吉林松原地区CD36基因单体型与2型糖尿病的相关性研究

【摘要】 目的 对吉林松原郭尔罗斯自治县蒙古族和汉族人群中2型糖尿病（T2MD）患者CD36内含子3（intron 3）[TG]重复序列基因多态性分布情况进行研究， 探讨该基因多态性与2型糖尿病的相关性。方法 应用 PCR和直接测序法对40例正常组和193例2型糖尿病患者CD36内含子3 [TG]重复序列基因多态性进行分析。结果 ①CD36内含子3 [TG]重复序列有5种单体型， 即[TG]重复次数为11、12、13、15、16次。②正常组与2型糖尿病患者之间CD36内含子3 [TG]重复序列各种单体型及基因型分布差异无统计学意义（P>0.05）。③蒙古族与汉族之间CD36内含子3 [TG]重复序列各种单体型及基因型分布差异无统计学意义（P>0.05）。④CD36内含子3 [TG]重复序列13次的单体型及基因型在蒙古族人群中正常组与2型糖尿病患者之间分布差异具有统计学意义（P

【关键词】 2型糖尿病；CD36；基因单体型

【Abtract】 Objective To investigate the distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat polymorphism in type 2 diabetes mellitus （T2DM） patients and to expore the correlation between the genetic polymorphism and type 2 diabetes mellitus （T2DM）. Methods Genotypes of CD36 were typed in 193 T2DM patients and 40 normal person by polymerase chain reaction（PCR） and PCR-direct sequencing. Results ①Research Results found CD36 intron 3 （TG） there were five kinds of haplotype repeat sequences， namely [TG] repetitions for 11， 12， 13， 15， 16.②The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between normal control group and T2DM group （P>0.05）.③The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat genotype or haplotype has no significant difference between the Moggol nationality and the Han nationality （P>0.05）. ④The distribution of CD36 intron 3 [TG] repeat for 13 times exist statistically significant difference in the Moggol nationality between normal control group and T2DM group （P

【Key words】 T2DM； CD36； Genetic haplotype

糖尿病是以高血糖为主要特征的内分泌代谢性疾病， 随着社会进步和生活方式的改变， 糖尿病的发病率越来越高， 2000年全球糖尿病患者 2.85亿， 估计到2030年全球将近5亿糖尿病患者， 其中中国约占全球的1/3。遗传因素在糖尿病的发生发展中占有重要的地位， CD36是一种多功能的清道夫受体， 与脂质代谢及动脉硬化的发生有关， 可激活细胞释放前炎症反应性细胞因子、白介素等[1]。作者对吉林松原前郭尔罗斯自治县蒙古族与汉族的健康人群和2型糖尿病患者之间CD36内含子3 [TG]重复序列多态性在分布频率进行研究， 旨在探讨该基因多态性与2型糖尿病的相关性。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 随机选取在本院健康体检者40名：蒙古族23名、汉族17名， 年龄岁作为正常对照组， 临床和实验室检查均正常， 排除肝、肾、内分泌和心脑血管疾病。选取2004年12月～2012年12月在本院内分泌科住院的T2DM患者193例（蒙古族86例、汉族107例）， 年龄岁作为T2DM组。T2DM诊断依据1999年WHO制定的诊断标准。所有受检对象均为吉林松原前郭尔罗斯自治县地区无血缘关系个体。均签署知情同意书。

1. 2 研究方法

1. 2. 1 基因组DNA提取 采用Promega公司生产的Wizard@ Genomic DNA Purification Kit提取DNA。取被受检者肘静脉血2 ml到加有EDTA抗凝剂的真空采血管中， 并立刻颠倒混匀， 置于离心机中3000转离心10 min， 取300 μl白细胞加入到1.5 ml离心管中， 按照细胞裂解、核裂解、RNA去除、沉淀蛋白质、析出DNA、清洗DNA、水化DNA的过程分别加入试剂， 进行DNA的提取。所得DNA经紫外分光光度计定量， 并置于-70℃保存备用。

1. 2. 3 PCR扩增产物直接测序 PCR产物用凝胶电泳DNA回收试剂盒纯化回收DN段后， 送北京奥莱博生物技术有限责任公司， 完成PCR扩增产物测序。

1. 3 统计学方法 应用SPSS13.0软件进行分析。3 讨论

CD36是B类清道夫受体， 具有多种生物学功能， 参与包括炎症、止血、免疫清除、脂质代谢和动脉硬化在内的许多生理和病理过程[2， 3]。国内外研究已证明CD36与动脉硬化的形成有关。Susztak等[4]在研究糖尿病肾病的发病机制中发现CD36的表达伴随近端小管上皮细胞凋亡以及小管上皮细胞变性， 高糖环境刺激近端小管上皮细胞可表达CD36。Sampson等[5]研究发现2型糖尿病患者发现2型糖尿病单核细胞上CD36表达上调， 认为2型糖尿病的发生与CD36表达增强有一定关系。郑寿焕等[6， 7]研究认为， 糖尿病患者血清中sCD36水平明显升高， 且sCD36水平与血糖波动有关， CD36内含子3[TG]重复序列基因多态性与T2DM患者的发生有关。Griffin等[8]证实了葡萄糖可以通过增强CD36 mRNA的翻译过程上调其蛋白质的表达， 从而进一步上调CD36的表达。体外实验也已经证明[9]， 高血糖环境可上调CD36表达。Aase Handberg[10]等也用ELISA的方法检测2型糖尿病患者血浆中sCD36的含量， 发现2型糖尿病患者血浆中sCD36是正常组的4.5倍， 并与胰岛素抵抗有关。

本研究发现总体人群正常组与2型糖尿病患者之间CD36内含子3 [TG]重复序列各种单体型及基因型分布差异无统计学意义蒙古族与汉族之间CD36内含子3 [TG]重复序列各种单体型及基因型分布差异无统计学意义，但是CD36内含子3 [TG]重复序列13次的单体型在蒙古族人群中正常组与2型糖尿病患者之间分布差异有统计学意义并且CD36内含子3 [TG]重复序列13/n的基因型在蒙古族人群中正常组与2型糖尿病患者之间分布比较。根据研究结果考虑CD36内含子3 [TG]重复序列13次的单体型是蒙古族发生2型糖尿病的危险基因。

综上所述， 本研究认为CD36内含子3 [TG]重复序列13次的单体型是蒙古族发生2型糖尿病的危险基因， 而CD36内含子3 [TG]重复次数对CD36的表达及对2型糖尿病的发生和发展中的影响机制尚不明确， 需进一步研究。

参考文献

[1] Mora C， Navarro JF. The role of inflammation as a pathogenic factor in the development of renal disease in diabetes. Curr Diab Rep， 2005，5（6）：399-401.

[2] 高磊， 鲍羿， 洪斌， 等.B类清道夫受体CD36的研究进展.医学分子生物学杂志， 2006，3（1）：61-64.

[3] 李旭升， 陈国荣， 胡野， 等.糖尿病大鼠巨噬细胞CD36基因表达水平.中国病理生理杂志， 2007，23（11）：2272-2273.

[4] Susztak K， Ciccone E， McCue P， et al. Multiple metabolic hits converge on CD36 as novel mediator of tubular epithelial apoptosis in diabetic nephropathy. PLoS Medicine， 2005，2（2）：152-161.

[5] Sampson MJ，Davies IR， Braschi S，et al.Increased ex-pression of a scavenger receptor （CD36） in monocytes from subjects with type 2 diabetes. Athcrosclcrosis， 2003，167（1）：129-134.

[6] 郑寿焕， 李金姬， 张春子，等.CD36基因多态性对2型糖尿病患者血脂和CRP的影响.山东医药， 2011，51（7）：4-6.

[7] 郑寿焕， 张春子， 杨秀丽，等. 葡萄糖浓度及CD36基因多态性对单核细胞表面CD36表达水平的影响.中国实用内科杂志， 2012（6）：23-24.

[8] Griffin E， Re A，Hamel N， et al.Alink between diabetes and at herosclersis： Glucose regu-lates expression of CD36 at the level of translstion . Net med， 2001（7）：840-846.

[9] 杜鹃， 张素华.清道夫受体与糖尿病.国外医学内分泌学分册， 2004， 24（6）：397-399.

[10] LinksHandberg A， Levin K， Hjlund K，et al. Identincation of the oxidized low-density lipoprotein scavenger receptor CD36 in plasma： a novel marker of insulin resistance. Circulation， 2006， 114（11）： 1169-1176.