地中海贫血筛查P2峰提示血糖升高的阈值探讨

doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2014.9.58

摘 要 目的：研究高效液相色谱分析法（HPLC）地中海贫血筛查时P2峰提示空腹血糖（FBG）升高的阈值。方法：用HPLC法筛查77例地中海贫血患者P2峰≥5.0%，同时又做了FBG检测，对患者的临床资料进行回顾性分析，探讨P2峰提示血糖升高的阈值。结果：P2峰5.0%时，未发现有FBG升高，P2峰5.1%时开始出现FBG升高，P2峰≥5.7%时，FBG升高比率为100%，P2峰≥5.7%与血糖升高的符合程度较好。结论：用HPLC法地中海贫血筛查时，P2峰提示血糖升高的阈值定为P2峰≥5.7%较为理想。

关键词 地中海贫血 筛查 高效液相色谱 空腹血糖

Hint of elevated blood sugar threshold of P2 peak in Thalassemia screening

Wei Shuofeng，Yan Tizhen

Blood Screening Test Department of Liuzhou Maternal and Child Health-Care Hospital of Guangxi Province，545001

Abstract Objective：To explore the hint of elevated blood sugar threshold of P2 peak in Thalassemia screening with High-performance liquid chromatography.Methods：We screened 77 cases of thalassemia patients with the peak P2≥5% by HPLC in 2010 December to 2012 June.At the same time，these patients had FBG detection.Their clinical data were retrospectively analyzed，to explore the P2 peak suggests that elevated blood glucose threshold.Results：When the P2 peak was 5%，we found no increase in FBG.When the P2 peak was 5.1%，FBG began to increase.When the peak P2 was ≥5.7%，FBG increase rate was 100%.The peak P2≥5.7% was consistent with elevated blood glucose levels.Conclusion：Using HPLC method to screening for thalassemia，P2 peak suggested that elevated blood glucose threshold for peak P2≥5.7%.

Key words Mediterranean anemia；Screening；High performance liquid chromatography；Fasting blood glucose

HPLC法基于阳离子交换的高效液相色谱分析技术由于其操作简单，自动化分析程度高，快速、准确且精密度高已广泛应用于临床。用高效液相色谱分析法进行地中海贫血筛查时，糖尿病患者标本在色谱图上会有典型的P2峰升高。由于此方法主要是用于地中海贫血筛查，而不是糖尿病的诊断，故P2峰升高到什么程度时才算高，需要提示患者进行血糖检查，厂家的说明书上也没有说明。2010年12月-2012年6月筛查48325例地中海贫血标本，共有1245例P2峰≥5.0%，经查其中有77例进行了空腹血糖检测，分析这77例患者的P2峰含量与空腹血糖检测结果，探讨P2峰提示血糖升高的阈值，现报告如下。

资料与方法

2010年12月-2012年6月筛查地中海贫血和FBG检查的患者77例，男15例，女62例，年龄8个月～46岁。

方法：①抽取静脉血2ml，以EDTA抗凝，应用HPLC法检进行地中海贫血筛查，从而得到P2峰的值，使用的仪器为美国公某司生产的VARIANT Ⅱ β-thalassemin Short Program地中海贫血检测系统及配套试剂、质控品。检测前如果使用的柱子是新柱子，要首先进行双灌注，然后根据双灌注时HbA2峰的出峰时间调好柱温，再进行校准品和高、低值质控物测定；如果使用的柱子是旧柱子，可以不进行双灌注而直接进行校准品和高、低值质控物测定，只有当校准品的滞留时间、校准因子符合仪器的要求和室内质控的结果在控后，才能进行临床标本的检测。②抽取静脉血2ml，不抗凝，及时送检。应用葡萄糖氧化酶法测定FBG，使用的仪器为日立7600，试剂使用上海执诚生物科技有限公司生产葡萄糖氧化酶法试剂，使用Bio-Rad公司生产的质控品进行室内质控，室内质控的结果在控后，才能进行临床标本的检测。参考值3.9～6.1mmol/L。

结 果

结果显示P2峰含量≥5.7%与血糖升高的符合程度较好。77例标本的P2峰含量与FBG检测比较结果，见表1。

不同P2峰值与提示血糖升高的敏感性和特异性，见表2。

讨 论

FBG和口服葡萄糖耐量（OGTT）试验是筛查和诊断糖尿病最常用的检测指标，但是上述2个指标检测前都需要禁食>8小时，OGTT糖试验还需要多次采血，试验过程耗时及步骤繁杂，导致其重复性差。如果采血后不及时分离血浆或进行血糖检测，静脉血的葡萄糖浓度将随留置时间延长而逐渐下降。此外，实验室检测血糖仪器和方法、血液检测前离心的时间也会影响血糖的检测水平。因此推行更准确易行的诊断就显得非常必要和迫切[1]，2002年国外学者Millar等报道糖尿病的诊断可依赖血红蛋白电泳[2]。2011年Conroy等在利用HPLC对2094例血红蛋白病进行调查的过程中，HPLC峰图显示55例样本糖化血红蛋白片段明显地增加，其中38例具有糖尿病，而常规的生化方法只发现20例存在糖尿病，而11例没有检测出来[3]。在临床实践中，HbA1c用于筛查与诊断糖尿病的优点：①FBG与OGTT均需要被检查者空腹至少8小时。如患者于早餐后或下午就诊则无法做出诊断，除非存在较严重的高血糖并有明显的临床症状。HbA1c较之于FBG还有采血优势：无需禁食，甚至新一代的便携式检测仪，经毛细血管采血即可。②在就诊前数天或短期节食或运动锻炼显著影响FBG与OGTT的检测，而短期生活方式改变不会影响HbA1c的检测结果，HbA1c能准确反映了2～3个月的平均水平。③HbA1c反映了患者血糖在一段时间内的平均，而研究血糖控制与糖尿病微血管并发症相关性的多项大型临床试验均无一例外地使用了HbA1c来评估血糖水平[4]。

对于HbA1c用于筛查和诊断糖尿病的切点，Joutovsky等研究认为，正常情况下，HbA1c的水平应

本研究显示，HPLC法血红蛋白分析P2峰与血糖有较好的相关性，P2峰5.0%时，未发现有FBG升高，P2峰5.1%时开始出现FBG升高，P2峰≥5.7%时，FBG升高比率100%（25/25），这与HbA1c极为相似，从患者的P2峰与FBG之间和HbA1c与FBG之间的关系对比来看，P2峰几乎等同于糖化血红蛋白，不排除Bio-Rad公司的VARIANT II β-thalassemin Short Program地中海贫血检测系统色谱图上的P2峰是HbA1c峰的可能。因为成人血红蛋白的主要成分是血红蛋白A，约占97%，另外2种血红蛋白为HbA2和HbF，其中血红蛋白A绝大部分是非糖基成分，血红蛋白A有3种糖基化的小组分，即HbA1a、HbA1b、HbA1c[8]。在VARIANT Ⅱ β-thalassemin Short Program地中海贫血检测系统正常成人的色谱图上，会出现HbA0、HbA2、HbF、P2和P3等峰，HbA0、P2和P3与HbA1a、HbA1b、HbA1c在成人血红蛋白中的含量十分接近。

对于糖化血红蛋白检测，通常情况下，HbE和HbD对一些离子交换HPLC法有干扰；HbS和HbC会干扰一些免疫法和个别离子交换HPLC法，某些离子交换HPLC法在参考范围内不受HbE、HbD、HbS和HbC的干扰，但随着糖化血红蛋白浓度的增高，干扰也会增加。当HbF浓度10%，则要审慎[9]。说明糖化血红蛋白的水平除了和血红蛋白的质有关，还与量有关[10]，HbF及HbE、HbD、HbS和HbC等各种血红蛋白的含量增加时，糖化血红蛋白所占的百分比就相对减少。ARIANT Ⅱ β-thalassemin Short Program地中海贫血检测系统专用于检测β-地中海贫血，且同时可以检测HbE、HbD、HbS和HbC等各种异常血红蛋白[11]。检测血红蛋白P2峰可以同时显示HbF、HbA、HbA2及HbE、HbD、HbS和HbC等各种异常血红蛋白峰。HPLC法血红蛋白分析有配套的试剂、校准物和质控物，操作简便，重复性好，标本采集不受饮食限制，标本稳定性好，目前常用于地中海贫血筛查[12]，与检测糖化血红蛋白相比，检测血红蛋白P2峰优点除了有提示血糖升高的作用外，还可以同时判断其他血红蛋白峰的含量是否增加，从而判断P2峰是否受其他血红蛋白的影响。

综上所述，P2峰与血糖有较好的相关性，可用于筛查和诊断糖尿病。P2与HbA1c极为相似，但HPLC法在检出P2峰的同时，能反映更多的血红蛋白指标，具有能成为比HbA1c更好的筛查和诊断糖尿病指标的潜质，P2峰≥5.7%提示血糖升高特异性高，可作为地中海贫血筛查时提示血糖升高的阈值，但本研究的样本量较少，仍需大样本量继续观察。

参考文献

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5 Joutovsky A，Hadzi-Nesic J，Nardi MA.HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies： a study of 60000 samples in a clinical diagnostic laboratory[J].Clin Chem，2004，50（10）：1736-1747.

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9 王冬环，陈文祥.糖化血红蛋白诊断糖尿病的时代-糖化血红蛋白实验室检测指南解读[J].中国糖尿病杂志，2013，21（8）：680-381.

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11 谢建红，张永良，肖奇志，等.应用高效液相色谱法检测β-地中海贫血及异常血红蛋白[J].广东医学，2011，32（11）：1473-1476.

12 Joutovsky A，Hadzi-Nesic J，Nardi MA.HPLC retention time as a diagnostic tool for hemoglobin variants and hemoglobinopathies：a study of 60000 samples in a clinical diagnostic laboratory[J].Clin Chem，2004，50（10）：1736-1747.