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[摘要] 目的 血管内皮生长因子-C(VEGF-C)倾向于扩散至淋巴系统,被认为是最具特异性的淋巴管生成调控因子。本研究旨在探讨VEGF-C在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。 方法 采用免疫组化检测70例非小细胞肺癌标本中VEGF-C的表达,以癌旁组织19例、正常肺组织20例为对照。 结果 VEGF-C在NSCLC中的阳性表达率为78.6%,明显高于在癌旁组织和正常肺组织的表达;淋巴结转移组的肺癌标本中VEGF-C阳性表达率明显高于在无淋巴结转移组肺癌中表达率;低分化组的肺癌标本中VEGF-C阳性表达率高于在中高分化组中表达率。Logistic回归分析显示肿瘤组织分化程度是VEGF-C蛋白阳性表达影响因素。 结论 VEGF-C在肺癌中有较高的表达率,且与淋巴结转移密切相关,提示VEGF-C与肺癌的发生、侵袭和转移存在相关性,可作为评估肺癌进展客观指标及预测肺癌淋巴转移的标志物。
[关键词] 肺肿瘤;免疫组织化学;血管内皮生长因子-C
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)32-0051-03
目前在世界范围内,肺癌已成为癌症死亡的主要原因,严重危害人类健康和生命[1]。肺癌死亡率仍高居癌症死亡第一位,远处转移是治疗失败的主要原因。肿瘤细胞侵袭和转移严重影响患者预后,然而肿瘤的这种生物学特性仍是研究难题。VEGF-C作为fms样酪氨酸激酶4的配体,倾向于扩散至淋巴系统,被认为是最具特异性的淋巴管生成调控因子。本研究采用免疫组化检测非小细胞肺癌组织及正常组织中VEGF-C表达,分析其在NSCLC中的表达及临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象
选取浙江省台州医院2004~2007年70例NSCLC患者住院行肺癌根治术标本,男52例,女18例,年龄35~80岁;所有病例术前均未接受化疗或放疗。标本按WHO肺癌病理组织学分型:腺癌34例,鳞癌36例;组织分化程度:低分化27例,高中分化43例;无淋巴结转移33例,淋巴结转移37例。肿瘤TNM分期:T1期18例,T2期41例,T3期9例,T4期2例。N分期:N0期33例,N1期28例,N2期9例。另取距肿块边缘1.5 cm的癌旁组织19例,距肿块边缘5 cm正常肺组织20例。
1.2 实验试剂与方法
兔抗人VEGF-C多克隆抗体购于美国INVITROGEN公司,Envision免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购于北京中杉生物公司。操作按试剂盒说明书进行,采用免疫组化Envision两步法,用高压热修复法,以已知阳性切片作阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 分级标准
染色强度及细胞阳性范围作为分级标准。细胞浆染色强度计分:无着色为0分,淡黄染色为1分,棕黄色为2分,棕褐色/胞浆内棕黑色颗粒为3分;细胞阳性范围计分:75%为4分;再将染色强度与阳性细胞率作乘积分级:>3分为(+),6~9分为(++),9~12分为(+++),凡(+)及其以上者为阳性表达[2]。
1.4 统计学方法
采用统计学软件SPSS 17.0进行χ2检验或四格表确切概率法,回归分析采用Logistic回归,P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 VEGF-C染色结果
VEGF-C在不同肺组织中的表达见图1。VEGF-C阳性染色为黄色、棕黄色、棕褐色,定位于细胞浆和/或膜上。VEGF-C在NSCLC中的阳性表达率为78.6%(55/70),在癌旁组织以及正常肺组织中的阳性表达率分别为31.6%(6/19)、10.0%(2/20),组间差异有统计学意义(表1)。
2.2 VEGF-C的表达与NSCLC临床病理特征的关系
VEGF-C在淋巴结转移组中阳性表达率为89.2%;无淋巴结转移组VEGF-C的阳性表达率为66.7%%;组间差异具有统计学意义。中高分化组和差分化组组间VEGF-C的阳性表达率分别为69.8%、92.6%,组间差异具有统计学意义;VEGF-C在肺鳞癌和肺腺癌中阳性表达率分别为66.7%、91.2%,组间差异具有统计学意义。VEGF-C在肿块直径≤3 cm的癌标本中阳性表达率为63.2%,在肿块直径>3 cm的癌标本中阳性表达率为84.3%,组间差异无统计学意义;VEGF-C在男性/女性患者的阳性表达率分别为80.8%和72.2%,差异无统计学意义;在>55岁或≤55岁的患者中,VEGF-C的阳性表达率分别为82.6%和70.8%,差异无统计学意义;VEGF-C在吸烟者和不吸烟者中阳性表达率分别为81.3%、72.7%,差异无统计学意义(表2)。
2.3 VEGF-C表达与NSCLC临床病理特征Logistic回归分析
见表3。
将VEGF-C表达与各临床病理特征进行Logistic回归分析,全变量模型分析显示组织学分化程度入选回归方程(B=2.487,Exp(B)=12.030),对VEGF-C蛋白表达的影响具有统计学意义。采用向前逐步回归模型(选入变量P ≤ 0.05,剔除变量P > 0.10)分析,组织学分化程度和肿瘤大小两个变量入选回归方程,对VEGF-C蛋白表达的影响具有统计学意义,Exp(B)分别为11.797、0.663,详见表4。提示肿瘤的分化程度越低,肿瘤细胞表达VEGF-C水平越高;肿瘤大小的P < 0.05,但Exp(B)值靠近1,提示肿瘤大小与VEGF-C的表达可能无关。
3 讨论
肺癌是严重危害人类生命和健康的常见疾病,发病率和死亡率逐年上升,而非小细胞肺癌为最常见的病理类型,占肺癌的80%。肺癌患者术后常出现远处转移,成为影响患者预后主要因素[3]。肿瘤生长依赖于新生脉管的形成,肿瘤血管、淋巴管生成及侵袭是肿瘤转移的必要条件。淋巴转移是肺癌较为常见转移途径,随着淋巴内皮细胞标志物的发现,淋巴转移机制成为目前研究热点。
VEGF-C作为VEGF的家族成员,研究认为与肿瘤淋巴管生成、生长和转移密切相关,能增强肿瘤的淋巴管生成及侵袭能力,目前被认为是最具特异性的淋巴管生成调控因子。VEGF-C可与其受体VEGFR-3结合促进肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤细胞凋亡并改变淋巴管生理特性。Liu等[4]研究发现VEGF-C在mRNA及蛋白水平的表达与VEGFR-3的表达密切相关,促进外周新生淋巴管的生成。研究证实VEGF-C可以选择性地诱导淋巴细胞存活,促进瘤周及瘤内形成新的淋巴管,参与淋巴管的形成以及肿瘤淋巴转移。Veikkola等[5]通过转基因小鼠研究证实VEGF-C和VEGF-D与其配体VEGFR-3结合,启动VEGF-C/VEGF-D-VEGFR-3信号通路,使得皮肤淋巴管增殖,而且在功能上新生的淋巴管与正常淋巴管具有相似性。
正常人体组织中,VEGF-C主要在成人的呼吸道及消化道黏膜的内分泌细胞中有少量表达。目前研究证实诸如口腔癌、消化道肿瘤、肺癌、肾脏肿瘤、部分肉瘤、黑色素瘤、白血病细胞及乳腺癌组织等多种具有侵袭性的肿瘤组织细胞中存在VEGF-C表达。
研究发现Ⅰ期NSCLC中VEGF-C的阳性表达促进淋巴结微转移形成。在肺腺癌中VEGF-C的mRNA水平在淋巴结转移阳性组呈现升高的趋势。Ko等[6]研究报道VEGF-C在肺癌组织标本中阳性率为76.0%,且认为VEGF-C的阳性表达水平与患者淋巴结转移及不良预后呈正相关。Li Q等[7]报道同样认为肺癌中VEGF-C表达促使淋巴管新生,其表达水平与患者淋巴结转移密切相关,可作为肺癌进展客观指标及预测肺癌淋巴转移的标志物。Ishii等[8]实验表明高表达VEGF-C/VEGF-D的肺癌细胞株TKBS接种的裸鼠体内局部淋巴结的转移发生率远高于正常对照组。
本实验结果显示NSCLC和癌旁组织、正常肺组织的VEGF-C的阳性表达率分别为78.6%、31.6%、10.0%,其检验差异明显,提示VEGF-C在NSCLC发生、发展过程中可能起着重要作用。根据单因素分析,VEGF-C在肺腺癌中的表达明显高于肺鳞癌中表达,这与Ko等报道相一致。本研究中发现淋巴结转移组中VEGF-C的表达明显高于无淋巴结转移组中的表达,表明VEGF-C介导着肿瘤细胞淋巴转移,在淋巴转移途径中发挥重要作用。国内代学利等[9]的研究发现VEGF-C在肺腺癌病灶表达率(71.2%)明显高于在肺鳞癌组(41.0%),腺癌病灶新生淋巴管密度(6.20±3.81)个明显高于鳞癌组(3.95±3.18)个。结合本研究及临床,这可能与肺腺癌极易早期出现远处转移相关。单因素分析发现VEGF-C阳性表达与患者性别、年龄、肿块大小、吸烟情况无统计学意义。本研究进一步采用了Logistic回归分析,分析VEGF-C的表达与各临床病理因素的相关性。结果表明在肿瘤组织分化程度间VEGF-C差异明显,肿瘤组织分化程度是VEGF-C蛋白阳性表达的影响因素,分化程度越低,肿瘤细胞表达VEGF-C水平越高,说明VEGF-C与较高的恶性生物学行为有关。
上述研究结果表明,VEGF-C在NSCLC的发生发展中发挥重要作用,且与淋巴结转移密切相关,提示VEGF-C可作为评估肺癌侵袭、转移客观指标。
[参考文献]
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(收稿日期:2012-08-22)