时间：2022-06-27 09:14:19
摘要：目的：建立测定复方心康宁胶囊中野黄芩苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件：4.6mm×250mm不镑钢柱，填料为十八烷基硅烷键合硅胶(5μm)；流动相为乙腈-0.1％磷酸(25：75)；检测波长为335nm；流速为1mL/min；柱温35％。结果：野黄芩苷在进样量为0.171～0.685μg，呈良好的线性关系。回归方程为Y=689.87X-3.4049，相关系数r=0.9998，相对回收率为98.7％，相对标准偏差RSD=1.292％。结论：本方法简便，重现性好，精密度高，测定结果准可靠，具有可行性，可作为该制剂质量控制方法。
关键词：复方心康宁胶囊；野黄芩苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284
文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)12-2642-02
复方心康宁胶囊是正在研制开发的复方中药制剂，临床上主要是用于治疗冠心病、心绞痛、脑血栓、脑梗塞所致的瘫痪等疾病。方中灯盏细辛具有活血化瘀、解表止痛、消积解毒等功效，故灯盏细辛为方中君药。灯盏细辛产于云南、广西等地，为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草。灯盏细辛中主要成分野黄芩苷(Seutellarin，化学结构为4，5，6-三羟基黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷)是黄酮类成分，药理实验表明具有降低血管阻力，增加脑血流量，改善心肌供血，增加心收缩力，改善微循环，扩张血管及微细动脉，降低血黏度，减低纤维蛋白原，增进冠脉血液量，改善缺血、缺氧作用。 灯盏细辛中野黄芩苷为活性成分，本试验采用高效液相法对灯盏细辛中野黄芩苷进行含量测定，并进行了方法学考察，结果表明该方法能够准确、快速地测定野黄芩苷的含量，达到控制药品质量的目的。
1.仪器与实验材料
1.1仪器 LC-10AVP高效液相色谱仪(岛津)；10680泵；CLASS-VP5.02色谱工作站；SPD-10AVP检测器。
1.2材料 药品：复方心康宁胶囊，自制，200mg/粒。药材：灯盏细辛，产地：云南。试剂：乙腈(色谱纯)，磷酸(分析纯)，甲醇(色谱纯)，纯净水。对照品：野黄芩苷对照品购自中国生物制品检定所。含量：98.O％以上。
2.方法与结果
2.1色谱条件 色谱柱：4.6×250mm不锈钢柱，填料为十八烷基硅烷键合硅胶(5μm)。流动相：乙腈-0.1％磷酸(25：75)。流速：1mL/min。进样量：10μL。检测波长：335nm。柱温：35℃。
2.2对照品与供试品溶液的制备 对照品溶液：精密称取干燥至恒重的野黄芩苷对照品8.58mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取4mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(0.034mg/mL)。见图1。
供试品溶液：取本品装量差异检查项下的胶囊内容物约200mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min，放冷后加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。见图2。
阴性溶液：按处方制备灯盏细辛缺味制剂，照供试品溶液项下处理，作为阴性对照溶液，阴性无干扰。
2.3线性关系 精密称取野黄芩苷对照品8.58mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别量取2、3、4、5、6、7、8mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成不同浓度的对照品溶液。
分别量取上述溶液各10μL，注入液相色谱仪，测出峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线，回归方程为Y=689.87X-3.4049，相关系数r=0.9998。表明野黄芩苷在进样量为0.171～0.685μg，呈良好的线性关系。
2.4精密度试验 取050910批胶囊内容物约200mg，精密称定，按供试品制备方法制备。重复进样5次，测定峰面积，计算RSD=1.021％。结果显示精密度良好。
2.5稳定性试验 取050910批样品，按供试品溶液制备方法制备，分别在配制后0、2、4、6、8、10h进样，计算RSD=1.028％，结果表明样品在10h内稳定。
2.6重现性试验 精密称取050910批样品5份，按供试品溶液制备方法制备，进行测定，计算RSD=1.107％。结果表明重现性良好。
2.7 回收率试验 取050910批样品5份，每份称取100mg，精密称定，分别置100mL容量瓶中，分别加入适量对照品，按供试品溶液制备方法制备，各取10μL进样，测得平均回收率为98.7％，RSD=1.292％。结果显示回收率符合要求。
2.8样品含量测定 供试品溶液的制备，取供试品胶囊10粒，倾出内容物，混匀。称取200mg，精密称定，按供试品溶液制备方法制备。取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，记录峰面积，计算含量。结果见表1。
3.讨论
3.1流动相的选择 根据文献报道，野黄芩苷的含量测定多采用甲醇一水系统作为流动相，但在实际操作中，主峰与杂质峰不能完全分离，因此改用乙腈-水系统，即可达到峰的分离，野黄芩苷与杂质峰的分离度大于1.5，但峰形欠佳，出现拖尾，故加入磷酸矫正，最终确定用乙腈-0.1％磷酸作为流动相。
3.2样品提取方法的选择 根据野黄芩苷的性质，选择甲醇作为提取溶剂。曾经参照药典中测定药材中野黄芩苷的方法，采用索氏提取器提取，先加三氯甲烷回流提取，除去部分脂溶性成分，再用甲醇回流提取，此方法操作繁琐，耗时长，后经研究发现，采用甲醇超声提取的效果较好，操作简单，提取充分，测定结果准确、可靠，故采用此法。
3.3结论 本试验建立的复方心康宁胶囊中野黄芩苷含量的测定方法，重现性较好，分离度好，精密度高，测定结果准确可靠，具有可行性，可作为该制剂质量控制方法。