宫瘤消片提取工艺的研究

[摘要] 目的：确定宫瘤消片最佳水提取工艺,为该制剂开发成中药新药提供依据。方法：以芍药苷的提取量和浸膏得率作为评价指标，采用正交试验优选仙鹤草、牡蛎、土鳖子、党参、白术、吴茱萸、白花蛇舌草水提方法。结果：取其白花蛇舌草等七味加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h；第2次加10倍量水，煎煮1 h。结论：本法经济、合理、可行。

[关键词] 宫瘤消片；芍药苷；提取方法；正交试验

[中图分类号] R943[文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2010）10（c）-055-03

Study on technology of extraction of Gongliuxiao Tablets

ZHANG Di1, MA Xiaolu1, ZHANG Guogang2*

(1.Institute for Drug Control of Liaoyang City, Liaoyang 111000, China; 2.Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)

[Abstract] Obejective: To provide the basis for the development of new drug by determination the optimal extraction process of Gongliuxiao Tablets with water. Methods: The conditions for the extraction process of Hairyvein Agrimonia Herb, oysters, eupolyphaga sinensis walker, Pilose asiabell root, Largehead Atractylodes Rhizome, Medicinal Evodia Immature Fruit and Spreading Hedyotis Herb with water were optimized by orthogonal test, employing the content of peoniflorin and extracting ratio as indexes. Results: Studied on the extraction: the optimum water extracting of Spreading Hedyotis Herb and other herbs condition was 12 times and 10 times of water for 2 cycles, the extracting time was 1.5 hour and 1 hour each time. Conclusion: The established process of Gongliuxiao Tablets is economic, rational and feasible.

[Key words] Gongliuxiao Tablets; Peoniflorin; Extraction method; Orthogonal test

子宫肌瘤是女性生殖器官最常见的良性肿瘤，由平滑肌和结缔组织组成，故又称子宫平滑肌瘤。常见于30～50岁妇女，40～50岁为高峰年龄组，20岁以下少见。目前对于子宫肌瘤的治疗方法，仍以子宫切除术占首位。因此，对于未婚、未育及希望保留正常月经功能者，具有抗感染作用的口腔药物的研制一直受到人们的广泛重视。宫瘤消片是以牡丹皮、香附（制）、三棱、莪术、仙鹤草、牡蛎、土鳖子、党参、白术、吴茱萸、白花蛇舌草经提取制成的中药制剂。本文以芍药苷的含量和浸膏得率为指标，采用正交试验法优选宫瘤消片的最佳水提方法，为该制剂开发成中药新药提供实验依据[1-2]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国）：Agilent 1100泵、Agilent 1100 DAD检测器、Agilent 1100色谱工作站；Sartorius BP211D电子天平（感量0.l mg、0.0l mg）；USC-502超声波清洗器。

1.2试药

芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200526）；宫瘤消片（自制），甲醇（色谱纯，天津市四有生物医学技术有限公司），乙腈（色谱纯，天津市四有生物医学技术有限公司），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法学考察

2.1.1 色谱条件

试验参照国家食品药品监督管理局宫瘤消胶囊标准，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％ 磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长：230 nm。流速：1.0 ml/min，柱温：30℃，以Agilent-C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）为分析柱，进行试验研究，结果芍药苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离，芍药苷与其相邻色谱的分离度大于1.5；按芍药苷峰计算，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

2.1.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，用甲醇溶解并制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备

取本品10片，研细，取1.163 9 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μl，按正文色谱条件进行分析，测定峰面积，结果见表1。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明芍药苷进样量在0.2～1.0 μg范围内，呈良好的线性关系。回归方程为Y=1 050.2X+44.93（r=0.999 2），见图1。

表 1 标准曲线测定结果

Tab.1 The result of standardized curve

图1 标准曲线

Fig.1 Standardized curve

2.1.5 精密度试验

取本品（批号：050601）20片，研细，称取粉末1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μl，连续进样5次，供试品峰面积平均值为336.88，RSD=1.42%，结果表明精密度良好。

2.1.6 重复性试验

取本品（批号：050601）20片，研细，称取5份，各1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，测定色谱峰面积，含量平均值为0.486 7 mg/g，RSD=1.29%，结果表明重复性良好。

2.1.7 稳定性试验

取本品（批号：050601）20片，研细，称取粉末1.163 g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别在制备样品后的0、2、4、8，12 h进样测定，测得芍药苷峰面积的平均值为330.46，RSD=1.21%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.1.8 回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：050601，含量：0.553 8 mg/g）5份，分别精密加入对照品溶液1 ml，浓度为0.1 mg/ml，按上述条件依法测定。本法平均回收率为99.26%，RSD=1.65%，表明回收率的重现性较好。结果见表2。

2.1.9 样品含量测定

按上述芍药苷测定方法对十批中试及试生产成品的芍药苷含量进行了测定，每批平行测定2次，结果见表3。

表 3 样品含量测定结果

Tab.3 Content determination results of samples

2.2 提取方法的筛选

2.2.1 因素水平的确定

以芍药苷含量和出膏率为指标，重点考察提取溶媒的用量、提取次数和提取时间3个因素，每个因素选择3个水平，按L9（34）正交表设计试验。因素水平见表4。

表 4 因素水平表

Tab.4 Factors level table

2.2.2考察指标的测定

2.2.2.1 芍药苷的含量测定精密量取样品液2 ml，置具塞锥形瓶中，加甲醇20 ml，按上述方法测定。

2.2.2.2 出膏率的测定精密量取样品液20 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，照干燥失重法（《中国药典》2005年版一部附录Ⅸ G）测定。

2.2.3正交试验设计及方差分析

见表5～8。

2.2.4小结

上述方差分析结果表明，以芍药苷提取量为考察指标，因素A无显著性差异（P＞0.10），因素B无显著性差异（P＞0.10），因素C有显著性差异（P＜0.05），根据直观分析结果，最佳水提取工艺为A3B3C3。

以出膏率为考察指标，因素A无显著性差异（P＞0.10），因素B无显著性差异（P＞0.10），因素C有显著性差异（P＜0.05），根据直观分析结果，最佳水提取工艺为A3B3C3。

综合上述两方面结果，最佳水提取工艺为A3B3C3，即本品的最佳提取工艺为：取其白花蛇舌草等七味加水煎煮2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h；第2次加10倍量水，煎煮1 h。

2.2.5 提取工艺验证

根据宫瘤消片提取工艺优选结果，连续投料三批，三批结果平行，说明提取工艺条件基本稳定。结果见表9。

表 9 验证工艺

Tab.9 validation technology

3 讨论

本实验室对宫瘤消片中芍药苷的水提取方法进行了研究，实验中采用正交试验法，分别考察了加水量、提取时间、提取次数对芍药苷提取率和浸膏得率的影响。浸膏是片剂中也是其他提取液中药物发挥疗效的物质基础，用它来比较提取工艺的优劣，虽然直观简便，但是杂质的浸出也会影响浸膏得率，而且并不能标志有效成分的量，故还选择了芍药苷作为考察指标，因为此药材中的芍药苷是抗菌的有效成分，对多种致病菌有较强的抑制和杀灭作用。

试验中发现，药材加热时间不宜过长，且要减压干燥。最后得出提取的优选条件为A3B3C3，即药材用水提取2次，第1次加12倍量水，煎煮1.5 h；第2次加10倍量水，煎煮1 h。提取工艺是现代制备工艺的关键和重点，而采用正交试验优选提取工艺时，评价标准的选定，即用什么指标才能真正评价出工艺的优劣又是难点。在本实验中，采用浸膏得率、芍药苷含量2个指标进行评价，全面且具有代表性，较能客观内在地反映提取工艺的优劣。

[参考文献]

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（收稿日期：2010-06-02）