蛹虫草菌株发酵液和菌丝提取物的抑菌活性初探

摘要：研究蛹虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）的发酵液和菌丝提取物的抑菌效果，为蛹虫草抑菌活性物质的开发利用提供基础资料。采用滤纸柱、海绵柱和花泥柱３种方法检测其抑菌效果，结果表明蛹虫草发酵液及菌丝提取物对大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）和金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）均有一定抑制作用，其中菌丝提取物抑菌作用较强；对大肠杆菌的抑制强于对金黄色葡萄球菌的抑制。抑菌效果检测方法以滤纸柱法检测效果较好，花泥柱法次之，海绵柱法较差。

关键词：蛹虫草；抑菌；检测方法；发酵液；菌丝提取物

中图分类号：Ｓ５６７．３５；Ｑ９３９．９６ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）16－3492-04

Studies on Antibacterial Activities of Fermentation Broth and Mycelia Extraction of Cordyceps militaris

ＨＡＮ Ｙａｎ－ｆｅｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｙａｎ－Ｗｅｉ２，ＤＯＮＧ Ｘｕａｎ１，ＨＵＡＮＧ Ｙｕ1，ＬＩＡＮＧ Ｚｏｎｇ－ｑｉ1

（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｕｎｇｕｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５，China；

２． Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００１８，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ａｎｄ ｍｙｃｅｌｉａ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ ｄａｙｓ ｗｅｒｅ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ． For ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ， ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒ method ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ， ｆｏｌｌｏｗｅｄ by ｆｌｏｗｅｒ ｍｕｄ ｃｏｌｕｍｎ， ｔｈｅ ｗｏｒｓｔ ｗａｓ ｓｐｏｎｇｅ ｃｏｌｕｍｎ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｙｃｅｌｉａ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｂｏｔｈ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ stronger ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ； ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂｏｔｈ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｗａｓ stronger ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ； ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ； ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ； ｍｙｃｅｌｉａ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

蛹虫草又名北冬虫夏草，是我国名贵中药材冬虫夏草的代用品，含有多种生物活性物质［１，２］。蛹虫草为虫、菌结合体，其真菌也常被称为蛹虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）。研究发现，蛹虫草的子实体、菌丝体和发酵液中均有多种活性成分，能抑制部分细菌和真菌，对人体具有一定的保健功效，具有潜在应用前景［３－５］。一些关于蛹虫草的研究认为，蛹虫草的抗菌成分可能是虫草素［６，７］、多糖［８］、多肽［９］、酶类［１０］或酚类［１１］，具有抑菌作用可能是单一成分导致也有可能是多组分协同作用。刘阳等［１２］报道发酵液的抑菌效果是单一活性成分抑菌效果的２倍，表明蛹虫草中多种活性成分共同作用的抑菌效果好于单一活性成分的抑菌效果。但针对某一种微生物而言，其主要抑菌活性物质应该是一类或一种物质。

试验采用３种检测材料对蛹虫草菌丝提取物和发酵液进行抑菌效果检测比较，和常用的抑菌效果检测采用的滤纸片法和牛津杯法有所不同。同时比较不同发酵天数的蛹虫草发酵液和菌丝提取物的抑菌效果，以期为蛹虫草抑菌活性物质的开发利用提供基础资料。

１ 材料与方法

１．１ 供试菌株

蛹虫草ＧＺＵＩＦＲ－ＺＨ菌株、大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）为贵州大学真菌资源研究所微生物实验室保存。

１．２ 培养基

ＰＤＡ固体培养基：马铃薯２００ ｇ去皮切块，煮沸３０ ｍｉｎ后６层纱布过滤，加入葡萄糖、琼脂各２０ ｇ，水１ ０００ ｍＬ。１２１ ℃灭菌３０ ｍｉｎ。

蛹虫草液体发酵培养基：马铃薯２００ ｇ去皮切块，煮沸３０ ｍｉｎ后６层纱布过滤，加入葡萄糖２０ ｇ，水１ ０００ ｍＬ，分装至２５０ ｍＬ三角瓶中，每瓶装液１００ ｍＬ。１２１ ℃灭菌３０ ｍｉｎ。

牛肉膏蛋白胨固体培养基：牛肉膏３ ｇ，蛋白胨１０ ｇ，ＮａCｌ ５ ｇ，琼脂２０ ｇ，水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０～７．２。１２１ ℃灭菌３０ ｍｉｎ。

细菌培养液：牛肉膏３ ｇ，蛋白胨１０ ｇ，ＮａCｌ ５ ｇ，水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０～７．２。１２１ ℃灭菌３０ ｍｉｎ。

１．３ 试验方法

１．３．１ 母液培养与发酵 蛹虫草菌种活化后，从ＰＤＡ斜面试管中挑取适当大小的菌块，接种至液体发酵培养基中，１７０ ｒ／ｍｉｎ ２５ ℃摇床培养，待母液孢子数达到１０６个／ｍＬ时用移液枪吸取母液转接至新的液体发酵培养基中，接种量每瓶１ ｍＬ，１７０ ｒ／ｍｉｎ ２５ ℃摇床培养，液体发酵培养周期为１０ ｄ。