴有蒸馏水的载玻片上，加温，切片展平，干燥后经甲苯胺蓝染色，光学显微镜观察定位。超薄切片机（Ultracue E）切片至厚度50～70 nm；醋酸双氧铀染色15 min后，彻底水洗3次；柠檬酸铅染色15 min后彻底水洗3次；透视电镜下观察。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理，计量资料以（x±s）表示，比较采用配对t检验或单因素方差分析，两两比较采用HSD检验法，以P

2 结果

2.1 各组大鼠血清尿酸值变化 B～F组初始与造模后的血尿酸值比较差异均有统计学意义（P

*与初始比较，P

2.2 各组大鼠谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血尿酸比较 C～F组谷丙转氨酶、谷草转氨酶值与B组比较差异均有统计学意义（P

2.3 各组大鼠肝脏透射电镜观察情况 A组肝脏细胞细胞核结构完整，细胞核核膜边界清晰完整，线粒体结构正常，粗面内质网形态正常，有少量脂滴分布（图1）。B组肝脏细胞核结构正常，细胞器形态结构均正常（图2）。C组溶酶体、脂滴明显增多，分散在细胞核周围，并有深色颗粒物质（图3）。D组溶酶体数量略有增多，脂滴增多，开始进入溶酶体（图4）。E组溶酶体增多，脂滴增多，出现深色颗粒状物质（图5）。F组胆小管中有少量深色颗粒状物质（图6）。

3 讨论

高尿酸血症是一种嘌呤代谢紊乱症状，并且是痛风的前兆表现。它指的是血液中尿酸浓度高出正常范围的一种机体状态[13]。本实验通过连续灌胃酵母浸膏溶液，造模高尿酸血症大鼠模型[10-12]，造模后大鼠体重较重，饮食饮水正常。经检验，造模后血检血尿酸值与初始水平比较差异有统计学意义（P

实验中，分组施加处理因素后，大鼠谷丙转氨酶、谷草转氨酶组间差异有统计学意义（P

本实验通过观察大鼠肝脏细胞超微结构，发现造模后的高尿酸血症大鼠，在灌胃不同浓度的腺嘌呤、鸟嘌呤后，均有不同程度的变化。其中，单纯施加鸟嘌呤的大鼠，超微结构改变较轻，与正常大鼠肝脏形态较为接近。结合血清检测指标，可以看出鸟嘌呤对高尿酸血症大鼠的肝脏损害较轻。实验中，C、D、E三组大鼠分别施加了不同程度的腺嘌呤，三组大鼠的透射电镜切片可看到较为清晰的结构改变。结合血清检测可以看出，腺嘌呤对高尿酸血症大鼠的肝脏有一定的毒性作用。主要表现在溶酶体不同程度的增多，脂滴进入溶酶体，并引起溶酶体破裂。胆小管处有深色颗粒状物质沉积。其中C组腺嘌呤组的腺嘌呤施加量最多，肝脏超微结构的改变也最为明显。

腺嘌呤是一种含氮杂环嘌呤类化合物，在体内代谢的最终产物为尿酸[14-15]。大鼠进行腺嘌呤灌胃后，磷酸核糖焦磷酸和/或谷酰胺增加，谷酰胺磷酸核糖焦磷酸转移酶及黄嘌呤氧化酶活性亦增加，促进尿酸合成，进一步加重高尿酸血症大鼠尿酸代谢负荷[16-18]，致使实验组大鼠肝肾损伤。另外，腺嘌呤在体内代谢时，黄嘌呤氧化酶介导的氧自由基生成增加，亦可引发肝脏损伤[19-20]。以往研究发现腺嘌呤对大鼠肾脏的影响较为明显[14，16-17]，本实验中研究肝脏超微结构变化，亦有相似之处。有关腺嘌呤与鸟嘌呤之间的具体作用机制仍需进一步研究。

综上所述，建议高尿酸血症及痛风患者的饮食指导中，控制嘌呤摄入总量的基础上，控制腺嘌呤的摄入量。对痛风患者的并发症及其他慢性症状的控制有较好的作用。

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（收稿日期：2016-04-12） （本文编辑：蔡元元）