安宫牛黄丸对出血性中风大鼠的实验研究

摘要：目的研究安宫牛黄丸对出血性中风大鼠的影响。方法自发性高血压大鼠随机分为A组（空白对照组）、B组（模型组）、C组（西药治疗组）、D组（中药治疗组）、E组（中西结合治疗组），以自体血制作出血性中风大鼠模型，术后1 d、2 d、3 d分别进行神经功能(肌力测验、平衡木行走试验) 及血常规和凝血功能的测定。结果术后各组之间血常规、凝血功能差异无统计学意义（P>0.05），B组大鼠神经功能缺损较A组高（P

关键词：安宫牛黄丸 出血性中风 神经功能 凝血功能

中图分类号：R743.3R285.5文献标识码：A文章编号：1672-1349(2011)05-0574-03

Effect of Angong Niuhuang Pill on Hemorrhagic Stroke in Rats

Zhang Yunqiao，Liu Yuanxin // Xinjiang Medical University（Urumqi 830054）

Abstract:ObjectiveTo study the effect of Angong Niuhuang pill on hemorrhagic stroke in rats.MethodsOne hundred and thirty spontaneously hypertensive rats were randomly divided into five groups:Group A (blank control group)，group B (model group)，and group C (western medicine treatment group).group D (Chinese medicine treatment group)，group E (integrated Chinese medicine and western medicine treatment group).Rat models with hemorrhagic stroke were established by injecting of auto-non- anticoagulated artery blood into the caudate nucleus.Nerve function (beam-walking test and bilateral forepaws grasp) was tested at 24 hours，48 hours and 72 hours after operation.The blood routine test and coagulation function were also tested at 72 hours after operation.ResultsThere was no significant difference in aspect of the blood routine test and coagulation function between different groups after operation (P>0.05).Neurological deficit in Group B was higher than that in group A after operation (P

Key words:Angong Niuhuang pill；hemorrhagic stroke；nerve function；coagulation function

脑卒中因其起病急骤，证见多端，变化迅速，犹如自然界的风善行而数变，故在中医又称中风。对于中风的记载，始见于《黄帝内经》，出血性中风属现代医学概念，是在中医学中风病基础上的进一步延伸，深化了对其病理实质的了解。中医药干预出血性中风病的疗效已为多年的临床所证实，但是目前国内出血性中风的中医药研究多以临床研究为主，而具有重复性、随机对照的动物实验性研究较少，已成为阻碍中医出血性中风病规范化治疗的瓶颈。本研究通过在自发性高血压大鼠上建立出血性中风模型，观察安宫牛黄丸对急性期出血性中风大鼠的神经功能缺损、凝血功能、血常规等影响。

1材料与方法

1.1材料SPF级自发性高血压大鼠130只(雌雄各半)，体质量250 g~300 g，购自北京维通利华动物实验有限公司,合格证号：SCXK（京）2006-0009，安宫牛黄丸（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：8017018）、20%甘露醇（石家庄四药有限公司，批号：0803011）、呋塞米（天津药业集团有限公司，批号：0802182）、胞磷胆碱钠注射液（山东新时代药业有限公司 批号080301），大鼠脑立体定向仪（美国-ASI仪器公司），微量进样器（上海高鸽实验仪器公司）。AU-2700全自动生化分析仪（日本奥林巴斯公司），SYSMEX-XT-2000i型血细胞分析仪（日本希森美康公司），ACL TOP全自动血凝分析仪（美国）。

1.2方法

1.2.1分组与给药将130只自发性高血压大鼠按随机数字表法分为A组（空白对照组，10只）、B组（模型组，30只）、C组（西药治疗组，30只）、D组（中药治疗组，30只）、E组（中西结合治疗组，30只）。A组大鼠不予特殊处理，其余4组适应饲养7 d后制造出血性中风模型。6 h内B组给予生理盐水12 mL/kg灌胃；C组给予20%甘露醇注射液10 ml/kg、速尿1.5 mg/kg、胞二磷胆碱注射20 mg/kg尾部静脉注射；D组给予安宫牛黄丸（将1.134 g安宫牛黄丸加入54 mL水中溶解稀释）0.25 g/kg灌胃治疗；E组在C组基础上加用安宫牛黄丸0.25 g/kg灌胃。连续用药3 d,于第4天清晨处死。

1.2.2模型制作建立出血性中风大鼠模型,参照文献［1］方法，用氯胺酮、阿托品、安定按1∶1∶1稀释至10 mL，0.75 mL/100 g腹腔注射。根据图谱定位右侧尾壳核。用50 μL微量注射器从一侧股动脉插管中抽取新鲜未肝素化自体动脉血50 μL，将微量注射器固定于定位仪上，沿钻孔垂直进针至硬脑膜下5.5 mm处，缓慢将自体血注入脑。

1.2.3平衡木行走试验（beam-walking test）［2］术后1 d、2 d、3 d测定运动整合及协调能力，平衡木长80 cm，宽2.5 cm，平

1）为国家自然科学基金（No.30760315）

放在距离地面高10 cm处。按Feeney的记分标准，0分：穿过平衡木，不会跌倒；1分：穿过平衡木，跌倒机会少于50%；2分：穿过平衡木，跌倒机会大于50%；3分：能穿过平衡木，但受累的瘫痪侧后肢不能帮助向前移动；4分：不能穿过平衡木，但可坐在上面；5分：将大鼠放在平衡木上会掉下来。

1.2.4肌力测验或双侧前爪抓握（bilateral forepaws grasp）［3］术后1 d、2 d、3 d进行大鼠肌力测验，直径0.15 mm铁丝绳，长46 cm，置于距地面70 cm高度上，其下放高3.5 cm泡沫箱。将大鼠两个前爪放在绳上，放开，记录大鼠在绳上的时间。0分：挂在绳上0～2 s；1分：挂在绳上3 s～4 s;2分：挂在绳上5 s;3分：挂在绳上5 s，将后腿放在绳上。

1.2.5血液标本检测至实验终点时，将每只动物麻醉后取3份血样。一份取全血抗凝处理后用SYSMEX-XT-2000i型血细胞分析仪及配套试剂检测血常规，包括血红蛋白（Hb）、红细胞计数（RBC）、白细胞总数（WBC）以及血小板（PLT）。一份抗凝处理后，充分混匀，置离心机内3 000 r/min离心10 min,取上层血浆,置于ACL TOP全自动血凝分析仪中检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间（TT）和纤维蛋白(FIB)含量。另一份不抗凝分离血清，采用AU-2700全自动生化分析仪及配套试剂测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）。

1.2.6统计学处理采用SPSS 17.0软件分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示。若方差齐，则采用方差分析，若方差不齐，则采用Kruskal-Wallis检验，组间比较采用Mann-Whitney检验。

2结果

2.1各组大鼠死亡情况脑出血模型成功以神经功能评定明显对侧肢体感觉运动功能障碍为依据。空白对照组10只大鼠未予以造模处理，实验中途无死亡。至实验终点时，B组共有15只大鼠死亡,C组共有9只大鼠死亡，D组共有11只大鼠死亡，E组共有6只大鼠死亡。

2.2各组凝血功能、血常规、肝肾功能比较（见表1～表5）

3讨论

出血性中风发病急骤，病机变化多端，患者轻则口眼歪斜、半身不遂，重则神志逐渐昏迷，乃致死亡，出血性中风急性期多因风、火、痰浊、血瘀阻闭脑窍，以实证为主。既往中医药对出血性中风的研究介入时间点多在恢复期和后遗症期，而二级预防的最佳时机是出血性中风急性期。安宫牛黄丸属于中医凉开三宝之首,因其性最凉,故凡见病邪逆传心包或心包热较甚之证,首选安宫牛黄丸［4］。安宫牛黄丸与紫雪丹、至宝丹合为开窍三宝，是清心开窍法的代表方,在急性脑病救治中被广泛应用,体现了中医学在急重症领域中不可忽视的地位和不可替代的作用［5］。因此，探索安宫牛黄丸对于急性期出血性中风病的治疗具有重要意义。

安宫牛黄丸含有重金属汞砷，为其在临床广泛应用及出口带来一定的负面影响。近年来，多数学者对其毒性及机制探讨各抒己见。正常生理状态下较长时间服用安宫牛黄丸后，对心肌、肾、红细胞、脾等有一定的损伤作用，而在局灶性脑梗死及感染性脑水肿病理状态下安宫牛黄丸对机体的损伤作用比在正常生理状态下小，安宫牛黄丸在生理、病理状态下对机体的作用方式和途径可能存在差异。本实验结果显示,各治疗组与模型组大鼠通过药物干预后凝血功能(TT、APTT、FIB、PT)、血常规（WBC、RBC、HGB、PLT）肝肾功能（ALT、AST、Cr、BUN）与空白对照组相比均无明显差异，提示安宫牛黄丸并非通过上述途径影响脑出血大鼠，同时，也提示出血性中风大鼠使用安宫牛黄丸干预后，外周血红细胞、血红蛋白、白细胞、血小板以及凝血功能、肝肾功能检查未发现明显异常。说明安宫牛黄丸对急性出血性中风大鼠无明显不良反应。

平衡木试验是直接反映大鼠运动协调与整合能力的指标。双侧前爪抓握评分是评估前爪抓握力和肌力的一项指标。通过神经功能观察发现,各组大鼠造模后均出现不同的运动平衡功能障碍与肌力的减退，提示脑出血模型制造成功，造模后48 h、72 h安宫牛黄丸治疗组大鼠神经功能缺损明显低于模型组，而中西结合治疗组大鼠神经功能缺损则明显低于安宫牛黄丸及西药治疗组。提示安宫牛黄丸可以改善急性出血性中风大鼠神经功能，尤以与常规西药联用效果更佳，但其确切的作用机制还有待进一步研究。

参考文献：

［1］Rosenberg GA,Mun-Bryces,Wesley M,et al.Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats［Ｊ］.Stroke,1990,21:801-803.

［2］Altumbabic M,Peeling J,Bigio MRD,et al.Intracerebral hemorrhage in the rat:Effects of hematoma aspiration［Ｊ］.Stroke,1998,29:1917-1923.

［3］Dean RL,Scozafava J,Goas JA,et al.Age related differences in behavior across the life span of the C57BL/6J mouse［Ｊ］.Exp Aging Res,1981,7:427-451.

［4］邵雅斐.《温病条辨》中“凉开三宝”用法初探［Ｊ］.实用中医内科杂志,2008,22(5):14-15.

［5］宋乃光.《温病条辨》辛凉三剂、开窍三宝的组成与应用特点［Ｊ］.江西中医药，2008,40（3）：1-3.

作者简介：张云桥（1984―），男，现为新疆医科大学2008级中西医结合临床硕士研究生（邮编：830000）；刘远新（通讯作者），工作于新疆医科大学附属中医医院（邮编：830000）。

(收稿日期2011-02-22）