山银花(灰毡毛忍冬)适宜采收期研究

[收稿日期] 2014-01-24

[基金项目] 重庆市科技惠民项目（CSTC2013jcsf1009）；重庆市卫生局中医药科技项目（ZY20132070）；四川省科技成果转化项目（2013SC0021）；科技部科技惠民项目（2013GS500102）

[通信作者] *李隆云，研究员，主要从事中药材种植与质量评价研究，Tel：（023）89029118，E-mail：

[摘要] 为了确定山银花（灰毡毛忍冬）的适宜采收期，测定不同发育时期的花蕾外观形态、产量和质量，比较一日内不同时段采摘花蕾的质量。结果表明，开花型和花蕾型灰毡毛忍冬不同发育阶段的花蕾外观形态具有较大的差异；随着花蕾发育，产量逐渐增加；开花型灰毡毛忍冬花蕾开放后（银花期、金花期）绿原酸含量极显著降低，开花前（幼蕾期、青色期、大白期）质量无显著差异；花蕾型灰毡毛忍冬黄白期灰毡毛忍冬皂苷乙显著降低，幼蕾期和青白期质量无显著差异。一日内不同时段采摘的灰毡毛忍冬绿原酸和3，5-二咖啡酰奎宁酸含量有显著差异。开花型灰毡毛忍冬的适宜采收期为大白期，采摘时段为10：00以前和18：00以后，花蕾型灰毡毛忍冬的适宜采收期为青白期，采摘时段为8：00以前和18：00以后。

[关键词] 灰毡毛忍冬；采收期；产量；绿原酸；3，5-二咖啡酰奎宁酸；灰毡毛忍冬皂苷乙；川续断皂苷乙

灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides是我国重要大宗药材山银花的基原植物之一，花蕾含有有机酸、黄酮类、皂苷类等化学成分，具有清热解毒，凉散风寒的功效，社会需求量极高[1-2]。灰毡毛忍冬生态适应性强、产量高、绿原酸和皂苷等活性成分含量高，在重庆、湖南、贵州、四川等地广泛种植[3]。

药材采收是中药材生产中的重要环节，直接影响着药材的质量与产量[4]。灰毡毛忍冬花蕾簇生，花期短，采收集中方便是其主要的农艺特征，一般采收期8～12 d，但若采收不适时，会导致减产或影响药材质量。本研究分别选取开花型和花蕾型2种灰毡毛忍冬品种，观测不同时期花蕾的外观形态、产量和质量，以及一日内不同采摘时期的花蕾质量，从而确定灰毡毛忍冬的适宜采收期。

1 材料

开放型灰毡毛忍冬选用野生混合种群，取自重庆市秀山县钟灵乡马路村种植基地；花蕾型灰毡毛忍冬选用“渝蕾1号”良种，取自秀山县清溪镇南龙村种植基地。不同花蕾发育阶段和一日内不同采摘时段均取至长势良好、无病虫害、有代表性的单株，每处理重复3次。采摘的花蕾及时采用蒸气杀青干燥方法加工[5]。

绿原酸、咖啡酸和木樨草苷对照品购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110753-200413，110885-200102，111720-200602。3，5二咖啡酰奎宁酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙对照品购自成都曼思特生物科技有限公司，纯度>98%（HPLC）。流动相为色谱纯，其余试剂为分析纯。

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A二极管阵列检测器，Lcsolution色谱工作站；Alltech ELSD 2000ES蒸发光散射检测器。

2 方法

2.1 绿原酸、咖啡酸、木樨草苷、3，5二咖啡酰奎宁酸含量测定

2.1.1 色谱条件 phenomenex Synergi Hydro-RP 80A C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 4 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液，梯度程序：0～10 min，14%A；10～20 min，14%～20%A；20～30 min，20%A；30～45 min，20%～90%A；45～60 min，90%～14%A。流速1.0 mL・min-1；检测波长327 nm，322 nm，354 nm。

2.1.2 线性关系考察 精密称取绿原酸、咖啡酸、木樨草苷和3，5二咖啡酰奎宁酸对照品适量，分别加甲醇制成含绿原酸0.49 g・L-1，咖啡酸0.21 g・L-1，木犀草苷0.24 g・L-1，3，5二咖啡酰奎宁酸0.16 g・L-1对照品溶液。分别吸取以上4种对照品溶液各0.5，1，5，10，20 μL进样分析。以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，绿原酸回归方程Y= 2.275 079e-007X+2.765 879 7e-003，r=0.999 9，线性范围为24.5～980 g・L-1；咖啡酸回归方程Y=2.591 248e-007X+6.364 204e-003，r=0.999 8，线性范围为10.5～420 g・L-1；木樨草苷回归方程Y=1.793 146e-007X-9.420 646e-004，r=0.999 9，线性范围为12～480 g・L-1；3，5二咖啡酰奎宁酸回归方程Y=3.189 356 2e-007X+2.734 681 5e-003，r=0.999 9，线形范围为8～320 g・L-1；

2.2 灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量测定

2.2.1 色谱条件 参照《中国药典》2010年版第一部山银花项下含量检测方法[1]。

2.2.2 线性关系考察 精密称取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，加50%甲醇溶解制成灰毡毛忍冬皂苷乙0.7 g・L-1、川续断皂苷乙0.2 g・L-1的对照品溶液。

分别精密吸取对照品溶液2，10 μL，供试品溶液5～10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法计算绿原酸的含量，以外标两点法对数方程计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量。

3 结论

3.1 不同发育阶段花蕾外观形态和产量

通过田间调查发现，灰粘毛忍冬从4月中下旬始现蕾到6月中旬花蕾凋谢，一般30～45 d。不同类型品种之间花蕾发育具有较大的差异，其中开花型灰毡毛忍冬花蕾发育阶段分为幼蕾期、青花期、大白期、银花期、金花期和凋花期，花蕾型灰毡毛忍冬花蕾发育阶段分为幼蕾期、青白期、黄白期和凋花期，各发育阶段的外观形态见表1。

灰毡毛忍冬各发育阶段鲜花重、干花重和折干率见表2。随着花蕾发育，开花型和花蕾型灰毡毛忍冬100朵花的鲜重和干花重均逐渐增加，折干率逐渐降低，产量逐渐增加。凋花期由于部分花蕾脱落，产量显著降低。

3.2 不同发育阶段花蕾的质量

灰毡毛忍冬花蕾的不同发育阶段质量检测结果见表3，其中开花型灰毡毛忍冬花蕾开放前（幼蕾期、青花期、大白期）与开放后（银花期、金花期）质量存在极显著差异，青花期绿原酸质量分数最高8.44%，与幼蕾期、青色期和大白期含量无显著差异，银花期、金花期绿原酸含量极显著降低，分别达 5.56%，4.64%。3，5二咖啡酰奎宁酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量基本随花蕾发育降低，金花期含量达到最低值。不同发育阶段咖啡酸和木樨草苷含量无显著差异。

花蕾型灰毡毛忍冬绿原酸含量随花蕾发育降低，但无显著差异。3，5二咖啡酰奎宁酸和灰毡毛忍冬皂苷乙含量随发育阶段逐渐降低。不同发育阶段咖啡酸、木樨草苷和川续断皂苷乙含量无显著差异。

3.3 一日内不同采收时段花蕾质量

一日内从8：00至18：00，在不同时段分别采收开花型灰毡毛忍冬同一单株的大白期花蕾和花蕾型灰毡毛忍冬同一单株的青白期花蕾，不同采收时段花蕾的质量见表4，5。开花型灰毡毛忍冬8：00采收的花蕾绿原酸含量最高，质量分数达8.96%，中午到下午绿原酸含量降低，18：00采收质量分数回升至8.79%；8：00，10：00，18：00采收的花蕾3，5二咖啡酰奎宁酸含量极显著高于12：00，14：00，16：00采收的花蕾；一日内不同采收时段采收的花蕾咖啡酸、木樨草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量无显著差异。

花蕾型灰毡毛忍冬18：00采收的花蕾绿原酸含量最高，质量分数达7.59%，与8：00，16：00采收的花蕾绿原酸含量无显著差异，极显著高于12：00采收的花蕾；8：00，18：00采收的花蕾3，5二咖啡酰奎宁酸含量极显著高于10：00，12：00，14：00，16：00采收的花蕾；一日内不同采收时段采收的花蕾咖啡酸、木樨草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量无显著差异。

4 讨论

灰毡毛忍冬花期短，花期植株生长发育较快，花的外部形态、产量和质量都有着明显的变化，从本实验中也可看出不同采收期的灰毡毛忍冬药材产量和质量均有显著差异，因此对灰毡毛忍冬不同采收标准进行深入研究，对于药材合理采收、提高药材产量和保证质量稳定具有深远意义。

灰毡毛忍冬生产区域广、产地生产生态环境差异大，以月度和时间作标准往往不能客观准确的反映适应的采收期。以重庆市秀山县为例，低海拔地区（450 m左右）在6月初采收，中等海拔地区（700～800 m）在6月中下旬采收，高海拔地区（1 000 m以上）在6月底7月上中旬采收。同时采收期花的发育速度较快，且随气温、光照、地形、雨水等自然条件变化。曾有报道比较形态、采收期及开花率3种采集标准， 发现花蕾形态为标准最优[6]。植物物候变化的实质是植物生长发育与环境条件的关系表征，体现植物体内初生和次生代谢产物对环境变化的适应[7]。植物物候期更为适用于探讨较大区域的中药材采收共性规律[8]。

药材适宜采收期确立的基本原则是质量最优和产量最大化[7]。研究表明：2种类型的灰毡毛忍冬都随着花蕾发育，产量逐渐增加；开花型灰毡毛忍冬花蕾开放后（银花期、金花期）绿原酸含量极显著降低，开花前（幼蕾期、青色期、大白期）质量无显著差异；花蕾型灰毡毛忍冬黄白期灰毡毛忍冬皂苷乙显著降低，幼蕾期和青白期质量无显著差异。根据一日内不同时段采收的灰毡毛忍冬花蕾质量检测结果表明，不同时段采收显著影响灰毡毛忍冬药材的绿原酸和3，5-二咖啡酰奎宁酸。因此建议开花型灰毡毛忍冬的最佳采收期为大白期，采摘时段为10：00以前和18：00以后，花蕾型灰毡毛忍冬的最佳采收期为青白期，采摘时段为8：00以前和18：00以后。

目前灰毡毛忍冬的栽培品种约10余种[9-12]，各品种间存在一定的形态、品质差异，主要可分为开花型和花蕾型2种类型，本研究分别选取2种类型的典型品种做对比研究，以全面地探讨灰毡毛忍冬的适宜采收期。

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