薄层扫描法测定积雪苷片中积雪草苷的含量

摘 要 目的：采用薄层扫描法测定积雪苷片中积雪草苷含量。方法：样品经适当提取后点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10）下层溶液为展开剂，10%硫酸乙醇为显色剂，检测波长为λS=530nm，参比波长为λR=400nm。结果：平均加样回收率为100.7%，RSD=3.2%。结论：此方法简便、灵敏、准确，可用于该制剂的质量控制。

关键词 积雪苷片 积雪草苷 薄层扫描法

Abstract Objective：To ddtdrmine the comtent of Asiaticoside in Jixuedaipian by TLC-scanning.Methods：The extractrion solution of the preparation was analysed on silica gel-G plate,using the CHCl3-MeOH-H2O（65：35：10）as the floor down solution developing system，10%H2SO4-EeOHSolution.as the spray veagent,then detected by dual wavelength scanning （λS=530nm，λR=400nm）.Results：The average recoverys is 100.7%RSD=3.2%.Conclusions：The method is simple、sensitive、auuvate and available for quality control of Jixuedaipian.

Key word Jixuedaipian；Asiaticoside；TLC-scanning

资料与方法

材料：CS-930薄层扫描仪，定量毛细管，KQ-250B型超声波清洗器，试剂均分析纯，积雪草苷对照品，积雪苷片，薄层层析用硅胶G，自行机械涂板（玻璃板20cm×10cm），105℃活化1小时。

制备：①对照品溶液的制备：精密称取积雪草苷对照品9.84mg，置10ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。②供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约2片重），置5ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。③阴性对照溶液的制备：取除积雪草外的其他成分，按处方配制阴性对照适量，称取约2片重，再按供试品溶液制备的方法，制成阴性对照溶液。

薄层层析与扫描：分别吸取供试品溶液4μl、对照品溶液2μl及阴性对照溶液4μl，交叉点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10）10℃以下放置12小时后下层溶液为展开剂，展开8cm，Rf=0.5，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显清晰，取出，上面覆盖相同大小的玻璃板，四周用胶布固定，进行光谱扫描，从图中可以看出，显色后的斑点在530nm波长处有最大吸收，故选择λS=530nm，λR=400nm，SX=3。再λS=530nm，λR=400nm对斑点进行色谱扫描，结果见图1。

方法学考察：①线性关系考察：精密吸取对照品溶液(0.984mg/ml) 1、2、3、4、5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件进行薄层层析与扫描测定。测定积分值A为纵坐标，点样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A=1728938C+822，r=0.9991。从回归方程可以得知，该直线基本通过原点，固采用外标一点法测定本制剂中积雪草苷含量，积雪草苷浓度在0.984～4.920mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。②稳定性考察：对显色后的同一个斑点，每隔一定时间扫描1次，记录峰面积，其平均值为2780.4，RSD=2.0%（n=6），结果表明本品在90分钟内稳定性较好。③精密度考察。仪器精密度：对显色后的同一斑点,反复扫描5次，记录峰面积，RSD=0.5%。点样精密度：取同一对照品溶液，精密吸取2μl点于硅胶G板上，连续点5次，记录峰面积，RSD=2.8%，结果表明本法精密度较好。④重现性考察。取同一批号的样品（批号1）20片，精密称定，研细，精密称取适量（约2片重），置5ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。独立测定5份，计算含量，结果每片含积雪草苷（mg）分别为3.006、3.004、3.063、3.032、2.916，平均含量：3.004mg，RSD=1.8%。⑤加样回收试验。精密称取已知含量的样品细粉适量（约1片重），(批号4，每片含积雪草苷3.35mg，平均片重0.9547g)做基底，置5ml量瓶中，精密加入积雪草苷对照品溶液适量(浓度0.984mg/ml)，再加甲醇适量，超声处理使溶解并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，计算回收率。平均回收率为100.7%，RSD=3.2%，结果表明回收率较好。

样品的含量测定：见表1。

讨 论

样品中含有积雪草苷和羟基积雪草苷，曾采用的展开系统有正丁醇-醋酸-水(4：1：1)上层溶液、正丁醇-醋酸乙酯-水(4：1：5)上层溶液、三氯甲烷-甲醇-水(7：3：0.5)同一展开系统展开二次以及三氯甲烷-甲醇-水(65：35：10)10℃ 以下放置12小时以上的下层溶液，结果最后的展开系统Rf值适宜,分离效果好，斑点集中，测定结果满意。