郑州地区2013～秋冬季腹泻婴幼儿轮状病毒VP7基因分型

[摘要] 目的 了解郑州地区秋冬季腹泻患儿轮状病毒（rotavirus，RV）G基因型。 方法 收集郑州市第一人民医院及郑州人民医院儿科门诊及住院部2013年9月～2014年3月患儿的粪便标本500份，采用胶体金法检测RV抗原，阳性标本进行基因分型。 结果 500份标本中，202份RV抗原阳性，阳性率为40.4%；阳性标本进行基因分型，G血清型以G1型（68.8%）为主要流行型别，其次为G3型（17.8%），G1和G3混合感染型（7.9%），G9型（1.5%）。 结论 郑州地区A组RV以G1P8型为主，有混合感染型。

[关键词] 轮状病毒；基因型；腹泻；婴幼儿

[中图分类号] R725.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）33-0045-03

自1973年澳大利亚学者Bishop等首次发现轮状病毒（Rotavirus，RV）以来，人们对RV的研究越来越深入。5岁以下的婴幼儿大部分感染过RV肠炎[1]。在发展中国家，小儿腹泻常常是婴幼儿死亡的主要原因，仅次于肺炎，排在第二位[2]。大约90%的RV感染相关死亡病例发生在亚洲和非洲的发展中国家[3]。我国每年有4万婴幼儿因RV性腹泻而死亡[4]。RV型别多，易变异，人群普遍易感。因此，不同地域RV流行特征明显不同，同一地区不同季节型别也不同，甚至同一地方同一种型别也可能存在多种毒株同时流行[5]。因此有必要建立广泛的RV监测网，动态监测RV流行株的变化，从而为疫苗研发提供数据支持。郑州属温带气候，是我国RV流行的代表性地区之一。为了解郑州地区秋冬季RV基因型别，为RV疫苗的研制以及临床应用提供依据，本研究收集郑州市第一人民医院及郑州人民医院儿科2013年9月～2014年3月500份门诊及住院部腹泻患儿的粪便标本，进行G基因型分型，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集2013年9月～2014年3月郑州市第一人民医院及郑州人民医院儿科门诊及住院腹泻患儿标本500份，其中女193例，男307例，年龄在5岁以下，具体临床诊断标准见参考文献[6]。

1.2 RV检测及提取试剂

胶体金法检测RV，使用小量柱离心式/液体样品RNA/DNA抽提试剂盒（购自上海华舜工程有限公司）提取RVRNA。

1.3 RV的G分型

RT-PCR分别扩增RV的VP7全长基因，net-PCR进行血清型分型。所用引物均有上海英骏生物基因工程股份有限公司合成，具体分型方法及引物见参考文献[7]。

1.4 统计学处理

采用SPSS17.0进行统计学分析，计数资料采用χ2检验及直接计数法，P

2 结果

2.1 轮状病毒感染的年龄和性别分布

通过ELISA方法检测结果显示：202份阳性标本中，男女性别无明显流行病学特征。轮状病毒感染患儿以6个月～1岁居多， 与其他年龄段比较，差异具有统计学意义（P

2.2 RVG血清型分型结果

对202阳性标本进行G基因分型研究，RVG血清型以G1型为主，并有不同的混合性感染病例。见表3。

3 讨论

目前国内外对于轮状病毒腹泻的研究较多。研究路线比较成熟。本研究对2013年9月～2014年3月郑州地区腹泻患儿进行监测RV阳性率为40.4%，与2005年10月～2006年10月阳性率相比51.97%[8]及2010年RV感染率50%相比有所下降[4]，低于国内其他地区如乌鲁木齐2007年RV感染率48.14%[9]、重庆地区2008年的50.69%[10]，与国内其他地区相比基本一致。

A组RV作为引起婴幼儿腹泻的主要病原体，主要感染人群为6个月～2岁的婴幼儿，随年龄增长感染比例下降，考虑可能为年龄增长儿童抵抗力增强有关。RV检出率在男性患儿和女性患儿之间国内报道各有区别。本研究显示RV阳性率在男女患儿之间无差异。

VP7为一种RV糖蛋白，是型特异性抗原，目前已有27个G血清型和35个P基因型被确定[11]。RV全球范围内最流行的组合为G1P8、G2P4、G3P8、G4P8、G9P8[12]。按照NCBI的分类标准VP7血清型有12个血清型（G1、G2、G3、G4、G5、G6、G8、G9、G10、G11、G12）和未能分型，其中5个（G1、G2、G3、G4、G9）型最为常见，且G9有增多趋势[13]，并发现不常见的G9、G10等型别的出现。高志勇等[14]监测北京地区2011年RV分子流行型别以G1+G9P8混合型为主。近年来河南省部分地区2005年、2006年、2010年郑州地区监测的流行株以G3为主相比流行株有所改变[4]。本研究发现2013年9月～2014年3月郑州地区RV基因分型以G1型为主，也有G9型的出现。目前国内也常有报道发现G9型轮状病毒。并逐渐成为继G1～G4之后第5种最为流行的血清型，本研究发现有混合感染株以及不常见的G9型，G9型较2010年比例有所增加，这是否与气候、环境变化以及样本量增多等因素有关，需要进一步研究。

RV腹泻的严重程度和RV血清型的相关性研究一直是个热点。2013年WHO在关于RV疫苗的意见书中提出RV的型别通常与疾病的严重程度无关。本课题研究发现在所有研究的RV分型中合并呼吸道感染的病例G9型居多，这是否与RVG9型易合并呼吸道感染有关还是与G9型毒力强有关，需要进一步的研究证实。

目前国际市场上销售的RV疫苗为默克公司研制生产并于2006年上市的RV5疫苗（5价牛-人重组疫苗），商品名RotaTeq，主要预防G1～G4血清型RV引起的胃肠炎以及葛兰素史克公司研制生产并于2008年上市的RV1疫苗（单价人RV疫苗），商品名Rotarix，主要预防由G1、G3、G4、G9导致的RV胃肠炎。在我国使用的是兰州生物制品研究所有限责任公司生产的羊RV疫苗，该疫苗于1998年取得国家认可并获准进行试生产，2001年获得国家食品药品监督管理局颁发的正式生产批件，投入使用安全有效。本研究还发现口服RV疫苗仍再次感染的情况，这说明RV疫苗的使用并不能完全起到预防作用。具体原因有可能是与RV具有分节段的基因组，极易发生基因重配和基因重组甚至点突变有关[15]。目前越来越多的RV的型别流行的研制给疫苗带来挑战，理想的RV疫苗应当有很广谱抗RV作用，且免疫性强无毒副作用。因此对RV流行病学的检测意义重大。

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（收稿日期：2015-05-04）