饮料中6种防腐剂的高效液相色谱法同时测定

摘要：目的:建立高效液相色谱法同时测定饮料中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等6种防腐剂的分析方法。方法：样品用水溶解，去除蛋白后过滤待测。检测时以甲醇-乙酸铵（0.02M）为流动相，经梯度洗脱，在238nm波长处进行检测，以外标法定量。结果：6种防腐剂的加标回收率在93.2%～103.8%，相关系数0.9996～0.9999，检出限0.01～0.03g/kg。结论：本方法简单，快速，灵敏度高，重现性好，可以满足饮料中防腐剂的检测要求。

关键词：高效液相色谱法防腐剂 饮料

中图分类号：TQ文献标识码：A文章编号：1672-3791(2012)03(a)-0000-00

防腐剂是用于保持食品原有品质和营养价值为目的的食品添加剂，但是有研究表明，食用含过量防腐剂的食品有可能对人体健康产生不利影响。目前，在饮料中常见的添加剂有苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等，这六种防腐剂均有相应的国标检测方法，但并无同时测定方法。本文利用高效液相色谱对其进行了同时测定，且处理方法简单快速，分析时间短，灵敏度高。

1 材料和方法

1.1 分析方法

1.1.1样品前处理

乳饮料和果汁饮料：称取5.00g（精确到0.01g）样品于50ml比色管中，加少量水后分别加入5ml亚铁氰化钾溶液和5ml乙酸锌溶液，再用水定容至刻度，摇匀后离心，取上清液过0.22µm滤膜，待测。

碳酸饮料：称取5.00g（精确到0.01g）样品于50ml比色管中，超声脱气后用水定容至刻度，摇匀后过0.22µm滤膜，待测。

1.1.2检测条件

检测波长：238nm、柱温：30℃、进样量：10µl、流速：0.7ml/min、采用甲醇和0.02M乙酸铵溶液进行梯度洗脱，洗脱程序为：0~6min，甲醇10%；7~11min，甲醇70%；12~15min，甲醇10%；

2 结果

2．1．1 检测波长的选择 由苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸酯类的紫外吸收光谱图可知，它们的最大吸收波长分别为223.3、254.0、256.4。本方法选定238nm为最测定波长，实验结果表明，在此波长下，各组分分离良好，均可获得较为满意的吸光强度，且加标样品中，样品的溶剂峰和杂质峰对所测定组分不产生干扰。

2．1．2 流动相的选择

由于苯甲酸、山梨酸与对羟基苯甲酸酯类的极性差异较大，因此无法采用等度洗脱在合适的时间将其全部洗脱，本方法用甲醇和0.02M乙酸铵溶液进行梯度洗脱，可以获得满意的分离度，而且检测时间较短，可以在15min内同时检测六种防腐剂。标准品谱图见图1

2．1．3 方法的线性

用超纯水分别配制浓度为0.01mg/ml、0.02 mg/ml 、0.03 mg/ml 、0.05 mg/ml 、0.1 mg/ml的6种防腐剂混合标准溶液，测定峰面积，以峰面积Y和溶液浓度X（mg/ml）作标准曲线，得线性回归方程及相关系数R。（见表1）

2．1．4 方法的灵敏度和检出限

在以上方法条件下，以3倍基线噪音确定方法的检出限，得出苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的检出限分别为0.01g/Kg、0.003g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg。

2．1．5 回收率和精密度

在空白样品中分别添加三个不同浓度的混合标准溶液，各平行测定六次，计算回收率和精密度。测得苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的回收率范围分别为93.5%~102.9%、94.1%~101.5%、95.3%~101.2%、94.8%~103.8%、95.7%~100.6%、93.2%~99.3%。精密度分别是1.03%、1.22%、0.92%、

0.64%、1.35%、0.86%。

2．2样品分析

应用本方法对市场采集的各种饮料样本共30个进行检测，其中碳酸饮料部分检测出含苯甲酸，果汁饮料中部分检出含山梨酸，对羟基苯甲酸酯类均未检出。

3 小结

本方法能同时测定饮料中可能添加的6种防腐剂，缩短了工作时间，且灵敏度高，分离度好，适合于日常检验。