榕树叶总黄酮超声提取工艺条件的研究

200025，上海市，中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

【摘要】 目的为充分利用榕树叶资源，研究超声提取榕树叶总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮含量为考察指标，采用正交设计的方法研究超声波辅助提取榕树叶总黄酮的工艺条件。结果影响榕树叶总黄酮超声提取效果的主次因素为：乙醇浓度>溶剂量>提取次数>超声时间，榕树叶总黄酮最佳提取工艺为16倍量70%乙醇超声提取3次，40 min/次。 结论优化的提取方法效率高，稳定性好，提取总黄酮含量可达2.42%。 本文由权威期刊收集整理。

【关键词】 榕树叶 总黄酮 正交设计 超声波

榕树（Banyan）叶为桑科榕属植物榕树Ficus microcarpa L.f.的叶，为广西壮族民间常用药，有清热、解表、化湿、活血散瘀的功效，常用于治疗流行性感冒、疟疾、急性肠炎、跌打损伤等疾病。榕树叶中主要含黄酮苷、香豆精等化学成分[1]。近年来对黄酮类化合物的药理作用有较多研究，发现其具有抗心脑血管病、抗氧化、镇痛、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用[2，3]。研究表明可用超声波提取榕树叶总黄酮[4]，但未见对其提取条件优化的研究。为进一步研究榕树叶总黄酮的功效，充分利用榕树叶资源，本实验以总黄酮含量为考察指标，采用正交实验的方法对超声波辅助提取榕树叶总黄酮的工艺条件进行了研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器SG3300H超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）；UV-2500分光光度计（日本岛津）；SHBⅢ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；ZFQ85A旋转蒸发仪（上海医械专机厂）。

1.2 试剂芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；榕树叶（采自广西药用植物园）；95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等皆为分析纯。

2 方法与结果

2.1 榕树叶总黄酮的提取取新鲜榕树叶，烘干，粉碎，准确称取榕树叶粉5 g，置于250 ml锥形瓶中，按要求加入一定量的提取剂，超声波提取一定时间，抽滤，减压回收溶剂，定容于50 ml容量瓶中， 作为待测液。

2.2 标准曲线绘制精密称取干燥芦丁对照品20 mg，置100 ml容量瓶中，60%乙醇溶解，定容，得标准对照液（含无水芦丁0.200 0 g/L）。分别精密移取芦丁对照液0，1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 ml置25 ml容量瓶中， 分别加入50g/L亚硝酸钠溶液0.75 ml，摇匀，静置6 min；再加100 g/L硝酸铝溶液0.75 ml，摇匀，静置6 min；再加40 g/L氢氧化钠溶液10 ml，60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以第1瓶溶液为空白调零，取第3瓶溶液进行全波长扫描，测得510 nm处有最大吸收，因此于510nm测各瓶溶液吸光度；以浓度（C）与吸光度（A）进行线性回归，得方程为：A = 9.975 4C - 0.003 5，r = 0.998 9。

2.3 样品含量测定取“2.1”项中待测液1 ml于25 ml容量瓶中，从分别加入50 g/L亚硝酸钠溶液起同“2.2”项下操作，510 nm处测定吸光度，根据回归方程计算各样品榕树叶总黄酮含量。

总黄酮含量（%）=总黄酮量/干药材量×100%

2.4 单因素实验由于乙醇作为提取溶剂具有选择性好，渗透性强，浸出率较高的优点，因此本实验选择一定浓度的乙醇溶液作为提取剂，并分别考察了溶剂浓度、溶剂用量、浸泡时间、超声波萃取时间及萃取次数等因素对提取率的影响。

2.4.1 溶剂浸泡时间对提取率的影响各取5 g样品，分别加入60%乙醇50 ml，浸泡0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5 h，超声波提取30 min，抽滤，定容至50 ml，按“2.3”项下方法制备样品，测510 nm吸光度值，由回归方程计算得各样品总黄酮含量。结果见表1，图1。从结果可见，样品浸泡1 h以上已达到浸泡完全，提取所得总黄酮含量基本一致。表1 溶剂浸泡时间与总黄酮含量的关系（略）

2.4.2 乙醇浓度对提取率的影响各取5 g样品，分别加入50 ml不同体积分数的乙醇（30%，40%，50%，60%，70%，80%，95%），浸泡1 h，超声波提取30 min，抽滤，定容至50 ml，测510 nm吸光度值，计算总黄酮含量。结果见表2及图2。从结果可见，60%～80%体积分数的乙醇对榕转贴于权威期刊 http：//树叶总黄酮提取率均较高，其中以70%乙醇最佳。表2 乙醇浓度与总黄酮含量的关系（略）

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2.4.3 溶剂用量对提取率的影响各取5 g样品，分别加入70%乙醇10，12，14，16，18倍体积，浸泡1 h后，超声波辅助提取30 min，抽滤，减压回收溶剂，定容至50 ml，测510 nm吸光度值，计算总黄酮量。结果见表3，图3。从结果可见，从10～14倍体积溶剂提取率呈上升趋势，14倍以上各体积溶剂提取所得总黄酮量相差不大，从节约溶剂考虑，可用14倍体积溶剂提取。表3 溶剂用量与总黄酮含量的关系（略）本文由权威期刊收集整理。

2.4.4 超声波提取时间对提取率的影响各取5 g样品，分别加入70%乙醇70 ml，浸泡1 h后，超声波提取10，20，30，40，50 min，抽滤，减压回收溶剂，定容至50 ml，测510 nm吸光度值，计算总黄酮量。结果见表4及图4。从结果可见，30 min为最佳提取时间。表4 超声时间与总黄酮含量的关系（略）

2.4.5 超声波提取次数对提取率的影响各取5 g样品，加入70%乙醇70 ml，浸泡1 h后，超声波辅助提取30 min，分别提取2，3，4，5，6次，抽滤，合并同一样品提取液，减压回收溶剂，定容至50ml，测510 nm吸光度值，计算总黄酮含量。结果见表5及图5。从结果可见，3次提取已达到最佳。表5 超声次数与总黄酮含量的关系（略）

2.5 正交设计根据单因素实验结果，选择溶剂浓度、溶剂用量、超声波辅助提取时间、提取次数4个因素进行正交设计，选用L9（34）正交表，因素水平见表6。表6 正交设计因素水平表（略）

按表7所列各工艺制备样品，加乙醇后均浸泡1 h后超声提取，提取液定容至50 ml，测510 nm吸光度值，计算总黄酮量。结果见表7，方差分析见表8。由分析结果可知影响总黄酮提取的主次因素依次为乙醇浓度>溶剂量>提取次数>超声时间；其中乙醇浓度对提取率的影响有显著性差异；提取的最佳方案为A2B3C3D2，即16倍量70%乙醇超声提取3次，40 min/次。表7 正交实验方案及结果分析（略）

按照此最佳方案进行了3批原料的提取，所得总黄酮含量分别为2.37%，2.49%，2.40%；平均为2.42%，优于正交实验中提取率最高的A2B2C3D1（2.19%）。表8 方差分析（略）

3 结论

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榕树叶为广西壮族民间常用药，总黄酮是其主要有效成分。经单因素实验及正交设计的直观分析和方差分析发现，影响榕树叶总黄酮超声提取的主次因素依次为乙醇浓度>溶剂量>提取次数>超声时间；最佳提取方案为A2B3C3D2，即16倍量70%乙醇超声提取3次，40 min/次。

在最佳提取条件下进行了3批原料的提取，所得总黄酮含量平均为2.42%。说明本方法提取效率高，稳定性好。

【参考文献】

[1]朱华.中国壮药志[M].南宁：广西民族出版社，2003：363.

[2]曹纬国，刘志勤，邵 云，等.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].西北植物学报，2003，23（12）：2241.

[3]陈志武，黄酮类化合物药理作用研究进展[J].中国中药杂志，2000，25 （10）：589.

[4]黄锁义，刘海花，黎海妮，超声波提取榕树叶（小叶）总黄酮及鉴别[J].时珍国医国药，2006，17（9）：1737.