鹅沙门氏菌的分离与鉴定

摘 要：通过对疑似沙门氏菌病的病鹅进行细菌分离培养、革兰氏染色、镜检；生化试验鉴定等方法，分离到一株革兰氏阴性小杆菌，生化试验鉴定表明该菌为沙门氏菌，选择药敏试验中筛选出的敏感药物丁胺卡那霉素用于治疗，该群鹅的病情得到控制，由此表明：该群鹅为沙门氏菌病，选用药敏试验中筛选出的敏感药物用于治疗，取得较好效果。

关键词：鹅 沙门氏菌 分离鉴定 药敏试验

沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病。目前, 已发现的沙门氏菌的血清型有2000多种[1、2]。沙门氏菌属中的许多类型细菌对人、畜以及其他动物均有致病性。各种年龄的动物均可感染，但幼年者较成年易感[3]。近年来，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重。由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。沙门氏菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要意义[4]。近年来，随着抗菌药物的滥用和不当使用，沙门氏菌病的耐药性日趋严重, 加强对该菌耐药性的监测力度和耐药机制的研究迫在眉睫[5]。

2009年3月，凤阳某养殖户饲喂的800多只10日龄鹅出现死亡，3~4d后死亡100多只，发病鹅主要症状有精神沉郁，卧地不起，眼睑浮肿，食欲减退，饮水正常，排出绿色稀糊状粪便并污染周围的绒毛、腿软，有的病鹅出现呼吸道症状。剖检可见：肝脏瘀血肿大，表面有弥漫性针尖至粟粒大的灰白色坏死灶。胆囊充盈，心肌、胰脏上有坏死灶，脾脏瘀血肿大，气囊混浊有黄色干酪样分泌物，心包膜增厚与心脏粘连，直肠内充满绿色稀粪。为查明病因，控制该病，特进行病原的分离与鉴定。

一、材料和方法

1.材料

1.1病料 凤阳某养殖户送检来的10只病死鹅。

1.2设备与器材

隔水式恒温培养箱、手提式压力蒸汽、电炉、托盘天平、FA004型电子分析天平、搪瓷量杯、显微镜、漏斗、记号笔、称量纸、药匙、镊子、棉线、精密pH试纸及各种玻璃器皿等，以上仪器设备及器材均由安徽科技学院动物医学实验室提供。

1.3药品与试剂

各种培养基、革兰氏染液、生化试剂、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、药敏纸片等均由杭州天和微生物试剂有限公司生产。药敏纸片（美满霉素、阿米霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素、四环素、新霉素、强力霉素、氨苄西林钠、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、）等均由安徽科技学院动物医学实验室提供。

2.方法

2.1 细菌分离培养和形态学观察

2.2细菌分离培养

无菌取病死鸡的肝脏组织分别划线接种于麦康凯平板和SS琼脂平板上，37℃培养24小时，分别取上述菌落涂片，革兰氏染色镜检，在油镜下观察细菌的形态及染色特性。观察是否存在杂菌。对于已经纯化的细菌进行冷冻保存，未纯化的重复划平板、镜检，直至纯化为止。

2.3培养特性观察

分别接种普通肉汤培养基、三糖铁琼脂培养基、普通琼脂培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯培养基和SS培养基，于37℃恒温箱内培养24h，观察该菌的培养特性。

2.4生化试验

自制各种糖发酵管，取纯培养物分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖等生化管中，置于37℃恒温培养箱中，培养18~24 h，观察发酵管的反应情况。按[6]要求自制各种生化试剂，取纯培养物分别做糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验、尿素酶利用实验 、柠檬酸盐利用试验、半固体琼脂试验。

2.5药敏试验

参照文献[7]进行。 对分离到的菌株进行了药敏试验，共检测15种药物，包括美满霉素、阿米霉素、庆大霉素、卡那霉素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素、四环素、新霉素、强力霉素、氨苄西林钠、丁胺卡那霉素、恩诺沙星。结果判断标准：抑菌圈直径大于20mm为高度敏感，抑菌圈直径在10~20mm为中度敏感，抑菌圈直径小于10mm为耐药。

二、结果

1.细菌分离培养

麦康凯琼脂平板上呈淡黄色透明, 圆形微凸起, 表面光滑湿润,小菌落；SS琼脂平板上半透明灰白色的菌落。

2.形态观察结果

在上述试验中得到一株革兰氏阴性单独散在的小杆菌。

3.培养特性观察结果

该菌在麦康凯琼脂呈淡黄色透明，光滑，边缘整齐小菌落；在SS琼脂上呈半透明灰白色的菌落；在伊红美蓝琼脂上呈半透明、无色的微隆起的表面光滑无金属光泽的菌落；在普通肉汤培养基呈均匀一致浑浊，而且有沉淀；普通琼脂培养基呈圆形、无色、半透明表面光滑小菌落。

4.生化试验结果

4.1糖发酵试验

该菌可发酵葡萄糖产酸又产气，不发酵乳糖、蔗糖，发酵麦芽糖仅产酸。

4.2三糖铁底层呈黄色，斜面呈红色

4.3吲哚试验阴性，M-R试验阳性，VP试验阴性，能利用柠檬酸盐，不能利用尿素酶，半固体琼脂试验表明该菌有鞭毛能运动。

5.药敏试验结果（见表1）

三、讨论

近些年来, 为了控制和预防某些细菌感染, 在饲料添加剂及治疗中常盲目使用一些抗菌药物, 导致产生许多耐药菌株[8]，像沙门氏菌就属于此类细菌。 迄今为止,沙门氏菌共有2000种以上的血清型，而且不同地区差别比较大，不相同的菌株交叉之后不具有保护作用，极易产生耐药性。由由试验可知，该群鹅死亡的主要原因是由于感染了沙门氏菌，通过现场调查发病的主要原因可能是由该养殖户为养鹅老户，鹅舍为塑料大棚，棚内湿度大，卫生条件差，鹅群密度大，粪便堆积通风不良，加之发病前温度忽高忽低，饲料和饮水供应不良，在一定程度上诱发该病。

表1 药敏试验结果

注：其他抗菌药物如：美满霉素、四环素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素均为耐药，故未列入。

药敏试验结果表明，本次分离的沙门氏菌对新霉素、丁胺卡那霉素、氨苄西林钠、恩诺沙星、阿米卡星高度敏感，强力霉素、卡那霉素中度敏感，而对美满霉素、四环素、先锋必素、氯霉素、菌必治、奥复星、麦迪霉素均耐药。对余下的鹅进行选用丁胺卡那霉素饮水2d后，该群鹅疫情得到控制。

目前，随着耐药菌株的产生,沙门氏菌对抗菌药物的敏感性也越来越低[9],所以在治疗本病时，临床上应严格掌握抗菌药物的适当使用，防止错用，滥用抗菌药，最好先进行药敏试验，选出敏感药物进行有效治疗，结合药敏试验结果考虑联合用药和交替用药。同时预防本病应加强饲养管理，消除诱因，采取综合防制措施，建立规模化养殖场生物安全体系，最大可能的减少病原微生物，降低病原感染几率，从而促进养禽业的健康发展。

参考文献：

[1]Joshua F, Donal G Guiney.Diverse virulence traits Jnderlying differentclinical outcomes of Salmonella infection[J].The Journal of Clinical Inves Tigation, 2001, 4(107):775-80.

[2]Francois X W, Francoise G.Multidrug resistance in Salmonella;enterica serotype typhimurium from humans in France( 1993- 2003) [J].Journal of Clinical Microbiology, 2006, 44(3) :700-708.

[3]陈溥言.兽医传染病学(第五版)[M]. 北京:中国农业出版社,2008:120.

[4]阚秋霞,马增晖.沙门氏菌的检测方法[J].禽业园地,2006,23(24):34.

[5]邓树轩,程安春,汪铭书.沙门氏菌耐药机制的研究进展[J].安徽农业科学,2007,35(23):7205-7207.

[6]胡桂学.兽医微生物学实验教程[M]. 北京:中国农业出版社，2006:47-56.

[7]姚火春.兽医微生物学实验指导(第二版)[M].北京:中国农业出版社,2007:20-65.

[8]刘娟,吉文汇,闫芳.鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的分离鉴定及药敏试验研究[J]. 兽医研究.2007(213):16

[9]吴清民.兽医传染病学[M].北京:中国农业大学出版社,2001:166-171.

通讯作者：李贺侠