CDNF治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

【前言】CDNF治疗大鼠脊髓损伤的实验研究由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。1.1 一般资料 选择健康的Wista雌性大鼠75只，其平均体重为268.49 g，将上述大鼠随机分为3组。将其中25只设置为假手术组（A组），25只设定为单纯脊椎损伤组（B组），25只设定为采用CDNF治疗脊髓损伤组（C组）。A组大鼠不损伤其脊髓，仅进行脊髓半切损伤模型。B组大鼠注...

[摘要] 目的 研究cdnf对于大鼠脊髓损伤的治疗效果。方法 选择Wista雌性大鼠75只，将其中25只设置为假手术组（A组），25只设定为单纯脊椎损伤组（B组），25只设定为采用CDNF治疗脊髓损伤组（C组）。在大鼠的T9～10节段使用脊髓半横断法制作脊髓损伤的模型，其中在B组大鼠的脊髓损伤处使用生理盐水，在C组大鼠的脊髓损伤处使用CDNF。在手术后对3组大鼠的进行应用行为学评分，对大鼠的脊髓损伤的修复情况进行组织形态学观察，采用免疫组织化学方法观察各组大鼠的GFAP表达的变化。 结果 C组大鼠的应用行为学评分明显高于B组，但是仍然低于A组。C组的GFAP的表达低于B组。C组大鼠的GFAP阳性细胞低于B组，差异有统计学意义（P

[关键词] CNDF；大鼠脊髓损伤；实验研究

[中图分类号] R744 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2013）04（c）-0050-02

脊髓损伤的特点就是致残率、耗费较高，但是对于其治疗方法仍然没有确切的结论，给社会带来重大的负担。目前，随着神经营养分子（即CDNF）研究的深入，脊髓损伤治疗也出现了新的转机。神经营养分子具有调节神经细胞的生长与发育的功效，是一种促进神经元修复的小分子蛋白。该文选择了75至雌性大鼠，研究CDNF对于大鼠脊髓损伤的治疗效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择健康的Wista雌性大鼠75只，其平均体重为268.49 g，将上述大鼠随机分为3组。将其中25只设置为假手术组（A组），25只设定为单纯脊椎损伤组（B组），25只设定为采用CDNF治疗脊髓损伤组（C组）。A组大鼠不损伤其脊髓，仅进行脊髓半切损伤模型。B组大鼠注入生理盐水。对C组大鼠注入10？LCDNF。

1.2 脊髓半切损伤动物模型

称取上述大鼠的具体重量，使用30 mg/kg的水合氯醛进行腹腔注射麻醉。静待大鼠至全麻状态，使其使大鼠俯卧在手术台上，并对其四肢进行捆绑固定，剪除手术区的毛发。确定第10胸椎的位置，对皮肤进行消毒后铺设一次性手术巾。将大鼠的背部皮肤以及皮下组织切开，使其T8～11处的棘突和椎板更充分的暴露出来。采用持针器把棘突和关节突进行摘除，使脊髓节段暴露更充分。对胸髓一侧采取横向剖开，并把硬模直至中央导水管切断，使用卫星注射器，对大鼠的脊髓进行2 mm缺损伤害。在手术后，大鼠的一侧肢体会出现痉挛性抽搐并出现瘫痪症状，这说明脊髓的版企鹅损伤模型已经制作成功，随后可以对大鼠进行止血、缝合皮肤等操作。

1.3 术后管理

在手术后使用清洁笼具对大鼠进行单独喂养，进行青霉素注射，预防大鼠出现感染。同时每天挤压大鼠的腹部，帮助其进行排便直至膀胱功能恢复。此外，还要定时对大鼠进行翻身，防止其出现褥疮。在手术后不同时间段内对大鼠进行应用行为学评分。

1.4 免疫组织化学染色与电镜标本制作

在手术结束后14 d时，对大鼠进行腹腔的麻醉，将其胸部解剖开后以左心房为入口进行置管，若果其右心房有午夜透明液体流出，则即刻使用10%的中尔马林溶液对大鼠进行关注固定。关注30 min后，显露手术阶段，取出2 cm左右的损伤脊髓，标记后置入10%甲醛溶液进行固定。

在手术后8周，将动物进行腹腔麻醉，剖开胸部后以生理盐水进行灌注。生理盐水灌注200 mL后采用40/L的戊二醛溶液继续灌注。固定2 h后，取出损伤节段的脊髓组织，固定24 h后，使用环氧树脂进行包埋后制作超薄切片，电镜下观察。

1.5 统计方法

采用SPSS17.0对收集到的数据进行统计学分析。计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，进行t检验。

2 结果

2.1 大鼠的应用行为学评分

对手术后的大鼠进行应用行为学评分，发现A组大鼠的评分为满分，在进行脊髓半切损伤之后大鼠的一侧后肢则丧失了运动功能。在手术后1周，B组大鼠也出现侧后肢的挛缩，C组患者没有出现后肢挛缩。在手术后2～4周时，B组大鼠和C组大鼠均出现不同程度的恢复。在手术后4～8周后，恢复的幅度变小。手术2周后B组和C组大鼠的应用学评分出现明显差异，差异有统计学意义（P

表1 大鼠的应用行为学评分

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2.2 3组大鼠的GFAP表达情况

对免疫组织进行化学染色观察，A组大鼠中GFAP也出现了GFAP阳性细胞表达。在脊髓损伤的大鼠脊髓细胞标本中，能够发现GFAP的表达无规律且明显增多。C组大鼠的GFAP阳性细胞低于B组，差异有统计学意义（P

表2 3组大鼠的GFAP表达情况对比

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2.3 电镜下脊髓损伤的病理变化

在电镜观察下，B组大鼠的神经元细胞核出现碎裂，在脊髓神经纤维髓鞘断裂分层的部位没有出现新生的轴突。B组大鼠神经元细胞核也出现碎裂，髓鞘断裂分层，仅有少量的再生轴突，其细胞质中线粒体数量含量较少。

3 讨论

脊髓损伤一般分为2个阶段，即原发性和继发性。脊髓损伤之后，会出现出血性坏死、水肿、炎症反应、细胞结构的破坏等。在脊髓损伤出现的早期，血管就会出现破坏，脊髓的灰质内的一部分神经元、白质内部的少突出胶质细胞出现坏死。这些坏死的细胞就会释放出大量的自由基，这些自由基会氧化邻近的细胞，损伤细胞膜，破坏细胞内的重要结构。在脊髓损伤的过程中，还会出现严重的炎性反应。因此而激活损伤处的小神经胶质细胞，该类细胞可吞噬脊髓损伤区坏死的细胞以及碎片。这个过程炎性反应可造成脊髓组织缺血，致使脊髓组织发生坏死，使细胞坏死范围扩大。

该研究证明，C组大鼠的应用行为学评分明显高于B组，但是仍然低于A组。C组的GFAP的表达低于B组。C组大鼠的GFAP阳性细胞低于B组，差异有统计学意义（P

[参考文献]

[1] 程雷，刘奔，范伟强，等.CDNF治疗大鼠脊髓损伤的实验研究[J].中国医药指南，2012（28）：53-55.

[2] 李晓宁，宋金柱，苏志强.夹脊电针对大鼠脊髓损伤后NGF和BDNF表达的影响[J].哈尔滨工业大学学报，2007，39（12）：2014-2016.

[3] Evans JR，Barker RA.Neurotrophic factors as a therapeutie target for Parkinson’S disease[J].Expert Opin Ther Targets，2008，12（4）：437-447.

（收稿日期：2013-03-09）