VEGF、Ets-1在骨巨细胞瘤中的表达及意义

[摘要] 目的：观察骨巨细胞瘤（GCT）中血管内皮生长因子（vascular endothelium growth factor, VEGF）、转录调控因子（Ets-1）的表达，探讨其临床意义，并作相关性研究。方法：30例骨巨细胞瘤标本分别按照Jaffe病理分级、临床分期、有无复发进行分组。应用S-P免疫组化方法检测标本组中的VEGF和Ets-1的表达。结果：30例标本中复发10例，复发率为33.3%，VEGF和Ets-1在GCT中的阳性表达率分别为70%（21/30）和36.7%（11/30），Ets-1和VEGF在临床分期及预后各组中的表达差异有统计学意义（P0.05）。结论：VEGF和Ets-1在GCT中的表达与GCT的临床分期和复发有关，有助于评估肿瘤的预后。

[关键词] 骨巨细胞瘤；免疫组化；VEGF；Ets-1

[中图分类号] R738.1[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2009）03（a）-014-03

Expression and significance of VEGF and Ets-1 in giant cell tumor of bone

ZHANG Yu, LU Zhi*, LIU Xiao-li, LEI Lei, HAN Peng-fei

(Department of Orthopaedics, the Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan030001, China)

[Abstract] Objective: To explore the expression of vascular endothelium growth factor and Ets-1 in giant cell tumor of bone. Methods: 30 specimens were divided according to staging system and Jaffe pathological gradation of GCT and whether recurred or metastasized. VEGF and Ets-1 protein from tumor specimen were examined by immunohistochemistry S-P technique. Results: The level of the expression of VEGF and Ets-1 in giant cell tumor of bone was 70% (21/30) and 36.7% (11/30) respectively, the positive expression of VEGF and Ets-1 was relevant to the clinical stages and prognosis (P0.05). Conclusion: Expression of Ets-1 and VEGF in GCT is highly related to clinical stages and Prognosis but not to its pathological gradation.

[Key words] Giant cell tumor of bone; Immunohistochemistry; VEGF; Ets-1

骨巨细胞瘤（giant cell tumor of bone, GCT）是一种潜在的恶性或介于良恶性之间的溶骨性肿瘤，术后复发率可达50％以上，1％～6％的患者可以发生肺转移[1]，少数患者甚至可发生肉瘤变，能否正确评估GCT的生物学行为将直接影响临床的治疗方式和效果。传统的评估标准包括Jaffe（1940）的组织学分级、Campanicci（1975）的影像学分级以及Enneking（1980）临床分期。近几年，许多与肿瘤相关的酶、细胞因子、受体、基因及其表达物等被发现和认识，并且被广泛应用到GCT的生物学行为研究中，从而为发现新指标，确立新标准，更为客观、准确地评价和预测GCT的生物学行为开拓了广阔的空间。我们检测骨巨细胞瘤中血管内皮生长因子（vascular endothelium growth factor, VEGF）和Ets-1的表达，并探讨其与预后及临床的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

选取我院病理科2001～2007年经手术切除的骨巨细胞瘤标本30例，所有标本均经10％甲醛固定、石蜡包埋。患者年龄19～60岁，男14例，女16例。病理分级Ⅰ～Ⅱ级9例，Ⅲ级21例；临床分期皮质完整14例，皮质不完整16例；术后复发10例，无复发20例。

1.2 免疫组化

一抗是鼠抗人VEGF单克隆抗体（北京中杉金桥生物技术公司）和鼠抗人Ets-1单克隆抗体及S-P试剂盒（福建迈新生物技术公司），所有试剂均为即用型，采用S-P免疫组织化学技术。

1.3 阳性结果判定

以PBS液置换一抗作为阴性对照，试剂盒中阳性片作为阳性对照。以细胞核和（或）细胞质出现棕黄色或黄色颗粒为阳性，采用双盲法，每张切片随机选取10个高倍视野计数阳性细胞和阴性细胞，根据两方面进行判断，A：以阳性细胞占视野细胞总数的多少分级，0：无阳性细胞；1：阳性细胞数50%。B：按阳性细胞反应物强弱分级，0：无色；1：弱，淡黄色；2：中等，棕黄色；3：强，棕褐色。按A、B的数值相加判断结果，0为阴性；≥1为阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0统计学软件进行处理，各组间比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 VEGF在骨巨细胞瘤中的表达

主要表达于单核间质细胞和多核巨细胞，及部分血管内皮细胞，定位在胞质，部分亦表达于细胞膜。在30例骨巨细胞瘤中阳性表达21例，总阳性率为70%（21/30），其中临床分期及预后各组中均存在显著性差异（P0.05），见表1。

2.2 Ets-1在骨巨细胞瘤中的表达

Ets-1在骨巨细胞瘤多核巨细胞及单核间质细胞中均有阳性表达，着色定位于细胞核。30例骨巨细胞瘤标本中，阳性11例，总阳性率为36.7%（11/30）。在临床分期和预后各组中表达差异有统计学意义（P＜0.05），而在病理分级各组中表达差异无显著性，见表1。

3 讨论

骨巨细胞瘤是常见的原发肿瘤之一，严重威胁人类的身心健康，目前对骨巨细胞瘤患者的治疗主要是手术治疗，以局部刮除加残腔植骨术为主，但术后容易复发，复发率高达20%～50%。复发后势必要采取更为积极的手术治疗，包括更广泛的刮除或瘤段切除甚至截肢等，患者的肢体功能受到很大损伤，且多次复发的患者会增加恶变和肺转移的几率，给患者造成很大的心理和身体上的负担，国内外许多学者现在正积极探索更新的治疗方法。本研究采用免疫组化法对骨巨细胞瘤中VEGF和Ets-1的表达进行检测，并结合病理分级和临床分期及预后进行统计学分析，以期探索影响骨巨细胞瘤预后的相关生物学指标和新的治疗方法。

近年来，肿瘤领域内研究的重大进展之一是确立肿瘤血管生成在肿瘤发展中的重要地位[2]。血管内皮生长因子VEGF是已知肿瘤血管生成中最重要的诱发因子，与肿瘤侵袭性生长和转移等恶性生物学行为密切相关。多数研究证明，VEGF及其受体的过度表达与肿瘤生长、侵袭及转移关系密切[3,4]。以VEGF及其受体作为相对特异性肿瘤血管生成标志物，抑制其表达或阻断其效应将为肿瘤的临床治疗提供一条新途径。本实验结果表明，VEGF在临床分期各组及预后各组中均为高表达，且在此二组中表达差异有统计学意义（P

Ets转录调控因子家族在胚胎发育、组织成熟和指导时期特异性及组织特异性基因表达的过程中发挥着重要作用。Ets-1位于染色体11q23～24的位置，编码分子量为54 kD的蛋白质，其激活机制可能主要为扩增、染色体易位和重排。Ets-1能够调节一系列与细胞外基质重建有关的基因表达，如尿激酶型纤维蛋白、溶酶原活化物（upa）、基质金属蛋白酶（mmp-1、-3、-9）、整合素β-2等，这些物质可通过降解细胞外基质，使肿瘤细胞的黏附性降低并易于游走，有利于肿瘤的浸润生长、复发和转移[5]。本实验结果显示，Ets-1在骨巨细胞瘤复发组阳性率（80%）明显高于初发组（15%）。在临床分期各组中，Ets-1阳性率在皮质突破组（56.2%）也高于皮质完整组（14.3%）。Ets-1在骨巨细胞瘤多核巨细胞核和单核间质细胞核中均有阳性表达，而且其阳性表达在除病理分级组外的各组间均存在显著性差异，说明Ets-1可能与GCT的复发和进展有关。

综上所述，VEGF和Ets-1在骨巨细胞瘤的发生及发展中占据有重要的地位，而且二者对判断骨巨细胞瘤患者的预后有一定的指导意义，可能为骨巨细胞瘤的治疗提供一条新的途径。

[参考文献]

[1]Siebenrock KA, Unni KK, Rock MG. Giant cell tumor of bone metastasizing to the lungs [J]. J Bone Jiont Surg,1998,80B(1):43-47．

[2]Barinaga M. Designing therapies that target tumor blood vessels [J]. Science,1997,275(5299):482-484.

[3]何家才,阮敏,王元银,等.血管内皮生长因子和微血管密度在口腔鳞癌中的表达[J].安徽医科大学学报,2006,41(1):41-43.

[4]Britvin TA, Kazantseva IA, Kalinin AP, et al. Vascular endothelium growth factor in the sera of patients with adrenal tumors [J]. Bull Exp Biol Med,2005,140(2):228-30.

[5]Rutter JL, MitchellI TI, Buttice G, et al. A single nucleotide polymorphism in the matrix metalloproteinase-1 promoter creates an Ets binging site and sugments transcription [J]. Cancer Res,1998,58(23):5321-5325．

（收稿日期：2008-11-24）